Горячая линия:
Москва
Центральный офис:
Контакты Дилеры
онлайн-справочник

Распоряжение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 29.12.2015 № 188

Распоряжение Коллегии Евразийской экономической комиссии
от 29 декабря 2015 г. N 188
"О проекте решения Совета Евразийской экономической
комиссии "Об утверждении Правил проведения исследований
биологических лекарственных средств Евразийского
экономического союза""

 

1. Одобрить проект решения Совета Евразийской экономической комиссии "Об утверждении Правил проведения исследований биологических лекарственных средств Евразийского экономического союза" (прилагается) и представить его для рассмотрения Советом Евразийской экономической комиссии.

2. Настоящее распоряжение вступает в силу с даты его опубликования на официальном сайте Евразийского экономического союза в информационно-телекоммуникационной сети "Интернет".

 

Председатель
Коллегии Евразийской
экономической комиссии
В.Христенко
 
Проект

 

 

ЕВРАЗИЙСКАЯ ЭКОНОМИЧЕСКАЯ КОМИССИЯ
СОВЕТ
 
РЕШЕНИЕ
 
"__" ________ 20 __ г.                 N ______                     г. _________

 

Об утверждении Правил проведения исследований
биологических лекарственных средств Евразийского
экономического союза

 

В соответствии со статьей 6 Соглашения о единых принципах и правилах обращения лекарственных средств в рамках Евразийского экономического союза от 23 декабря 2014 года, пунктом 88 приложения N 1 к Регламенту работы Евразийской экономической комиссии, утвержденному Решением Высшего Евразийского экономического совета от 23 декабря 2014 г. N 98, и Решением Высшего Евразийского экономического совета от 23 декабря 2014 г. N 108 "О реализации Соглашения о единых принципах и правилах обращения лекарственных средств в рамках Евразийского экономического союза" Совет Евразийской экономической комиссии РЕШИЛ:

1. Утвердить прилагаемые Правила проведения исследований биологических лекарственных средств Евразийского экономического союза.

2. Настоящее Решение вступает в силу по истечении 10 календарных дней с даты вступления в силу Соглашения о единых принципах и правилах обращения лекарственных средств в рамках Евразийского экономического союза от 23 декабря 2014 года либо с даты вступления в силу Протокола, подписанного 2 декабря 2015 г., о присоединении Республики Армения к Соглашению о единых принципах и правилах обращения лекарственных средств в рамках Евразийского экономического союза от 23 декабря 2014 года в зависимости от того, какая дата является более поздней, но не ранее чем по истечении 10 календарных дней с даты официального опубликования настоящего Решения.

 

Члены Совета Евразийской экономической комиссии:

 

От Республики Армения
В.Габриелян
 
От Республики Беларусь
В.Матюшевский
 
От Республики Казахстан
Б.Сагинтаев
 
От Кыргызской Республики
О.Панкратов
 
От Российской Федерации
И.Шувалов
 
 
Утверждены
Решением
Совета Евразийской
экономической комиссии
от ___________ 20___ г. N __

 

ПРАВИЛА
ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ БИОЛОГИЧЕСКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ
СРЕДСТВ ЕВРАЗИЙСКОГО ЭКОНОМИЧЕСКОГО СОЮЗА
 
I. ВВЕДЕНИЕ
 

Настоящие Правила разработаны на основе актов, входящих в право Евразийского экономического союза (далее - Союз), и международных рекомендаций (Всемирной организации здравоохранения, Международной конференции по гармонизации технических требований при регистрации лекарственных препаратов по медицинскому применению, Европейского агентства по лекарственным средствам) в целях создания и поддержания системы взаимного признания государствами - членами Союза (далее - государства-члены) результатов фармацевтических и биологических испытаний, доклинических и клинических исследований лекарственных препаратов для их дальнейшей регистрации. Основополагающим принципом проведения исследований биологических лекарственных препаратов является выполнение требований международных договоров и актов, составляющих право Союза, или законодательства государств-членов в данной области (при отсутствии нормативно-правового регулирования вопросов в праве Союза).

Выбор вида и объема фармацевтических и биологических испытаний, доклинической и клинической оценки новых лекарственных препаратов должен основываться на актуальной научной информации.

Основной целью настоящих Правил является поддержание высокого уровня проведения фармацевтических и биологических испытаний, доклинических и клинических исследований, их единообразия. Настоящие Правила предназначены для упрощения сбора и представления данных, прилагаемых к заявлениям о регистрации биологических лекарственных препаратов в государствах-членах. Настоящие Правила следует применять одновременно с международными договорами и актами в сфере обращения лекарственных средств, составляющими право Союза (в том числе с правилами надлежащих фармацевтических практик Союза).

Требования настоящих Правил распространяются на разработчиков, исследователей и производителей лекарственных средств, а также держателей регистрационных удостоверений лекарственных препаратов и их доверенных лиц, уполномоченные органы в сфере обращения лекарственных средств и экспертные организации государств-членов.

Проведение фармацевтических и биологических, доклинических и клинических исследований биологических лекарственных препаратов должно проводиться с учетом особенностей, связанных как со свойствами и природой этих препаратов (инактивированные и живые вакцины, биотехнологические лекарственные препараты на основе рекомбинантных белков, аллергены, препараты из плазмы человека, гетерологичные сыворотки и др.), так и со сферой их применения в клинической практике.

 

КЛАССИФИКАЦИЯ БИОЛОГИЧЕСКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ
 

К биологическим лекарственным препаратам относятся иммунологические (иммунобиологические) лекарственные препараты, биотехнологические лекарственные препараты, лекарственные препараты, полученные из плазмы человека, препараты пробиотиков (эубиотиков), препараты бактериофагов, высокотехнологические лекарственные препараты, а также лекарственные препараты, содержащие следующие активные фармацевтические субстанции нерекомбинантного происхождения, произведенные или выделенные из биологических источников (тканей, жидкостей и органов человека, сырья животного происхождения, микроорганизмов или продуктов их жизнедеятельности): хорионический гонадотропин человека, менотропин, урофоллитропин, стрептокиназа, стрептодорназа, урокиназа, апротинин, гиалуронидаза, протамин, ботулинические токсины, БЦЖ для внутрипузырной инстилляции, гепарин, хондроитина сульфат, далтепарин, эноксапарин, надропарин, тинзапарин, ревипарин, парнапарин, цертопарин, данапароид натрия, панкреатин, аспарагиназа, анти-Т-лимфоцитарный иммуноглобулин для медицинского применения животного происхождения, поликлональный овечий антидигоксин, интерферон альфа человека, бычий инсулин, свиной инсулин, пепсин, трипсин, химотрипсин, глюкагон животного происхождения, лизаты бактерий, низкомолекулярные фракции крови телят, церебролизин, фосфолипиды животного происхождения, коллагеназа, дезоксирибонуклеаза животного происхождения, фибринолизин животного происхождения, компоненты клеток микроорганизмов.

Приведенный перечень не является закрытым, в соответствующих случаях к биологическим лекарственным препаратам могут быть отнесены лекарственные препараты, содержащие фармацевтические субстанции, не указанные выше.

Настоящие Правила не распространяются на цельную кровь, плазму и клетки крови человека (за исключением плазмы крови, приготовленной по методу, включающему промышленный процесс), а также на антибиотики, если в других актах, входящих в право Союза, не указаны ссылки на настоящие Правила.

 

II. ОПРЕДЕЛЕНИЯ
 

Для целей настоящих Правил используются понятия, которые означают следующее:

"аллерген" - молекула, способная индуцировать IgE-ответ и (или) аллергическую реакцию I типа;

"банк клеток" - набор контейнеров с однородным по составу содержимым, который хранят в определенных условиях. Каждый контейнер содержит аликвоту одного пула клеток;

"биоаналогичный лекарственный препарат", "биоаналог", "биоподобный лекарственный препарат", "биосимиляр" - биологический лекарственный препарат, который содержит версию действующего вещества зарегистрированного биологического оригинального (референтного) препарата и для которого продемонстрировано сходство (подобие) на основе сравнительных исследований с оригинальным (референтным) препаратом по показателям качества, биологической активности, эффективности и безопасности;

"биологические лекарственные препараты" - лекарственные препараты, действующее вещество которых произведено или выделено из биологического источника и для характеристики свойств и контроля качества которых необходимо сочетание биологических и физико-химических методов анализа с оценкой производственного процесса и методов его контроля;

"биотехнологический лекарственный препарат" - лекарственный препарат, произведенный при помощи биотехнологических процессов и применения методов с использованием технологии рекомбинантной ДНК, контролируемой экспрессии генов, кодирующих выработку биологически активных белков, гибридомных технологий, моноклональных антител или других биотехнологических процессов;

"вакцина" - лекарственный препарат, предназначенный для формирования активного иммунитета с целью профилактики инфекционных заболеваний у человека;

"вирус" - внутриклеточно реплицирующиеся инфекционные агенты, которые потенциально патогенны, обладают только одним видом нуклеиновой кислоты (либо РНК, либо ДНК), не способны расти и не подвергаются бинарному делению, размножаются в форме своего генетического материала;

"вирусоподобные частицы" - структуры, различимые под электронным микроскопом, морфология которых сходна с морфологией известных вирусов;

"главный банк клеток", "ГБК" - аликвота из единого пула клеток, которая, как правило, получается из выбранного клона клеток в заданных условиях, распределяется по множеству контейнеров и хранится в заданных условиях. ГБК применяют для получения всех рабочих банков клеток. При отсутствии соответствующего обоснования испытания, проводимые на новом ГБК (полученном из предшествующего первоначального клона клеток или ГБК), должны совпадать с результатами испытаний предшествующего ГБК;

"иммуногенность" - способность лекарственного препарата (как правило, биологического) вызывать иммунный ответ на себя и родственные белки или приводить к иммунологически опосредованным нежелательным клиническим явлениям;

"иммуногенность вакцины" - фармакологический эффект вакцины, заключающийся в выработке иммунного ответа на определенный возбудитель инфекционного заболевания или продукт его жизнедеятельности и определяющий профилактическую эффективность вакцины;

"иммунологический лекарственный препарат", "иммунобиологический лекарственный препарат" - лекарственный препарат, предназначенный для формирования активного или пассивного иммунитета, или диагностики наличия иммунитета, или диагностики (выработки) специфического приобретенного изменения иммунологического ответа на аллергизирующие вещества. К иммунологическим (иммунобиологическим) лекарственным препаратам относятся вакцины, анатоксины, токсины, сыворотки, иммуноглобулины и аллергены;

"инактивация" - снижение инфицирующей способности вируса, обусловленное его химической или физической модификацией;

"исследование процесса очистки от вирусов" - исследование очистки от вирусов, в котором используют неспецифичные, "релевантные" и (или) специфичные "модельные" вирусы для определения способности процесса производства элиминировать и (или) инактивировать вирусы;

"исследование сопоставимости" - исследование, направленное на подтверждение отсутствия клинически значимых различий между биологическим лекарственным препаратом после внесения изменений в технологию (процесс) его производства относительно биологического лекарственного препарата, произведенного по неизмененной технологии;

"исследование сопоставимости в рамках оценки биоподобия" (biosimilarity exercise) - комплекс фармацевтических и биологических испытаний, доклинических и клинических исследований, направленных на подтверждение отсутствия клинически значимых различий между оригинальным (референтным) и биоаналогичным (биоподобным) лекарственными препаратами в процессе разработки последнего;

"клетки-продуценты" - клетки, используемые для производства препарата;

"клеточная линия" - тип клеточной популяции, образующейся путем последовательного субкультивирования популяции первичных клеток, из которой можно сформировать банк клеток;

"клеточный возраст in vitro", "продолжительность жизни клеток in vitro" - период с момента оттаивания контейнера с ГБК до получения производственной емкости, измеряемый истекшим хронологическим временем, степенью удвоения популяции клеток или числом пассажей клеток при субкультивировании с помощью определенной процедуры разведения культуры;

"клеточный субстрат" - клетки, используемые для производства продукта;

"лекарственные препараты, полученные из плазмы" - лекарственные препараты, произведенные промышленным способом из компонентов крови человека. К данным препаратам относятся альбумины, факторы свертывания крови и иммуноглобулины человеческого происхождения;

"линия диплоидных клеток", "диплоидная клеточная линия" - клеточная линия, которая обладает конечной продолжительностью жизни in vitro, и в которой хромосомы являются парными (эуплоидными) и структурно идентичными хромосомам видов, из которых эти клетки были получены;

"неспецифичный "модельный" вирус" - вирус, который используется для установления характеристик процесса очистки от вирусов, целью которого является характеристика общей способности процесса производства элиминировать и (или) инактивировать вирусы, то есть характеристика устойчивости (надежности) процесса очистки;

"неэндогенный вирус" - вирус, попавший в ГБК из внешних источников;

"опытно-промышленная серия", "пилотная серия", "валидационная серия" - серия активной фармацевтической субстанции или лекарственного препарата, изготовленная способом, который полностью соответствует и воспроизводит промышленный способ производства;

"очистка от вирусов" - устранение вируса путем физической элиминации частиц вируса или инактивация его инфицирующей способности;

"перевиваемая клеточная линия" - клеточная линия, обладающая бесконечной возможностью роста. Такую клеточную линию часто называют бессмертной;

"посторонний вирус" - непреднамеренно привнесенный контаминирующий вирус;

"предельный для производства клеточный возраст in vitro" - величина, равная или не превышающая предлагаемую продолжительность культивирования клеток при указанных для производственного процесса условиях;

"препараты аллергенов" - лекарственные препараты, содержащие аллергены или производные аллергенов, применяющиеся с целью диагностики in vivo или лечения аллергических заболеваний;

"препараты бактерофагов" - препараты на основе вирусов, способных проникать в бактериальную клетку, размножиться в ней, вызывать ее лизис или переход в состояние лизогении (фагоносительства);

"промышленная серия" - серия фармацевтической субстанции или лекарственного препарата, произведенная промышленным способом с использованием производственного оборудования на производственной площадке, указанной в регистрационном досье лекарственного препарата;

"рабочий банк клеток", "РБК" - банк клеток, который состоит из аликвот гомогенной суспензии клеток, полученных при культивировании ГБК в заданных условиях;

"релевантный" вирус" - вирус, который используется для исследований анализа процесса и который либо является выявленным вирусом, либо принадлежит к виду вирусов, которые контаминировали или с высокой вероятностью могут контаминировать клеточный субстрат или какие-либо реактивы или материалы, использованные в процессе производства;

"родительские клетки", "исходные клетки", "клетки-хозяина" (host-cells) - клетки, используемые для создания клеточного субстрата или промежуточной клеточной линии. В случае использования экспрессионных систем на основе микроорганизмов родительские клетки обычно называются клетками хозяина. В отношении гибридом родительская клетка также называются сливающимися клетками;

"специфичный "модельный" вирус" - вирус, являющийся близкородственным выявленному или подозреваемому вирусу (принадлежит тому же роду или семейству), обладающий схожими с ним физическими и химическими свойствами;

"элиминация вирусов" - физическое отделение вирусных частиц от целевого продукта;

"эндогенный вирус" - вирус, геном которого является частью генеративной линии вида, являющегося источником клеточной линии, и который ковалентно интегрирован в геном животного, из которого получена родительская клеточная линия. В целях настоящих Правил к этой категории относятся преднамеренно введенные неинтегрированные вирусы, например, вирус Эпштейна-Барр, используемый для иммортализации клеточного субстрата, или папилломавирус коров.

В настоящих Правилах используются следующие сокращения:

ВИЧ - вирус иммунодефицита человека

ВОЗ - Всемирная организация здравоохранения

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография

ГБК - главный банк клеток

ГЗТ - гиперчувствительность замедленного типа

ГНТ - гиперчувствительность немедленного типа

ДИ - доверительный интервал

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ИФА - иммуноферментный анализ

ЛД50 - доза, вызывающая гибель 50 % животных

МЕ - международная единица

ПУР - план управления рисками

ПЦР - полимеразная цепная реакция

РНК - рибонуклеиновая кислота

ТГЭ - трансмиссивная губчатая энцефалопатия

ФД - фармакодинамика

ФК - фармакокинетика

ЦНС - центральная нервная система

ЦПКП - целевой профиль качества лекарственного препарата

HRQoL - связанное со здоровьем качество жизни

Ig - иммуноглобулин

IL - интерлейкин

TGF

noname.png - трансформирующий фактор роста бета

VAS - визуальная аналоговая шкала

Th - лимфоциты Т-хелперы

 

III. ОСНОВНОЙ ТЕКСТ ПРАВИЛ
 
Глава 1
 
ВЫДЕЛЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА КЛЕТОЧНЫХ СУБСТРАТОВ,
ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ПРИ ПРОИЗВОДСТВЕ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ
(БИОЛОГИЧЕСКИХ) ПРЕПАРАТОВ
 
1. ВВЕДЕНИЕ, ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
 

Ряд проблем, связанных с качеством получаемых из клеток биологических лекарственных препаратов, обусловлены наличием посторонних контаминантов или свойствами клеток, используемых в производстве препарата. Для препаратов, получаемых с применением технологии рекомбинантной ДНК, кроме того, характерны проблемы качества, связанные с экспрессирующей конструкцией клеточного субстрата. Таким образом, свойства клеточного субстрата и процессов, затрагивающих клеточный субстрат, в результате могут влиять на качество лекарственного препарата и безопасность его применения. Кроме того, эффективный контроль качества этих препаратов требует надлежащей проверки всех манипуляций с клеточным субстратом.

Настоящая глава дополняет другие главы настоящих Правил и рекомендации Евразийской экономической комиссии (далее - Комиссия), что позволяет обеспечить всесторонний подход к оценке результатов качества, связанных с биологическими параметрами технологии получения препаратов из культур клеток Metazoa и микроорганизмов.

Действие настоящей главы распространяется на клеточные субстраты, в отношении которых создана система банков клеток. Для целей настоящих Правил под клеточным субстратом понимаются микробные клетки или линии клеток, выделенные из источников человеческого или животного происхождения, обладающие полным потенциалом, необходимым для продуцирования в условиях in vivo или ex vivo биотехнологических (биологических) препаратов для медицинского применения. Реактивы для диагностического применения в условиях in vitro в настоящей главе не рассматриваются. Источники клеточных линий животного происхождения включают в себя все организмы, принадлежащие к подцарству Metazoa. Описаны перевиваемые клеточные линии с неограниченной продолжительностью жизни in vitro, диплоидные клетки с ограниченным сроком жизни in vitro, а также клеточные субстраты микробиологического происхождения (бактерии, грибы, дрожжи и другие одноклеточные организмы).

Настоящая глава включает в себя общие вопросы по стандартам получения клеточных линий человека и животных, микробных клеток, а также вопросы формирования и характеристики банков клеток, используемых для производства биологических препаратов, рекомендации по получению данных, которые необходимо включить в регистрационное досье при подаче заявления на регистрацию биологического препарата в государствах-членах.

Настоящая глава касается биологических препаратов, полученных из клеток, культивируемых из банков клеток, за исключением таких микробных метаболитов, как антибиотики, аминокислоты, углеводы и прочие низкомолекулярные вещества. Банки клеток, используемые для получения препаратов для генной терапии или вакцин, должны соответствовать требованиям, указанным в настоящей главе. Некоторые биологические препараты (например, определенные вирусные вакцины) производят на первичных клеточных культурах, полученных непосредственно из тканей или органов животных. Первичные клетки не используются для создания банка клеток, и поэтому настоящие Правила на них не распространяется. Однако в приложении приводятся другие подходы, которые могут быть применимы к таким первичным клеткам.

 

2. ТРЕБОВАНИЯ К КЛЕТОЧНЫМ СУБСТРАТАМ
 
2.1. Источник, история и получение клеточного субстрата
 

Необходимо представить первичную документацию, в которой описывается общая информация о клеточном субстрате, используемом для производства биологического препарата, а также о каждой родительской клеточной линии, из которой клеточный субстрат был выделен полностью или частично. Мероприятия, проводимые на этапе научных исследований и разработок клеточного субстрата, могут оказывать существенное влияние на риски, связанные с использованием в производстве конкретного клеточного субстрата. Представленная в связи с этим информация облегчает всестороннюю оценку рисков, позволяющую гарантировать качество и безопасность применения препарата.

Все производимые с клеточным субстратом манипуляции необходимо подробно документировать на протяжении всего процесса разработки. Описание истории клетки является одним из множества инструментов, используемых при установлении характеристики клеточного субстрата. Как правило, недостаточность данных об истории клеток не может служить препятствием для регистрации лекарственного препарата, но отсутствие достаточного объема данных может в результате привести к повышенной зависимости от других методов, используемых для характеристики клеточного субстрата.

2.1.2. Происхождение, источник и история клеток.

Необходимо указать источник клеток (лабораторная коллекция или коллекция культур), из которого был получен клеточный субстрат, и привести соответствующие ссылки на научный литературный источник. Предпочтительны данные, полученные непосредственно из исходной лаборатории. Если эта информация недоступна, можно использовать литературные данные.

Для клеточных линий человека необходимо описать следующие характеристики первоначального донора: происхождение ткани или органа, этническое и географическое происхождение, возраст, пол и общее физиологическое состояние. При наличии следует привести данные о состоянии здоровья или анамнез донора наряду с результатами любого тестирования донора на наличие патогенных агентов. Поскольку для диплоидных фибробластов человека возраст донора может влиять на продолжительность жизни клеточной линии in vitro, эти данные (при их наличии) следует представлять. При использовании линии животных клеток в описании источника необходимо указать виды, породы, условия разведения, происхождение ткани или органа, географическое происхождение, возраст, пол, а также результаты тестирования на наличие патогенных агентов и общее физиологическое состояние первичного донора.

При использовании микроорганизмов производители должны указать их вид, штамм и известные генотипические и фенотипические характеристики организма, из которого был выделен клеточный субстрат. Производители также должны привести данные по патогенности, токсигенности и прочую информацию о биологической опасности (если она имеет место).

Должна быть документально оформлена история культивирования клеток. Наряду с процедурами культивирования клеток in vitro и всеми процедурами создания клеточных линий (например, использование физических, химических, биологических методов или введение нуклеотидных последовательностей) необходимо описать метод, первоначально использованный для выделения клеток. Необходимо описать все имевшие место генетические манипуляции или генетический отбор (селекцию). Вся доступная информация, относящаяся к идентификации, характеристикам этих клеток и результатам их испытания на наличие эндогенных или посторонних агентов, тоже должна быть предоставлена.

Для перевиваемых клеточных линий, полученных от Metazoa, обычно бывает достаточно определить продолжительность культивирования путем оценки либо числа удвоений популяции, либо числа субкультивирований при определенном коэффициенте разведения или времени культивирования (в днях). Для линий диплоидных клеток, обладающих ограниченным сроком жизни in vitro, важна точная оценка числа удвоений на протяжении всех стадий исследования, разработки и производства. Для клеток микроорганизмов считается достаточным представление документации, содержащей сведения по определению частоты субкультивирования после создания клеточного субстрата.

В отношении получения клеточного субстрата заявители должны провести тщательный анализ процессов, при использовании которых возможен занос инфекционных агентов. Должно быть представлено описание компонентов культуральной среды, особенно информация, касающаяся воздействия на клетки таких компонентов человеческого и животного происхождения, как сыворотка, ферменты, гидролизаты или другие живые клетки. Описание должно включать источник, метод приготовления и контроля, результаты испытаний и обеспечение качества. Могут быть приведены соответствующие ссылки на литературные источники, если таковые доступны. Эта информация позволит провести детальный анализ возможных путей проникновения посторонних агентов из указанных источников и станет составной частью анализа соотношения "польза - риск" для препарата.

 

2.1.3. Создание клеточного субстрата (получение клеток-продуцентов).

Ключевой стадией является выбор подходящей родительской клеточной линии. Для рекомбинантных препаратов родительской клеточной линией служит, как правило, клеточная линия - реципиент, не подвергшаяся трансфекции. В этой ситуации рекомендуется использование охарактеризованных банков родительских (исходных) клеток. Охарактеризованный банк родительских (исходных) клеток может представить данные, на основании которых может быть проведена оценка качества ГБК, особенно в случаях, когда множество клеточных субстратов образовано из одного и того же типа родительских клеток. Например, клеточная линия миеломы может быть заготовлена в качестве родительской (исходной) клеточной линии для гибридомы.

При окончательной разработке требуемых характеристик в процессе создания клеточного субстрата возможно использование одной или нескольких специфических процедур. К ним относятся, например, слияние (гибридизация) клеток, трансфекция, отбор клонов, выделение колоний, клонирование, амплификация генов и адаптация к специфическим условиям культивирования или средам. Информация, касающаяся методологии, используемой при разработке клеточного субстрата, может помочь в обеспечении понимания истории клеточного субстрата. Некоторые клеточные субстраты, например, диплоидные фибробласты человека, могут не требовать интенсивной обработки или предварительного клонирования перед созданием банка клеток.

В рекомбинантных препаратах клеточным субстратом служат трансфецированные клетки, содержащие требуемые последовательности, которые были клонированы из единственной клетки предшественника. При создании клеточных субстратов с использованием технологии рекомбинантной ДНК необходимо учитывать рекомендации главы 5.2 натоящих Правил. Для нерекомбинантных препаратов (в том числе нерекомбинантных вакцин) клеточным субстратом служат клетки из линии родительских (исходных) клеток, отобранных для создания ГБК, без дальнейшей модификации. Для препаратов, получаемых из гибридом, клеточным субстратом служит гибридомная клеточная линия, полученная путем слияния родительской клеточной линии миеломы с другими родительскими клетками, например, с иммунными клетками селезенки.

 
2.2. Создание банка клеток
 

Одним из наиболее важных преимуществ использования серийно субкультивируемых клеток для производства биотехнологических (биологических) препаратов является возможность иметь охарактеризованный общий источник для каждой производственной серии, то есть иметь законсервированный банк клеток. Производители могут создавать свои собственные банки клеток или получать их из внешних источников. Производители обязаны обеспечивать качество каждого банка клеток и проводить с каждым из них необходимые испытания.

 

2.2.1. Система банков клеток.

Концепция двухуровневой структуры банка клеток, в которой ГБК используется для РБК, как правило, принимается в качестве наиболее практичного подхода, обеспечивающего получение клеточного субстрата для непрерывного производства препарата. Производители должны описать стратегию обеспечения непрерывного получения клеток из банка (банков), включая ожидаемую скорость расходования банка клеток при производстве, ожидаемые интервалы между созданием новых банков клеток и показатели, по которым аттестуются (характеризуются) банки клеток.

Как правило, сначала создается ГБК, обычно непосредственно из исходного клона или из предварительного банка клеток, полученного из исходного клона. Приготовление банка клеток из клонов не является обязательным для определенных типов клеток (например, диплоидных клеток, продолжительность жизни которых in vitro ограничена), или при наличии других технических факторов, делающих клонирование клеток непрактичным, или в случаях, когда неклонированная клеточная популяция уже достаточно гомогенна для предполагаемого применения.

Для создания РБК используются один или более контейнеров с клетками из ГБК. Именно РБК, как правило, используется непосредственно для нужд производственного процесса. По мере необходимости из ГБК создаются дополнительные РБК. Свежеприготовленный РБК должен быть соответствующим образом квалифицирован путем установления его характеристик и проведения испытаний.

ГБК и РБК могут отличаться друг от друга по ряду параметров, например, компонентами культуральной среды и условиями культивирования. Кроме того, условия культивирования, используемые при приготовлении ГБК и РБК, могут отличаться от используемых в процессе производства. Если изменения процесса культивирования клеток не оказывают неблагоприятного воздействия на качество препарата, повторное клонирование клеток или повторное создание ГБК или РБК не требуется. Необходимо убедиться, что охарактеризованный банк обеспечивает получение продукта постоянного качества.

Допускается использование одноуровневого банка, состоящего только из ГБК и не содержащего РБК, например в случае, если для производства препарата каждый год требуется относительно небольшое число контейнеров с клетками.

В некоторых микробных экспрессирующих системах для каждой новой серии контейнеров с клеточным субстратом проводится новая трансформация с использованием аликвот тщательно испытанных банков клеток хозяина и банков плазмид для каждой новой трансформации. Кроме того, проводится испытание каждого банка трансформированного клеточного субстрата. Такой банк трансформированного клеточного субстрата рассматривается как ГБК и используется в качестве источника клеточного субстрата для производственного процесса. Банки клетки хозяина, банки плазмид и ГБК хранятся с помощью соответствующих методов консервации. Эта альтернативная система считается достаточной, поскольку трансформация бактерий и дрожжей, как правило, представляет собой легко воспроизводимый процесс, в отличие от процедуры, применяемой для трансфекции клеток Metazoa. Производители должны предоставлять информацию о клетках хозяина, молекулах рекомбинантной ДНК (таких как плазмиды), методе трансформации и создании банка клеток, а также о результатах исследований по характеристике их свойств.

 

2.2.2. Процедуры создания и поддержания банка клеток.

Необходимо предотвратить использование контаминированного клеточного субстрата (или банка клеток) в процессе производства препарата и избежать снижения доступности или производства препарата, либо потерь времени при разработке, возникающих в результате необходимости повторного создания банка клеток, который оказался непригодным вследствие контаминации. Ни один режим испытаний банка клеток не позволяет выявлять все возможные контаминанты, поэтому использование описанных предупредительных мер во время создания банка клеток важно для обеспечения достаточной уверенности в отсутствии контаминации, а также для создания надежного источника клеточного субстрата.

Производители должны описать тип используемой системы создания банка, размер банка клеток, тип контейнера (флаконы, ампулы или другие подходящие емкости) и используемую систему укупорки, методы приготовления банка клеток, включая используемые криопротекторы и среду, а также условия криоконсервации и хранения.

Производители должны описать процедуры, используемые для предотвращения микробной контаминации и перекрестной контаминации другими типами клеток, присутствующими в лаборатории, а также описать процедуры, позволяющие отслеживать емкости банка клеток. К этим мероприятиям относится описание системы документации, а также системы маркировки, которая может выдержать процесс консервации, хранения и восстановления без потери информации, нанесенной на контейнер.

Производители должны описать технологию создания и поддержания банка клеток. Как правило, клетки готовятся для банка путем наращивания объемов культивирования за счет постепенного увеличения числа сосудов или использования сосудов большего размера до тех пор, пока не получится пул клеток, которого будет достаточно для создания необходимого числа контейнеров с клетками для банка клеток. Для того чтобы обеспечить однородный состав содержимого каждого контейнера, каждый пул клеток для создания банка должен быть приготовлен путем объединения клеток из всех сосудов для культивирования (при использовании более одного сосуда).

Аликвоты клеток, суспендированных в среде для консервации, переносятся из объединенного пула в стерильные контейнеры, которые затем укупориваются и хранятся в необходимых условиях. Например, клетки животных в средах, содержащих криопротектор, замораживаются в укупоренных контейнерах при заданных контролируемых условиях, а затем переносятся на хранение в жидком азоте, или его парах, или при соответствующих сверхнизких температурах. В зависимости от используемого организма допускается применять иные методы консервации и хранения. Однако они должны позволять поддерживать такую степень жизнеспособности клеток после разведения, которая была бы и постоянной и пригодной для производственных целей.

Для обеспечения постоянного, непрерывного производства лекарственных препаратов производители должны предусмотреть меры по защите от аварийных ситуаций, которые могут привести банк клеток в непригодное для использования состояние. К таким ситуациям относятся: пожары, перебои в электроснабжении и человеческий фактор. Производители должны описать планы предупредительных мероприятий для таких случаев. Например, к подобным мероприятиям можно отнести хранение контейнеров банка клеток в нескольких морозильных камерах, использование резервных источников питания, использование систем автоматизированного заполнения жидким азотом для контейнеров хранения, хранение части ГБК и РБК в удаленных помещениях или регенерация ГБК.

Исходной точкой для оценки возраста клеток in vitro в процессе производства должен служить момент оттаивания одного или более контейнеров с ГБК. В отношении линий диплоидных клеток продолжительность жизни клеток in vitro следует оценивать исходя из скорости удвоения клеточной популяции. Для диплоидных клеток следует определять допустимый уровень удвоения клеточной популяции, то есть уровень, при котором наступает биологическое старение.

 

2.3. Общие принципы установления характеристик
и испытания банков клеток

 

Установление характеристик и испытание клеточных субстратов из банков клеток представляет собой критическую составляющую контроля биологических и биотехнологических препаратов. Установление характеристик ГБК позволяет производителю оценить этот источник с точки зрения наличия клеток других клеточных линий, посторонних агентов, эндогенных агентов и молекулярных контаминантов (например, токсинов или антибиотиков из организма хозяина). Задача подобного тестирования состоит в подтверждении подлинности, чистоты и пригодности клеточного субстрата для использования в производстве. В некоторых случаях целесообразно проведение таких дополнительных испытаний, как проверка на туморогенность или кариотипирование. Программа проведения испытаний, выбранная для конкретного клеточного субстрата, может варьироваться в зависимости от биологических свойств клеток (например, потребности в питательных веществах для роста), истории культивирования клеточного субстрата (включая использование биологических реагентов человеческого или животного происхождения) и наличия подходящих аналитических методик. Объем исследований при установлении характеристик клеточного субстрата может влиять на вид или масштаб стандартных испытаний, необходимых на последующих стадиях производства. Для каждого ГБК производители должны однократно проводить испытания клеточного субстрата на подлинность и чистоту, а также испытание стабильности в ходе культивирования клеток для каждого подлежащего регистрации лекарственного препарата. Кроме того, испытания на чистоту и подлинность следует проводить однократно для каждого РБК. Заявители также должны принять во внимание положения главы 2 настоящих Правил. Необходимо провести соответствующие испытания из числа описанных ниже, их описание и полученные результаты необходимо представить в составе регистрационного досье.

При установлении характеристик клеточных линий, содержащих экзогенные экспрессирующие конструкции, созданные с использованием технологии рекомбинантной ДНК, следует руководствоваться также положениями главы 5.2 настоящих Правил. С помощью аналогичных методов целесообразно также провести анализ кодирующих последовательностей в некоторых клеточных линиях, при получении которых рекомбинантная ДНК не использовалась, если генные последовательности охарактеризованы и хорошо изучены. Однако не обязательно проводить исследования последовательностей, кодирующих такие сложные природные продукты, как, например, антигены микробных вакцин, моноклональные антитела из гибридом, семейства родственных генных препаратов.

При установлении характеристики клеточного субстрата и проведении испытаний производителям рекомендуется использовать современные методы и технологические достижения (при их доступности) при условии, что специфичность, чувствительность и прецизионность новых методов, по крайней мере, эквивалентна таковым параметрам существующих методов.

Производители могут проводить установление характеристик РБК вместо ГБК при условии представления соответствующиего обоснования.

 

2.3.1. Испытания на подлинность.

Чтобы удостовериться в подлинности клеток в банке клеток, необходимо провести соответствующие испытания. При проверке подлинности могут быть оценены как фенотипические, так и генотипические характеристики, которые были установлены при разработке препарата. Не обязательно проводить все возможные испытания, однако объем выполненных испытаний должен быть обоснован. Испытания на подлинность обычно проводятся в отношении ГБК. Кроме того, ограниченный объем испытаний на подлинность, как правило, проводится в отношении каждого РБК.

 

2.3.1.1. Клетки Metazoa.

Морфологический анализ клеток человека или животных, выращиваемых в виде прикрепляющихся культур, может быть полезным инструментом в сочетании с другими тестами. В большинстве случаев для подтверждения происхождения клеточных линий человека или животных достаточно проведения изоферментного анализа, однако возможно проведение других тестов в зависимости от истории клеточной линии. Для верификации вида организма, из которого были получены клетки, могут быть использованы другие методики, включая, например, дифференциальное окрашивание хромосом (бэндинговая цитогенетика) или использование видоспецифичных антисывороток. Альтернативным подходом является демонстрация наличия уникальных маркеров, например, использование бэндинговой цитогенетики для обнаружения уникальной маркерной хромосомы или анализ ДНК для обнаружения геномного полиморфизма (например, полиморфизм длин рестрикционных фрагментов, вариабельность числа тандемных повторов или повторы геномных динуклеотидов). Достаточным испытанием на подлинность считается и установление вида животного, являющегося источником, и наличие изученных уникальных маркеров для клеточной линии. Экспрессия требуемого продукта может служить дополнением к подтверждению подлинности.

 

2.3.1.2. Клетки микроорганизмов.

Для большинства клеток микроорганизмов анализ роста на селективных средах обычно достаточен для подтверждения подлинности клетки-хозяина на уровне вида для банка клеток хозяина и банка трансформированных клеток. В случае E. coli, когда могут быть использованы разные штаммы, в качестве дополнительных методов испытания на подлинность следует рассматривать такой метод определения биологических характеристик, как фаготипирование. Для банков плазмид оценка подлинности может быть выполнена с помощью анализа экспрессирующей конструкции в соответствии с главой 5.2 настоящих Правил. Экспрессия требуемого продукта также может быть использована для подтверждения подлинности экспрессирующей конструкции.

 

2.3.2. Испытания на чистоту.

Важнейшим (критичным) аспектом разработки клеточной линии и создания банка клеток является оценка биологической чистоты ГБК и РБК, то есть доказательство того, что они свободны от посторонних микробных и клеточных контаминантов. При планировании и проведении этих испытаний необходимо учитывать влияние селективных агентов и антибиотиков на обнаружение посторонних микробных контаминантов.

 

2.3.2.1. Клетки Metazoa

Для проведения испытаний по оценке микробиологической чистоты (бионагрузки) (наличие бактерий и грибов) следует использовать индивидуальные контейнеры (1 % от общего числа контейнеров, но не менее 2 контейнеров) для ГБК и РБК. В отношении остальных показателей следует использовать методологию испытаний микробиологических показателей или стерильности, предусмотренную Фармакопей Евразийского экономического союза (далее - Фармакопея Союза) или иных фармакопеях в соответствии с Концепцией гармонизации фармакопей государств - членов Евразийского экономического союза, утвержденной Решением Коллегии Евразийской экономической комиссии от 22 сентября 2015 года N 119.

ГБК и РБК должны быть испытаны на содержание микоплазм. Считаются достаточными методики Фармакопеи Союза, включающие в себя посев на агар и мясо-пептонный бульон, а также метод индикаторной клеточной культуры. Как правило, для проведения испытания достаточно клеток из одного контейнера. Для линий клеток немлекопитающих животных могут быть пригодны альтернативные методы контроля и (или) условия проведения испытаний. Для выбора соответствующей методики производители могут проконсультироваться с уполномоченными органами государств-членов.

Для обнаружения возможной контаминации вирусами должна быть разработана стратегия контроля клеточных субстратов на наличие вирусов, которая позволяет обнаруживать широкий спектр вирусов с использованием подходящих скрининг-тестов и соответствующих специфичных испытаний исходя из истории культивирования клеточной линии. Заявители должны применять требования главы 2 настоящих Правил. В отношении классов препаратов, не охваченных главой 2 настоящих Правил, следует руководствоваться рекомендациями ВОЗ по использованию животных клеток.

Чистота клеточных субстратов может быть нарушена в результате контаминации другими клеточными линиями, происходящими от того же или иного вида животных. Выбор необходимых испытаний зависит от существования возможности перекрестной контаминации другими клеточными линиями. В некоторых случаях необходимо поддержание роста разных клеточных линий в одной и той же лаборатории. При проведении процедур по созданию банка клеток, предусматривающих проведение открытых манипуляций, необходимо исключить одновременное проведение открытых манипуляций с другими клеточными линиями. Если в помещении, в котором осуществляется работа с банком клеток, находилась другая клеточная линия в момент, когда происходили открытые манипуляции с банком клеток (например, культивирование клеток, объединение, отбор аликвот выбранной клеточной линии), необходимо провести их испытания на наличие клеток (или продуктов, полученных из них) из второй клеточной линии. Как правило, указанные в подразделе 2.3.1 настоящей главы методы оценки подлинности клеток достаточны для выявления перекрестной контаминации другими клеточными линиями. Дополнительным подтверждением отсутствия перекрестной контаминации может быть получение препарата, соответствующего установленным требованиям.

 

2.3.2.2. Клетки микроорганизмов

При планировании и проведении специфических испытаний на посторонние микробные и клеточные контаминанты в банках клеток микроорганизмов необходимо учитывать свойства клеток в банках, возможные контаминанты, упоминаемые в научной литературе, источники, методы и материалы, используемые при культивировании клеток, а также другие организмы, находящиеся в лаборатории, в которой создается банк клеток. Например, возможно проведение визуальной оценки характеристик изолированных колоний с использованием разных микробиологических сред, поддерживающих и не поддерживающих рост клеточного субстрата. Тем не менее от производителей не требуется обязательно охарактеризовывать устойчивые мутанты клеточного субстрата, возникающие при таких исследованиях, или другие артефакты таких испытаний. Цель таких испытаний состоит, скорее, в выявлении существующих контаминантов.

 

2.3.3. Стабильность клеточного субстрата.

Одним из направлений изучения характеристик клеток является установление их пригодности для целевого использования в производстве. Существуют две проблемы, связанные со стабильностью клеточного субстрата: постоянство производства целевого продукта и сохранение производительности при его хранении в определенных условиях.

В целях оценки стабильности в ходе культивирования для производства необходимо провести исследования не менее чем в двух временных точках: первая - на клетках, подвергшихся минимальному количеству субкультивирований, вторая - на клетках при предельном для производства клеточном возрасте in vitro, описанном в регистрационном досье, или при превышении его. Предельный для производства клеточный возраст in vitro следует определять на основании данных, полученных на клетках-продуцентах, выращиваемых в опытно-промышленном или промышленном масштабе до предлагаемого предельного клеточного возраста in vitro или до возраста, превышающего его. Как правило, клетки-продуценты получают из РБК. Клетки из ГБК можно использовать при соответствующем обосновании. Оценка стабильности клеточного субстрата проводится обычно один раз для каждого регистрируемого лекарственного препарата.

Первостепенное значение имеет оценка способности клеточного субстрата обеспечить постоянство производства требуемого продукта. Вид проводимых испытаний и объекты исследований зависят от типа клеточного субстрата, продукта и методов культивирования. Для клеточных линий, содержащих экспрессирующие конструкции на основе рекомбинантной ДНК, неизменность кодирующей области экспрессирующей конструкции должна быть подтверждена на предназначенных для производства клетках, культивируемых до предельного клеточного возраста in vitro или дольше. Такая проверка проводится путем испытания нуклеотидной последовательности, для этих целей также могут быть использованы испытания продукта в соответствии с главой 5.2 настоящих Правил. Для нерекомбинантных клеточных линий, в которых кодирующая последовательность требуемого продукта уже была проанализирована на уровне ГБК или РБК, стабильность кодирующей белок последовательности на протяжении процесса производства должна быть подтверждена в клетках-продуцентах, культивированных до предполагаемого предельного клеточного возраста in vitro или дольше, путем либо испытания нуклеотидной последовательности, либо анализа очищенного белкового продукта.

Если продукт не может быть исследован указанным способом, для оценки стабильности клеточного субстрата можно использовать другие специфичные методы, например, установление морфологических характеристик, параметров роста, биохимических и иммунологических маркеров, прочих генотипических или фенотипических маркеров или выход требуемого продукта. В некоторых случаях, когда прямое сравнение характеристик ГБК с характеристиками клеток-продуцентов на предельном клеточном возрасте in vitro или при его превышении осуществить трудно или невозможно, для оценки стабильности клеточного субстрата на протяжении процесса производства можно сравнивать характеристики клеток на начальной стадии культивирования или производства с характеристиками клеток на предельном клеточном возрасте in vitro или при его превышении. Для подобного рода испытаний можно использовать такие показатели, как, например, скорость потребления кислорода или глюкозы, скорость выделения аммиака или лактата. Увеличение установленного предельного для производства клеточного возраста in vitro должно быть подтверждено данными для клеток, культивирование которых продолжалось до нового предложенного предельного клеточного возраста in vitro. Для линий диплоидных клеток должны быть представлены данные, устанавливающие конечный предел продолжительности жизни клеток из РБК в условиях, идентичных используемым при производстве.

Стабильность клеток в банке клеток в установленных условиях хранения обычно подтверждают во время производства материала для клинических исследований. Данные об определении жизнеспособности законсервированных клеток должны подтвердить, что клетки пережили процесс консервации и могут быть использованы для получения требуемого продукта. Данные о производстве материалов для клинических исследований позволяют удостовериться, что из восстановленных клеток можно получить требуемый продукт. Доступные данные должны быть отражены в документах регистрационного досье. Кроме этого, должен быть представлен план мониторинга стабильности банков клеток. Предлагаемый мониторинг допускается проводить, когда один или более контейнеров банков клеток, подвергшихся консервации, оттаивают в производственных целях при надлежащем наблюдении за постоянством свойств продукта или производства или когда один или более подвергшихся криоконсервации ГБК оттаивают с целью приготовления новых РБК (при этом новые РБК должным образом квалифицированы). Если производство не проводилось в течение длительного времени, определение жизнеспособности банка клеток, используемого в качестве источника продуцирующего субстрата, должно проводиться через определенный интервал времени, указанный в регистрационном досье. Если жизнеспособность клеточного субстрата снижается незначительно, как правило, дальнейшие испытания ГБК или РБК считаются нецелесообразными.

 

2.3.4. Кариотипирование и исследование туморогенности.

Для оценки безопасности линии диплоидных клеток или для характеристики новой клеточной линии проводятся кариотипирование и исследование туморогенных свойств в зависимости от типа клеток, свойств продукта и производственного процесса. Применение расширенного анализа для определения относительного содержания анеуплоидных клеток считается нецелесообразным. Нет необходимости проводить кариотипирование клеточных линий грызунов или новых клеточных линий, не относящихся к диплоидным. Как указано в подразделах 2.3.1 и 2.3.2 настоящей главы, цитогенетический анализ является достаточным методом для оценки подлинности клеточного субстрата или его чистоты. Повторное испытание туморогенности на клетках с уже подтвержденным туморогенным потенциалом проводить не требуется.

Кариотипирование и исследование туморогенности для высокоочищенных продуктов, не содержащих клетки, как правило, не требуются при условии, что доказано постоянство предельного остаточного содержания ДНК клетки-хозяина по результатам валидации процесса производства либо испытания серии при выпуске.

Как правило, проведение характеристики клеточного субстрата необходимо для препаратов, в которых нельзя исключить наличие живых клеток или которые подвергаются незначительной очистке в процессе выделения (например, некоторые живые вирусные вакцины). Целесообразность проведения исследований туморогенности и хромосомного анализа на новых клеточных субстратах для неочищенных препаратов следует оценивать в каждом конкретном случае. Возможность использования клеточных линий, обладающих известным туморогенным потенциалом или аномальным кариотипом, следует оценивать по соотношению "польза - риск" для каждого лекарственного препарата в случаях, когда он содержит клетки или когда степень его очистки невысока.

Если для производства препаратов используются генетически немодифицированные клетки MRC-5 или WI-38, нет необходимости характеризовать клеточные субстраты по кариологическим или туморогенным параметрам, поскольку эти клеточные линии достаточно охарактеризованы и результаты опубликованы. Тем не менее для каждого созданного РБК MRC-5 и WI-38 производители должны один раз подтвердить, что клетки, полученные при культивировании в условиях, аналогичных планируемому к использованию в производстве, являются диплоидными и имеют ожидаемую продолжительность жизни.

Для новых или ранее не охарактеризованных субстратов диплоидных клеток должно быть представлено подтверждение диплоидного кариотипа, а туморогенность должна быть установлена с использованием клеток из ГБК. Методы кариологического анализа и оценки туморогенности содержатся в документе ВОЗ "Требования к использованию клеток животных в качестве субстратов in vitro для производства биологических препаратов" (47-й отчет Экспертной комиссии ВОЗ по стандартизации в биологии, Женева, ВОЗ. Серия технических отчетов ВОЗ).

 

 

Приложение
к главе 1 Правил
проведения исследования
биологических лекарственных
средств Евразийского
экономического союза
 
ТРЕБОВАНИЯ
К ПРЕДСТАВЛЕНИЮ ИНФОРМАЦИИ О ПЕРВИЧНЫХ КЛЕТОЧНЫХ
КУЛЬТУРАХ В РЕГИСТРАЦИОННОМ ДОСЬЕ ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА
 
1. Введение
 

Изложенные в настоящем приложении принципы в большинстве случаев относятся к биотехнологическим (биологическим) препаратам, полученным из охарактеризованных банков клеток. Однако для производства ряда биологических лекарственных препаратов, в частности некоторых вирусных вакцин, используются первичные клеточные культуры.

Поскольку первичные клеточные культуры используются в рамках первого пассажа после создания из ткани источника, невозможно всесторонне охарактеризовать клетки до их использования, как это делается для клеточного субстрата, получаемого из банка клеток. Кроме того, биологические препараты, для производства которых используются первичные клеточные субстраты, зачастую не подвергаются интенсивной обработке (например, очистке). Несмотря на эти различия, для обеспечения пригодности и безопасности применения субстратов первичных клеток для создания биологических препаратов используется подход, во многих отношениях аналогичный изложенному в настоящих Правилах.

В настоящем приложении приводится информация, относящаяся к клеточному субстрату, которую следует включать в регистрационное досье лекарственного препарата, для производства которого используются первичные клетки. Эта информация разделяется на три основные категории:

информация, относящаяся к источнику ткани (органа) и другим исходным материалам животного происхождения, используемым для создания первичных клеточных субстратов;

информация, относящаяся к подготовке первичных клеточных субстратов;

информация, относящаяся к испытаниям, проводимым на первичных клеточных субстратах с целью обеспечения безопасности препарата.

 

2. Источники тканей и другие исходные материалы (сырье)
 

В регистрационном досье должна быть представлена информация о животных, используемых в качестве источника ткани для приготовления первичного клеточного субстрата. Ткань должна быть взята у здорового животного, прошедшего ветеринарный и лабораторный контроль для подтверждения отсутствия патогенных агентов. В случаях, когда это возможно, животные-доноры должны быть выращены в закрытых, беспатогенных (SPF) колониях или стадах. Животные, используемые в качестве доноров ткани, ранее не должны использоваться для экспериментальных исследований. Прежде чем использовать животных для получения клеток, они должны пройти обязательный карантинный контроль на протяжении установленного периода времени. Производители должны получить разъяснения уполномоченных органов государств-членов по вопросам, касающимся особых требований.

Необходимо представить информацию о материалах и компонентах, используемых для получения субстратов первичных клеток, включая указание типа и источника реагентов человеческого и животного происхождения. Необходимо включить описание испытаний, проведенных с компонентами животного происхождения, чтобы удостовериться в отсутствии поддающихся обнаружению контаминантов и посторонних агентов.

 

3. Приготовление первичных клеточных субстратов
 

Необходимо описать методы, используемые для выделения клеток из ткани, создания первичных культур клеток и их поддержания.

 

4. Испытания первичных клеточных субстратов
 

Необходимо описать испытания, которые проводятся на первичных клеточных субстратах для того, чтобы оценить возможность их использования в производстве. Поскольку природа первичных клеточных субстратов исключает возможность всесторонней проверки и определения характеристик перед их использованием, параллельно проводятся испытания с целью подтверждения отсутствия в этих субстратах посторонних агентов. Таким образом, испытания в целях подтверждения отсутствия посторонних агентов в таких субстратах проводятся параллельно и могут включать в себя наблюдение за производством или неинфицированными контрольными культурами до, в ходе и после осуществления процесса производства, инокуляцию культуральной жидкости после производства и из неинфицированных контрольных культур в различные восприимчивые индикаторные клеточные культуры, способные обнаруживать широкий круг вирусов с последующим изучением цитопатических изменений и испытаниями на гемадсорбирующие вирусы, а также прочие испытания на специфичные агенты (например, значимые ретровирусы) при необходимости. Дополнительные сведения о специфичных испытаниях на вирусы описаны в соответствующих национальных (региональных, международных) руководствах.

Надлежащие режимы и методы испытаний клеток, используемых в производстве конкретных препаратов, могут варьироваться в зависимости от вида животного-донора, используемого в качестве источника ткани, от возможного наличия посторонних агентов, природы препарата, его предполагаемых показаний к применению, особенностей производственного процесса и объема испытаний, проводимых на лекарственном препарате. Заявители должны объяснять и обосновывать подходы, использованные для конкретного препарата.

 

Глава 2
 
ОЦЕНКА ВИРУСНОЙ БЕЗОПАСНОСТИ БИОЛОГИЧЕСКИХ
(БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ) ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ, ПОЛУЧЕННЫХ
ИЗ КЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЙ ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО И ЖИВОТНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ
 
1. ВВЕДЕНИЕ
 

В настоящй главе описаны испытания и оценка вирусной безопасности биологических (биотехнологических) лекарственных средств, полученных из охарактеризованных клеточных линий человеческого или животного происхождения (млекопитающих, птиц и насекомых), а также описаны данные, которые необходимо представлять в составе регистрационного досье, подаваемого в уполномоченные органы государств-членов при регистрации биологического лекарственного препарата. В настоящей главе в рамках понятия "вирус" не рассматриваются такие нетрадиционные трансмиссивные агенты, как возбудители губчатой энцефалопатии крупного рогатого скота и скрейпи овец и коз.

Положения настоящей главы относятся к лекарственным средствам, полученным с применением клеточных культур из охарактеризованных банков клеток. К ним относятся лекарственные препараты, полученные с применением клеточных культур in vitro, например, интерфероны, моноклональные антитела и препараты, полученные по технологии рекомбинантной ДНК, включая рекомбинантные субъединичные вакцины. К ним относятся также препараты, полученные при помощи гибридомной технологии in vivo из асцитической жидкости. К последнему случаю предъявляются особые требования, требования по проведению тестирования клеток из охарактеризованных банков, которые были впоследствии выращены in vivo, представлена в приложении N 1 к настоящей главе.

Положения настоящей главы применимы также к прочим биологическим средствам, частные требования к которым включают в себя ссылку на настоящую главу. Настоящая глава не распространяется на инактивированные вакцины, все живые вакцины, в том числе полученные методами генной инженерии.

Риск вирусной контаминации является особенностю всех биотехнологических препаратов, получаемых из клеточных линий. Такая контаминация может быть результатом контаминации исходных клеточных линий (субстратов клеток) или случайной контаминации вирусом в течение процесса производства и может иметь серьезные клинические последствия. Предполагается, что безопасность данных препаратов в отношении вирусной контаминации может быть в разумной степени обеспечена применением программы тестирования на наличие вируса, а также оценкой эффективности удаления (элиминации) и инактивации вируса в процессе производства в соответствии с рекомендациями, изложенными ниже.

Разработано 3 основных взаимодополняющих подхода к контролю потенциальной вирусной контаминации биотехнологических продуктов:

отбор и испытание клеточных линий и другого сырья, включая компоненты среды, на отсутствие контаминации вирусами, которые могут быть инфекционными и (или) патогенными для человека;

оценка возможностей процесса производства по очистке от инфекционных вирусов;

испытания продукта на соответствующих этапах процесса производства на отсутствие контаминации инфекционными вирусами.

Всем испытаниям присуще характерное для всех количественных методик определения вирусов ограничение: способность обнаруживать низкое содержание вирусов зависит (со статистической точки зрения) от размера выборки. В связи с этим ни один метод как таковой не позволяет установить безопасность препарата. Достоверность отсутствия вирусов в готовом препарате во многих случаях основана не только на прямых методах определения их наличия, но также на подтверждении того, что процесс очистки способен элиминировать и (или) инактивировать вирусы.

Необходимые виды и объем испытаний на вирусы и исследований очистки от вирусов на различных стадиях производства зависит от различных факторов, которые необходимо учитывать на каждой стадии в индивидуальном порядке. К факторам, которые необходимо принимать во внимание, относятся степень характеристики и квалификации банка клеток, природа обнаруженных вирусов, состав питательных сред, методы культивирования, конструкции производственной площадки и оборудования, результаты испытаний на вирусы после культивирования клеток, способность процесса обеспечивать элиминацию вирусов, а также вид препарата и его предполагаемое клиническое применение.

Цель настоящей главы состоит в описании общих подходов к испытанию продукта на наличие (отсутствие) вируса, экспериментов по оценке эффективности очистки от вирусов, рекомендованного подхода к планированию испытаний на наличие вирусов и исследований по очистке от вирусов.

Производители должны использовать указания настоящей главы с учетом особенностей производимого препарата и применяемого процесса производства. Необходимо объяснить и обосновать подход, использованный производителями для построения стратегии обеспечения вирусной безопасности. В дополнение к представлению подробных данных в целях ускорения экспертизы уполномоченным органом государства-члена следует представить резюме по оценке вирусной безопасности. В такое резюме необходимо включить краткое описание всех аспектов исследований вирусной безопасности и стратегий, использованных для предотвращения контаминации вирусами, указанных в настоящей главе.

 

2. ПОТЕНЦИАЛЬНЫЕ ИСТОЧНИКИ ВИРУСНОЙ КОНТАМИНАЦИИ
 

Вирусная контаминация биотехнологических препаратов может происходить от первичного источника клеточных линий или при случайном привнесении вируса во время процесса производства.

 

2.A. Вирусы, которые могут обнаруживаться в ГБК
 

Клетки могут иметь латентную или персистирующую вирусную инфекцию (например, герпетическую) или быть заражены эндогенным ретровирусом, который может передаваться вертикально от одного поколения клеток к другому, поскольку вирусный геном встроен в клеточный. Такие вирусы могут экспрессироваться конститутивно или их экспрессия может проявиться спонтанно.

Вирусы могут попасть в ГБК следующими путями:

при получении клеточных линий от инфицированных животных;

при использовании вируса для создания клеточной линии;

при использовании таких контаминированных биологических реагентов, как компоненты сыворотки животных;

при контаминации во время работы с клетками.

 
2.B. Посторонние вирусы, которые могут быть
привнесены во время процесса производства
 

Вирусы могут быть занесены в лекарственный препарат разными путями, в том числе:

при использовании таких контаминированных биологических реагентов, как компоненты сыворотки животных;

при применении вируса для стимуляции экспрессии генов, кодирующих необходимый белок;

при использовании контаминированного материала, например, колонки для аффинной хроматографии моноклональных антител;

при использовании контаминированного вспомогательного вещества во время получения лекарственной формы;

при контаминации в процессе производства, а также во время работы с клетками и культуральными средами. Мониторинг параметров клеточной культуры может способствовать раннему выявлению потенциальной контаминации посторонними вирусами.

 

3. КВАЛИФИКАЦИЯ (АТТЕСТАЦИЯ) КЛЕТОЧНОЙ ЛИНИИ:
ИСПЫТАНИЕ НА НАЛИЧИЕ ВИРУСОВ
 

Важной частью характеристики клеточной линии для использования ее в производстве биотехнологичного препарата является надлежащее испытание на наличие вирусов.

 

3.A. Рекомендуемые испытания на наличие
вирусов для ГБК, РБК и клеток предельного для производства
клеточного возраста in vitro
 

Примеры испытаний на наличие вирусов, которые необходимо проводить однократно для клеток разных уровней, включая ГБК, РБК и клетки предельного для производства клеточного возраста in vitro приведены в таблице 1.

 
Таблица 1
 
Примеры испытаний на наличие вирусов, которые необходимо
проводить однократно для клеток разных уровней
 
Испытания
ГБК
РБК <1>
Клетки с предельным возрастом in vitro <2>
Испытания на наличие ретровирусов и других эндогенных вирусов
Инфицирующая способность
+
-
+
Электронная микроскопия <3>
+ <3>
-
+ <3>
Обратная транскриптаза <4>
+ <4>
-
+ <4>
Прочие вирус-специфичные тесты <5>
если применимо <5>
-
если применимо <5>
Испытания на наличие неэндогенных или посторонних вирусов
Испытания in vitro
+
- <6>
+
Испытания in vivo
+
- <6>
+
Испытания выработки антител <7>
+ <7>
-
-
Прочие вирус-специфичные тесты <8>
+ <8>
-
-

 

<1> В соответствии с разделом 3.A.2 настоящей главы.

<2> Клетки с предельным возрастом in vitro: клетки с предельным для производства клеточным возрастом in vitro (в соответствии с разделом 3.A.3 настоящей главы).

<3> Позволяет также выявить и другие агенты.

<4> Не является необходимым при обнаружении инфицирующей способности ретровируса.

<5> Используется для клеточных линий, о которых известно, что они были инфицированы такими агентами.

<6> Для первого РБК данное испытаний должно проводиться на клетках с предельным клеточным возрастом in vitro, полученных из этого РБК, для последующих РБК один тест in vitro и in vivo нужно проводить либо непосредственно на РБК, либо на клетках с предельным клеточным возрастом in vitro.

<7> Испытания продукции мышиных (MAP), крысиных (RAP), хомячьих (HAP) антител, которые обычно применяются для клеточных линий грызунов.

<8> Испытания для клеточных линий, полученных от человека или нечеловекообразных приматов, или других клеточных линий в зависимости от обстоятельств.

 

3.A.1. Главный банк клеток.

На клетках ГБК нужно проводить интенсивные исследования по выявлению эндогенной и неэндогенной вирусной контаминации. В отношении гетерогибридных клеточных линий, в которых один или более партнеров являются человекообразными или нечеловекообразными обезьянами, необходимо провести испытания на вирусы человекообразных и нечеловекообразных обезьян, поскольку вирусная контаминация таких клеток может представлять собой особую опасность.

Выявление неэндогенных вирусов должно включать инокуляционные испытания in vitro и in vivo и любые другие специальные методы, в том числе такие видоспецифичные тесты, как тест продукции мышиных антител (MAP - mouse antibodies production), которые подходят для определения возможных контаминирующих вирусов с учетом истории пассажей клеточной линии.

 

3.A.2. Рабочий банк клеток.

Каждый РБК как исходный клеточный субстрат для производства биотехнологического продукта необходимо проверить на наличие посторонних вирусов либо непосредственно, либо путем проведения анализа клеток предельного для производства клеточного возраста in vitro, полученных из РБК. Если проводились испытания на наличие неэндогенных вирусов в РБК, а клетки, культивируемые до предельного для производства клеточного возраста in vitro или дольше, полученные из ГБК, были испытаны на наличие посторонних вирусов, сходные испытания на первоначальном РБК проводить не обязательно. Тесты образования антител на РБК обычно не проводят. Приемлем также альтернативный подход, в соответствии с которым полный набор исследований проводят в отношении РБК, а не ГБК.

 

3.A.3. Клетки предельного для производства клеточного возраста in vitro.

Предельный для производства клеточный возраст in vitro определяется на основании данных, полученных на клетках-продуцентах, выращенных в условиях опытно-промышленного или промышленного производства до предполагаемого предельного клеточного возраста in vitro или более. Клетки-продуценты получаются путем экспансии РБК, для их получения допускается также использовать ГБК. Клетки предельного клеточного возраста in vitro необходимо однократно проверить на наличие эндогенных вирусов, которые могли быть не выявлены в ГБК и РБК. По крайней мере, однократное испытание (in vitro и in vivo) клеток предельного для производства клеточного возраста in vitro позволяет убедиться в том, что процесс производства не подвержен контаминации посторонними вирусами. Если на этом этапе выявляются посторонние вирусы, процесс необходимо подвергнуть тщательной проверке для определения причины контаминации и при необходимости полностью реорганизовать его.

 

3.B. Рекомендуемые испытания для выявления
и идентификации вирусов
 

Для выявления эндогенных и посторонних вирусов могут использоваться разные методы количественного определения. В таблице 2 приведены примеры таких испытаний, в том числе все рекомендованные для использования протоколы количественного определения, однако этот перечень не является исчерпывающим или строго заданным.

 
 
Таблица 2
 
Примеры испытаний на наличие вирусов
 
Испытания
Исследуемый материал
Способность к обнаружению
Ограничения к обнаружению
Образование антител
лизат клеток и их культуральная среда
специфичные вирусные антигены
антигены, не инфекционные для животной тест-системы
Скрининг вируса in vivo
лизат клеток и их культуральная среда
широкий спектр вирусов, патогенных для человека
возбудители, которые не реплицируются или не вызывают заболеваний в тест-системах
Скрининг вируса in vitro для:
 
широкий спектр вирусов, патогенных для человека
возбудители, которые не способны к репликации или не вызывают поражений в тест-системах
1) характеристики Банка клеток
лизат клеток и их культуральная среда (при совместном культивировании исследуемый материал должен содержать интактные клетки)
2) скрининга производства
сбор необработанного продукта или лизат клеток и их культуральные среды из промышленного реактора
Трансмиссионная электронная микроскопия на:
 
вирус и вирусоподобные частицы
качественный анализ с оценкой идентичности
1) клеточном субстрате
жизнеспособные клетки
2) супернатанте клеточной культуры
бесклеточный супернатант культуры
Обратная транскриптаза (RT)
бесклеточный супернатант культуры
ретровирусы и экспрессированная ретровирусная обратная транскриптаза
определяет только ферменты с оптимальной активностью при предпочтительных условиях, интерпретация может представлять сложность в связи с наличием клеточных ферментов, фона в некоторых концентрированных образцах
Инфицирующая способность ретровирусов (RV)
бесклеточный супернатант культуры
инфекционные ретровирусы
ретровирусы, не способные реплицироваться или не формирующие дискретные очаги или бляшки в выбранной тест-системе
Совместное культивирование
жизнеспособные клетки
инфекционные ретровирусы
ретровирусы, не способные реплицироваться
1) конечная точка инфицирующей способности
ретровирусы, не способные реплицироваться или не формирующие дискретные очаги или бляшки в выбранной тест-системе
2) конечная точка трансмиссионной электронной микроскопии
качественный анализ с оценкой идентичности кроме того, сложно отличить исследуемый материал от индикаторных клеток
3) конечная точка обратной транскриптазы
определяет только ферменты с оптимальной активностью при предпочтительных условиях. интерпретация может представлять сложность в связи с наличием клеточных ферментов, фона в некоторых концентрированных образцах
ПЦР
клетки, культуральная жидкость и прочие материалы
специфичные последовательности вируса
должны присутствовать праймеры, не определяет инфицирующую способность вируса

 

Поскольку большинство используемых методик может изменяться с учетом научного прогресса, возможно использование альтернативных подходов при наличии данных, обосновывающих их применение. Производителям рекомендуется обсуждать такие альтернативные подходы с уполномоченными органами государств-членов. В отдельных ситуациях может потребоваться проведение других испытаний. Испытания должны включать в себя надлежащие контрольные материалы, гарантирующие достаточную чувствительность и специфичность. Во всех случаях, когда по виду животного - источнику происхождения клеточного субстрата - можно с относительно высокой вероятностью выявить наличие определенного вируса, может потребоваться проведение специальных испытаний и (или) применение других подходов. Если используемая в производстве клеточная линия получена от человекообразных или нечеловекообразных обезьян, необходимо дополнительно (при отсутствие должного обоснования) проверить ее на наличие таких вирусов человека, как вирусы, вызывающие иммунодефициты или гепатиты. Для выявления последовательностей нуклеиновых кислот, характерных для этих и других специфичных вирусов, может использоваться ПЦР. Далее представлено краткое описание общих принципов положений, в соответствии с которыми производитель должен обосновать свои действия.

 

3.B.1. Испытания на наличие ретровирусов.

При испытании клеток ГБК и клеток, культивируемых до предельного для производства клеточного возраста in vitro и дольше, следует проводить испытания на наличие ретровирусов, включая оценку инфицирующей способности на чувствительных клеточных культурах и электронную микроскопию. Если инфицирующая способность не выявлена и при помощи электронной микроскопии не были обнаружены ретровирусы или ретровирусоподобные частицы, проводятся исследования с использованием обратной транскриптазы или другие подходящие испытания на ретровирусы, которые могут не иметь инфицирующей способности. Исследования индукции в данном случае неэффективны.

 

3.B.2. Исследования in vitro.

Исследования in vitro проводятся путем инокуляции исследуемого материала, указанного в таблице 2, в разные восприимчивые индикаторные клеточные культуры, что позволяет определять большое число вирусов человека и животных. Выбор клеток для испытаний определяется видами животных, из которых получен подлежащий испытанию банк клеток, при этом необходимо включить клеточные линии человекообразных или нечеловекообразных обезьян, чувствительные к вирусам человека. Метод и материал для исследования выбираются в зависимости от типа вируса, наличие которого в материале предполагается с учитом происхождения клеток и проведенных с ними манипуляции. Необходимо проводить выявление как цитопатических, так и гемадсорбирующих вирусов.

 

3.B.3. Исследования in vivo.

Для выявления некультивируемых вирусов (не растущих в клеточных культурах) исследуемый материал, указанный в таблице 2, вводится животным, включая новорожденных и взрослых мышей, а также в развивающиеся эмбрионы птиц. В зависимости от происхождения исследуемых клеточных линий возможно проведение исследований на других видах животных. Следует контролировать состояние здоровья опытных животных, и любые отклонения от нормы нужно исследовать с целью установления причины заболевания.

 

3.B.4. Испытания на образование антител.

Видоспецифичные вирусы, присутствующие в клеточных линиях грызунов, можно выявить путем инокуляции исследуемого материала, указанного в таблице 2, не зараженным вирусом (безвирусным) животным с последующим определением сывороточных антител или ферментативной активности, проявляющихся спустя определенное время. В качестве примера можно привести тесты продукции мышиных (MAP), крысиных (RAP) и хомячьих (HAP) антител. Перечень вирусов, для выявления которых проводятся испытания продукции антител, приведен в таблице 3.

 
Таблица 3
 
Вирусы, для выявления которых проводятся
испытания продукции антител
 
Тест продукции мышиных
(map) антител
Тест продукции хомячьих
(hap) антител
Тест продукции крысиных
(rap) антител
Вирус эктромелии <2>, <3>
Вирус лимфоцитарного хориоменингита (LCM) <1>, <3>
Вирус хантаан <1>, <3>
Вирус хантаан <1>, <3>
Вирус пневмонии мышей (PVM) <2>, <3>
Крысиный вирус Килхама (KRV) <2>, <3>
K-вирус <2>
Реовирус типа 3 (Rео3) <1>, <3>
Вирус энцефаломиелита мышей (Theilers, GDVII) <2>
Вирус лактатдегидрогеназы (LDM) <1>, <3>
Вирус Сендай <1>, <3>
Вирус пневмонии мышей
(PVM) <2>, <3>
Вирус лимфоцитарного хориоменингита (LCM) <1>, <3>
SV5
Коронавирус крыс (RCV) <2>
Мелкий вирус мышей <2> <3>
Реовирус типа 3 (Rео3) <1>, <3>
Аденовирус мышей (MAV) <2>, <3>
Вирус Сендай <1>, <3>
Цитомегаловирус мышей (MCMV) <2>, <3>
Вирус сиалодакриоадеита (SDAV) <2>
Вирус энцефаломиелита мышей (Theilers, GDVII) <2>
Вирус Тоолан (HI) <2>, <3>
Вирус гепатита мышей (MHV) <2>
Ротавирус мышей (EDIM) <2>, <3>
Вирус пневмонии мышей (PVM) <2>, <3>
Полиомавирус <2>
Реовирус типа 3 (Rео3) <1>, <3>
Вирус Сендай <1>, <3>
Тимический вирус <2>

 

<1> Вирусы, для которых доказана их способность инфицировать человека или приматов.

<2> Вирусы, для которых данные, доказывающие способность инфицировать человека, отсутствуют.

<3> Вирусы, способные реплицироваться in vitro в клетках человека или приматов.

 
3.C. Приемлемость клеточных линий
 

Некоторые клеточные линии, используемые для производства продукта, содержат эндогенные ретровирусы, другие вирусы или вирусные последовательности. Рекомендации по организации производства в таких случаях описаны в разделе 5 настоящей главы. Приемлемость клеточных линий, содержащих вирусы, не являющиеся эндогенными ретровирусами, определяется в индивидуальном порядке уполномоченными органами государств-членов с учетом анализа пользы и риска, исходя из пользы препарата и его предлагаемого клинического применения, свойств контаминирующих вирусов, их потенциала заражать человека или вызывать у него заболевания, процесса очистки препарата (например, анализ данных очистки от вирусов) и объема проведенных с очищенным нерасфасованным продуктом испытаний на вирусы.

 

4. ИСПЫТАНИЕ НЕОБРАБОТАННОГО НЕРАСФАСОВАННОГО
ПРОДУКТА НА НАЛИЧИЕ ВИРУСОВ
 

Необработанный нерасфасованный продукт представляет собой один или несколько объединенных сборов клеток и культуральной среды. Если доступ к клеткам затруднен (например, при использовании полых волокон или аналогичных систем), то необработанный продукт может представлять собой жидкость, собранную из такого биореактора. Репрезентативный образец необработанного продукта, отобранного из промышленного биореактора перед дальнейшей обработкой, является одним из наиболее подходящих материалов, на котором можно с высокой вероятностью выявить контаминацию посторонними вирусами. Соответствующие испытания на наличие вирусов можно проводить на необработанном продукте, если только начальная частичная обработка не повышает чувствительность испытаний на вирусы (например, необработанный продукт может быть токсичным для исследуемых клеточных культур, в то время как частично обработанный продукт может быть нетоксичным).

В определенных случаях более приемлемым может быть анализ смеси, содержащей как интактные, так и разрушенные клетки и культуральные супернатанты, отобранные из промышленного биореактора перед последующей обработкой. В регистрационное досье необходимо включить данные, полученные как минимум на 3 сериях необработанного продукта, произведенного в опытно-промышленном или промышленном масштабе производства.

Производителям рекомендуется разрабатывать программы постоянной оценки на наличие посторонних вирусов в промышленных сериях продукта. Объем, количество и частота проведения испытаний на наличие вирусов в необработанном продукте определяется с учетом нескольких факторов: природы клеточных линий, используемых для производства требуемого лекарственного препарата, результатов и объема испытаний на наличие вирусов, проведенного во время квалификации клеточных линий, метода культивирования, источников сырья и результатов исследований по очистке от вирусов. В целях испытания необработанного продукта, как правило, проводятся скрининговые испытания in vitro с использованием одной или нескольких клеточных линий. При необходимости могут применяться методы на основе ПЦР или другие подходящие методы.

Собранный материал, в котором обнаружен посторонний вирус, не должен использоваться для производства продукта. Если на этом этапе выявляют посторонние вирусы, процесс производства необходимо тщательно проанализировать для определения причины контаминации и принятия соответствующих мер.

 

5. ОБОСНОВАНИЕ И ПЛАН ДЕЙСТВИЙ ПРИ ПРОВЕДЕНИИ
ИССЛЕДОВАНИЙ ПО ОЧИСТКЕ ОТ ВИРУСОВ И ИСПЫТАНИЙ НА НАЛИЧИЕ
ВИРУСОВ В ОЧИЩЕННОМ НЕРАСФАСОВАННОМ ПРОДУКТЕ
 

Необходимо разработать наиболее подходящий и рациональный протокол проведения испытаний на наличие вирусов начиная с ГБК на разных этапах производства вплоть до получения лекарственного препарата, включая оценку и характеристику эффективности очистки от вирусов необработанного продукта. Оценка и описание характеристик очистки от вирусов играют основную роль в данной схеме, их целью является получение надежного подтверждения того, что продукт не контаминирован вирусами.

При выборе вирусов, которые будут использоваться в исследовании по очистке от вирусов, целесообразно разделять необходимость анализа возможностей процессов очищать продукт от вирусов, о наличии которых известно, и потребность оценки устойчивости процесса путем описания очистки от неспецифических "модельных" вирусов. При оценке вирусной безопасности препарата для анализа процесса необходимо знать количество вирусов, которые могут содержаться в нем (например, в необработанном нерасфасованном продукте) и количество вирусов, которые можно инактивировать и элиминировать в процессе очистки. Знание

временнóй временной зависимости процедур инактивации позволяет удостовериться в их эффективности. При анализе очистки от известных контаминантов требуются проведение детальных зависимых от времени исследований инактивации, подтверждение воспроизводимости инактивации и (или) элиминации и анализ параметров процесса. При описании процесса производства с точки зрения надежности очистки с использованием неспецифичных "модельных" вирусов в дизайне исследования необходимо уделить особое внимание безоболочечным вирусам. Объем исследований, необходимых для описания очистки от вирусов зависит от результатов испытания клеточных линий и необработанного продукта. Такие исследования необходимо проводить по методологии, предусмотренной разделом 6 настоящей главы.

Пример плана действий при проведении анализа процесса, описания очистки от вирусов и испытаний на вирусы очищенного продукта в зависимости от результатов испытаний клеток и (или) необработанного продукта на вирусы приведен в таблице 4.

 

Таблица 4
 
Пример плана действий при проведении процесса очистки
от вирусов и испытаний на вирусы в очищенном продукте
 
Ситуация
Статус
1
2
3 <2>
4 <2>
5 <2>
Наличие вируса <1>
-
-
+
+
(+) <3>
Вирусоподобные частицы <1>
-
-
-
-
(+) <3>
Ретровирусоподобные частицы <1>
-
+
-
-
(+) <3>
Выявлен вирус
не применимо
+
+
+
-
Вирус, патогенный для человека
не применимо
- <4>
- <4>
+
неизвестно
Действия
Характеристика процесса очистки от вирусов при использовании неспецифичных "модельных" вирусов
да <5>
да <5>
да <5>
да <5>
да <7>
Оценка процесса очистки от вирусов при использовании "релевантных" или специфичных "модельных" вирусов
нет
да <6>
да <6>
да <6>
да <7>
Испытания на наличие вируса в очищенном продукте
не применимо
да <8>
да <8>
да <8>
да <8>

 

<1> Результаты испытаний на наличие вируса на уровне клеточного субстрата и (или) необработанного продукта. Как правило, не допускается использовать в производстве контаминированные вирусом клеточные культуры. Однако допускается использовать эндогенные вирусы (например, ретровирусы) или вирусы, являющиеся интегральной (составной) частью ГБК, если проведены надлежащие процедуры оценки вирусной очистки.

<2> Использование в качестве источника материала, контаминированного вирусами (независимо от их инфекционности и (или) патогенности для человека), допускается в исключительных случаях.

<3> Вирус обнаружен с помощью прямых или непрямых методов.

<4> Считающийся непатогенным.

<5> Необходимо провести описание очистки с помощью неспецифичных "модельных" вирусов.

<6> Необходимо провести оценку процесса с помощью "релевантных" или специфичных "модельных" вирусов.

<7> См. описание ситуации E.

<8> Необходимо подтвердить с помощью подходящих методов, обладающих высокой специфичностью и чувствительностью обнаружения искомого вируса, что в очищенном продукте вирусы не обнаруживаются. В регистрационном досье необходимо представить данные, по меньшей мере, о трех сериях необработанного продукта, полученного опытно-промышленным или промышленным способом. Однако определять наличие неинфекционных частиц в очищенном продукте из клеточных линий (например, клетки CHO), эндогенные частицы которых хорошо описаны и налажена их очистка, как правило, не требуется.

 

Далее рассматриваются различные варианты такого плана действий. Во всех случаях необходимо провести описание очистки с использованием неспецифичных "модельных" вирусов. Наиболее частыми являются ситуации 1 и 2. Клетки-продуценты, контаминированные вирусом, не являющимся ретровирусом грызунов, как правило, не используются. Если имеются убедительные и должным образом обоснованные основания для производства препаратов с использованием клеточной линии, описанной в ситуациях 3, 4 и 5, их необходимо согласовать с уполномоченным органом государства-члена. В случаях 3, 4 и 5 необходимо предусмотреть валидированные эффективные этапы, направленные на инактивацию и (или) элиминацию обнаруженного вируса в процессе производства.

Ситуация 1. Если в клетках и необработанном продукте вирусы, вирусоподобные частицы и ретровирусоподобные частицы не обнаружены, необходимо провести исследования элиминации и инактивации вирусов с использованием неспецифичных "модельных" вирусов.

Ситуация 2. Если обнаружены лишь ретровирусы грызунов или ретровирусоподобные частицы, которые считаются непатогенными (например, частицы A- и R-типов грызунов), необходимо провести анализ процесса с использованием специфичных "модельных" вирусов, например, вируса лейкоза мышей. Испытание очищенного продукта необходимо проводить с использованием подходящих методов, обладающих высокой специфичностью и чувствительностью в отношении рассматриваемого вируса. В регистрационном досье необходимо представить данные по меньшей мере о 3 сериях очищенного продукта, полученных опытно-промышленным или промышленным способом. В качестве субстратов для производства препаратов часто используются такие клеточные линии, как CHO, C127, BHK и клеточные линии гибридомы мышей, в отношении которых данные о проблемах с безопасностью, обусловленных вирусной контаминацией препаратов, не поступали. В отношении клеточных линий, эндогенные частицы которых хорошо описаны и очистка которых налажена, определение наличия неинфекционных частиц в очищенном продукте, как правило, не требуется. Необходимо провести исследования с использованием неспецифичных "модельных" вирусов, как описано в ситуации 1.

Ситуация 3. Если клетки или необработанный продукт содержат вирусы (за исключением ретровирусов грызунов), в отношении которых неизвестна их способность инфицировать человека (например, вирусы, указанные в сноске 2 к таблице 3 настоящей главы, за исключением ретровирусов грызунов (ситуация 2)), в исследованиях по изучению элиминации и инактивации вирусов необходимо использовать обнаруженный вирус. Если обнаруженный вирус использовать невозможно, в целях подтверждения приемлемости очистки необходимо использовать "релевантный" или специфичный "модельный" вирус. Зависимая от времени инактивация идентифицированных (или "релевантных", или специфичных "модельных") вирусов на критических стадиях инактивации должна стать частью анализа процесса на предмет наличия таких вирусов. Испытание очищенного продукта необходимо проводить с использованием подходящих методов, обладающие высокой специфичностью и чувствительностью в отношении рассматриваемого вируса. В регистрационном досье необходимо представить данные по меньшей мере о 3 сериях очищенного продукта, полученных опытно-промышленным или промышленным способом.

Ситуация 4. Если обнаружен известный патоген человека (например, описанный в сноске 1 к таблице 3 настоящей главы), использовать продукт допускается в исключительных случаях. В связи с этим в исследованиях по изучению элиминации и инактивации вирусов рекомендуется применять обнаруженный вирус с использованием подходящих методов, обладающих высокой специфичностью и чувствительностью в отношении его. Если обнаруженный вирус использовать невозможно, необходимо использовать "релевантный" и (или) специфичный "модельный" вирус. Необходимо подтвердить способность процесса в ходе очистки и инактивации элиминировать и инактивировать отобранные вирусы. В ходе анализа процесса на ключевых этапах инактивации необходимо получить данные о зависимой от времени инактивации. Испытание очищенного продукта необходимо проводить с использованием подходящих методов, обладающих высокой специфичностью и чувствительностью в отношении рассматриваемого вируса. В регистрационном досье необходимо представить данные по меньшей мере о 3 сериях очищенного продукта, полученных опытно-промышленным или промышленным способом.

Ситуация 5. Если в клетках или необработанном продукте обнаруживается вирус, который невозможно классифицировать с помощью имеющихся методов, продукт, как правило, считается непригодным, поскольку вирус может быть патогенным. В очень редких случаях при наличии убедительных и обоснованных причин для производства препарата с использованием такой клеточной линии перед продолжением процесса производства необходимо согласование с уполномоченным органом государства-члена.

 

6. ОЦЕНКА И ХАРАКТЕРИСТИКА ПРОЦЕДУР ОЧИСТКИ ОТ ВИРУСОВ
 

Анализ и описание процедур элиминации и (или) инактивации вирусов играют важную роль в обеспечении безопасности биологических (биотехнологических) препаратов. Контаминация биологических препаратов агентами, о наличии которых не было известно и это не предполагалось, происходила если эти препараты были получены из не описанных всесторонне клеточных линий. Оценка очистки от вирусов обеспечивает определенную уверенность в том, что все неизвестные, неподозреваемые и опасные вирусы будут элиминированы. Исследования следует проводить с надлежащим документированием и контролем.

Целями исследований по очистки от вирусов являются оценка этапов процесса производства, которые можно считать эффективными для инактивации (элиминации) вирусов, и количественная оценка суммарного снижения содержания вирусов в продукте с помощью этих этапов. Это достигается за счет преднамеренного одномоментного добавления значимого количества вирусов в необработанный материал и (или) к различным фракциям, получаемым на различных этапах процесса производства, и подтверждения того, что на последующих этапах достигается их необходимая элиминация или инактивация. Если надлежащая очистка достигается за счет меньшего количества этапов, то оценивать и описывать с точки зрения оценки вирусной безопасности остальные этапы процесса производства не требуется. Следует помнить, что остальные этапы процесса производства могут косвенно влиять на достигнутую инактивацию (элиминацию). Производители должны объяснить и обосновать подход, использованный для проведения исследований по очистке от вирусов.

Снижение инфицирующей способности вирусов достигается за счет элиминации вирусных частиц или их инактивации. Необходимо описать возможные механизмы снижения инфицирующей способности вируса на каждом изученном этапе процесса производства и указать, достигнуты они за счет инактивации или элиминации. Исследование этапов инактивации необходимо спланировать таким образом, чтобы пробы отбирались в различные временные точки, при этом следует построить кривую инактивации в соответствии с подразделом 6.B.5 настоящей главы.

Исследования по оценке очистки от вирусов проводятся в целях подтверждения очистки от вирусов, которые содержатся в ГБК, и (или) обеспечения определенной степени уверенности в том, что посторонние вирусы, которые могли быть не выявлены или могли контаминировать процесс производства, были устранены. Факторы снижения вирусной нагрузки, как правило, выражаются в логарифмических координатах, то есть несмотря на то, что остаточная инфицирующая способность вируса никогда не будет снижена до нуля, ее можно значительно снизить с математической точки зрения.

В дополнение к исследованиям по очистке от вирусов, о наличии которых известно, необходимо провести исследования по оценке возможностей процесса элиминировать и (или) инактивировать другие вирусы. Цель исследований с использованием вирусов, которые обладают различными биохимическими и биофизическими свойствами, о содержании которых неизвестно или наличие которых не ожидается, заключается, как правило, в изучении надежности процедур, но не в обеспечении определенной степени их инактивации или элиминации (специфического риска). Желательно обеспечить подтверждение способности процесса производства инактивировать или элиминировать вирусы в соответствии с подразделом 6.C настоящей главы. Такие исследования не направлены на оценку специфического (определенного) риска безопасности, то есть не требуется достигать определенной степени очистки для данного риска.

 

6.A. Выбор вирусов для оценки и характеристики
элиминации вирусов
 

Чтобы испытать общую способность системы очищать продукт от вирусов, в исследования по оценке очистки и описанию процесса необходимо включать вирусы, напоминающие по свойствам вирусы, которые могут контаминировать препарат и обладают широким диапазоном физико-химических свойств. Руководствуясь настоящей главой, производитель должен обосновать выбор вирусов в соответствии с целями исследований по оценке и описанию и на основании настоящей главы.

 

6.A.1. "Релевантные" вирусы и "модельные" вирусы.

Основным аспектом проведения исследования по очистке от вирусов является определение, какие вирусы в него включать. Такие вирусы делятся на три категории: "релевантные" вирусы, специфичные "модельные" вирусы и неспецифичные "модельные" вирусы.

Необходимо подтвердить способность процесса очистки и (или) инактивации удалять и (или) инактивировать "релевантные" вирусы. Если "релевантного" вируса нет в наличии или он не адаптирован к исследованиям по оценке процесса очистки от вирусов (например, его невозможно вырастить в достаточно высоком титре in vitro), в качестве замены необходимо использовать специфичные "модельные" вирусы.

Клеточные линии, полученные от грызунов, обычно содержат частицы эндогенного ретровируса или ретровирусоподобные частицы, которые могут быть инфекционными (частицы С-типа) или неинфекционными (цитоплазматические частицы A- и R-типа). Необходимо определить способность процесса производства элиминировать и (или) инактивировать ретровирусы в продуктах, полученных с использованием таких клеток. Этого можно достичь с использованием вируса лейкемии мышей - специфичный "модельный" вирус для клеток мышиного происхождения. Например, при иммортализации B-лимфоцитов вирусом Эпштейна-Барр (EBV) и получении клеточных линий человека, секретирующих моноклональные антитела, необходимо определить способность процесса производства элиминировать и (или) инактивировать вирус герпеса. В качестве специфичного "модельного" вируса может также использоваться вирус псевдобешенства.

Если целью служит описание общей способности процесса производства элиминировать и (или) инактивировать вирусы (описание надежности процесса очистки), необходимо провести исследования по характеристике очистки с использованием неспецифичных "модельных" вирусов, обладающих различными свойствами. В таком анализе могут применяться результаты исследований с "релевантными" и (или) специфичными "модельными" вирусами. Проводить испытания со всеми типами вирусов не требуется. Необходимо отдавать предпочтение вирусам, которые проявляют значительную устойчивость к физическим и (или) химическим воздействиям. Результаты изучения таких вирусов служат источником доказательных сведений об общей способности процесса производства элиминировать и (или) инактивировать вирусы. Выбор и количество использованных вирусов зависят от качества и степени описания клеточных линий и процесса производства.

Примеры подходящих "модельных" вирусов, обладающих широким диапазоном физико-химических структур, и примеры вирусов, использованных в исследованиях по очистке от вирусов, представлены в приложении N 2 к настоящей главе.

 

6.A.2. Рассмотрение других аспектов.

Предпочтительно использовать вирусы, которые можно вырастить (обогатить) до высокого титра, однако это не всегда возможно.

Необходимо располагать эффективной и надежной методикой количественного определения каждого использованного вируса на каждом исследуемом этапе производства.

Необходимо учитывать потенциальный вред здоровью, который может быть нанесен персоналу, проводящему исследования очистки.

 

6.B. Дизайн и обязательные условия проведения исследований
по оценке и описанию характеристик очистки вирусов
 

6.B.1. Производственные помещения, оборудование и персонал.

В соответствии с правилами надлежащей производственной практики Союза, утверждаемыми Комиссией, вносить какие-либо вирусы в производственное оборудование не допускается. В связи с этим исследования по очистке от вирусов должны проводиться в отдельной лаборатории, оборудованной для работы с вирусами, персоналом с вирусологической квалификацией в сотрудничестве с производственным персоналом, занимавшимся планированием и подготовкой уменьшенной версии процесса очистки.

 

6.B.2. Система производства в уменьшенном масштабе.

Необходимо доказать валидность (пригодность) уменьшенного масштаба производства. Уровень очистки в уменьшенном масштабе должен максимально соответствовать методу производства. Необходимо подтвердить, что все параметры (хроматографическое оборудование, высота слоя сорбента колонки (column bed-height), линейная скорость потока (linear flow-rate), отношение скорости потока к объему слоя сорбента (flow-rate-to-bed-volume ratio) (время контакта), виды буферных растворов и гелей, значение pH, температура и концентрация белка, соли и продукта) максимально приближены к промышленному способу производства. Необходимо получить тот же профиль элюирования. В отношении процедур необходимо соблюдать аналогичные требования. Неизбежные отклонения необходимо проанализировать с точки зрения их влияния на результаты.

 

6.B.3. Анализ поэтапной элиминации вирусов.

При проведении исследований по очистке от вирусов желательно оценить вклад более чем одного этапа производства в элиминацию вирусов. Этапы, на которых, вероятнее всего, устраняются вирусы, необходимо отдельно оценить на предмет их способности элиминировать и инактивировать вирусы, при этом следует уделить особое внимание точному разграничению отдельных этапов. На каждом подлежащем испытанию этапе материал должен содержать достаточное количество вируса, необходимое для оценки эффективности каждого этапа. Как правило, на каждом подлежащем испытанию этапе вирус добавляется во внутрипроизводственный материал. В некоторых случаях, достаточно просто добавить вирус в высоком титре в необработанный продукт и измерять его концентрацию между последовательными этапами. Если элиминация вируса достигается с помощью процедур отделения, рекомендуется при необходимости и по возможности изучить распределение вирусной нагрузки по различным фракциям. Если на множестве этапов процесса производства используются вирулицидные буферные растворы, как часть оценки всего процесса допускается использовать альтернативные стратегии, например, параллельное добавление менее вирулицидных буферных растворов. Титр вируса необходимо определять до и после каждого исследуемого этапа. В целях обеспечения необходимой статистической значимости результатов необходимо использовать методики количественного определения инфицирующей способности с высокой чувствительностью и воспроизводимостью с достаточным числом повторностей. При достаточном обосновании допускается использовать количественные методики, не направленные на выявление инфицирующей способности. В целях обеспечения чувствительности методов во все методики по определению инфицирующей способности необходимо включать надлежащий вирусный контроль. К тому же необходимо принимать во внимание особенности отбора проб вируса в низких концентрациях в соответствии с требованиями к статистическим подходам к интерпретации результатов испытаний на вирусы согласно приложению N 3 к настоящей главе.

 

6.B.4. Определение вклада физической элиминации и инактивации вирусов.

Снижение инфицирующей способности вируса достигается за счет его элиминации или инактивации. Необходимо описать возможные механизмы снижения инфицирующей способности вируса на каждом изученном этапе процесса производства и указать, достигнуты они за счет инактивации или элиминации. Если процесс производства не позволяет добиться удовлетворительного снижения инфицирующей способности, а элиминация вируса рассматривается в качестве основного фактора безопасности препарата, необходимо внедрить специальные или дополнительные этапы инактивации и (или) элиминации. На определенном этапе может потребоваться разграничить элиминацию и инактивацию (например, если есть вероятность того, что буферный раствор, использованный более чем на одном этапе, может влиять на инактивацию на каждом этапе, то есть влияние буферного раствора на инактивацию распределяется между несколькими хроматографическими этапами, при этом необходимо определить степень элиминации, достигаемую за счет каждого из этих хроматографических этапов).

 

6.B.5. Оценка инактивации.

Для оценки инактивации вируса в необработанном продукте или промежуточном материале должен быть введен инфекционный вирус и рассчитан фактор (коэффициент) снижения вирусной нагрузки. Следует учитывать, что инактивация вируса не является простым процессом первого порядка, обычно она более сложная и имеет быструю фазу 1 и медленную фазу 2. Именно поэтому исследование должно быть спланировано так, чтобы отбор проб проводился в разные временные точки, и была построена кривая инактивации. В исследования по инактивации помимо временной точки, соответствующей минимальной экспозиции, рекомендуется включать не менее одной временной точки, которая предшествует точке минимальной экспозиции и отличается от ноля. Дополнительные данные особенно необходимы, если "релевантный" вирус является патогенным для человека и создан процесс эффективной его инактивации. Однако в исследованиях инактивации, в которых неспецифичные "модельные" вирусы или специфичные "модельные" вирусы используются в качестве суррогатов вирусных частиц (например, внутрицитоплазматические ретровирусоподобные частицы в клетках яичника китайского хомячка) воспроизводимость очистки необходимо подтвердить по меньшей мере в 2 исследованиях. Начальную вирусную нагрузку по возможности необходимо определять путем выявления вируса после его добавления в исходный материал. Если это невозможно, то начальная вирусная нагрузка рассчитывается по титру вируса в добавляемом к исходному материалу препарате. Если высокая скорость инактивации не позволяет построить кривую инактивации с использованием условий процесса, необходимо предусмотреть надлежащие контроли, в целях подтверждения того, что в ходе инактивации инфицирующая способность была устранена.

 

6.B.6. Использование и регенерация хроматографических колонок.

Со временем или при повторном (многократном) использовании хроматографических колонок и других систем, используемых в процессе очистки, их способность к элиминации вируса может изменяться. Определение стабильности очистки от вирусов после многократного применения оправдывает возможность повторного использования колонок. Необходимо подтвердить, что вирусы, которые были потенциально задержаны производственной системой, должным образом уничтожены и удалены перед повторным ее использованием. Таким подтверждением, к примеру, может служить демонстрация того, что процедуры очистки и регенерации инактивируют или элиминируют вирус.

 

6.B.7. Особые меры предосторожности.

При приготовлении вирусов в высоком титре необходимо соблюдать осторожность, чтобы не допустить их агрегации, которая может улучшить физическую элиминацию, но снизить инактивацию и исказить таким образом корреляцию с фактическим производством.

Необходимо учитывать минимальное количество вируса, содержание которого можно достоверно определить.

В целях анализа снижения инфицирующей способности вируса вследствие разведения, концентрации, фильтрации или хранения проб перед их разведением, в исследование необходимо включать параллельные контрольные методики количественного определения.

"Добавление" вирусов необходимо осуществлять в небольшом объеме, чтобы не разводить продукт или не изменить его свойства. Проба испытуемого белка после его разведения больше не является идентичной продукту, получаемому промышленным способом.

Небольшие различия в буферных растворах, питательной среде, реактивах и т.п. могут значительно повлиять на очистку от вирусов.

Инактивация вирусов зависит от времени, поэтому время, в течение которого продукт, в который добавлен вирус, остается в определенном буферном растворе или определенной хроматографической колонке, должно соответствовать условиям промышленного процесса производства.

Буферные растворы и продукт необходимо оценивать отдельно на токсичность и влияние на результаты методик, применяемых для определения титра вируса, так как эти компоненты могут негативно влиять на индикаторные клетки. Если такие растворы токсичны для индикаторных клеток, могут потребоваться разведение, коррекция pH или диализ буферного раствора, содержащего добавленный вирус. Если продукт обладает собственной противовирусной активностью, может потребоваться проведение исследования очистки без продукта в "имитационном" цикле ("mock" run), хотя при этом исключение продукта или замена его на аналогичный белок, не обладающий противовирусной активностью, может повлиять на поведение вирусов на некоторых этапах производства. Необходимо включить достаточные контроли для оценки влияния процедур, используемых исключительно для приготовления проб для методик определения (например, диализ, хранение), на элиминацию и (или) инактивацию добавленного вируса.

Во многих схемах очистки повторно используются одинаковые или схожие буферные растворы или колонки. При анализе данных это необходимо принимать во внимание. Эффективность конкретного метода элиминации вируса может зависеть от этапа производства, на котором он используется.

Если условия производства или буферные растворы чрезмерно цитотоксичны или вируцидны, совокупные факторы (коэффициенты) снижения вирусной нагрузки могут быть недооценены, в этом случае оценка проводится в индивидуальном порядке. Ввиду внутренних ограничений или несоответствующего дизайна исследований по очистке от вирусов общие факторы (коэффициенты) снижения вирусной нагрузки могут быть также переоценены.

 

6.C. Интерпретация результатов исследований
по очистке от вирусов
 

Целями оценки инактивации и (или) элиминации вирусов являются анализ и описание этапов процесса производства, считающихся эффективными для инактивации и (или) элиминации вирусов, и количественное определение общего снижения содержания вирусов, достигаемого при производстве. При наличии вирусных контаминантов (ситуации 2 - 5), чтобы обеспечить надлежащий уровень безопасности лекарственного препарата, необходимо не только подтвердить, что вирус элиминирован или инактивирован, но и показать, что в процессе очистки от вирусов остается запас эффективности. Количество элиминированного или инактивированного в ходе процесса производства вируса необходимо сравнить с количеством, которое содержалось в необработанном продукте.

Для осуществления такого сравнения необходимо оценить содержание вируса в необработанном продукте. Такая оценка осуществляется с использованием методик определения инфицирующей способности или иных методик, например, трансмиссионной электронной микроскопии (ТЭМ). Весь процесс очистки должен элиминировать значительно большее количество вируса, чем его содержание в объеме необработанного продукта, эквивалентном одной дозе лекарственного препарата. Расчет факторов (коэффициентов) снижения вирусной нагрузки в исследованиях по очистке от вирусов осуществляется согласно приложению N 4 к настоящей главе, расчет ожидаемого количества частиц на дозу - согласно приложению N 5 к настоящей главе.

Механизмы очистки от различных классов вирусов могут отличаться. При анализе данных, подтверждающих эффективность процедур инактивации и (или) элиминации вирусов, необходимо использовать комбинацию факторов:

пригодность использованных тест-вирусов;

дизайн исследований очистки;

достигнутое снижение вирусной нагрузки (в логарифмах);

зависимость инактивации от времени;

потенциальное влияние изменения параметров процесса производства на инактивацию и (или) элиминацию вируса;

чувствительность (пределы определения и обнаружения) аналитических методик;

селективность процедур инактивации и (или) элиминации в отношении определенных классов вирусов.

Эффективная очистка достигается любым из следующих способов: многоэтапная инактивация, многоэтапное дополнительное отделение или комбинация этапов инактивации и отделения. Отделение "модельных" вирусов может происходить иначе, нежели отделение искомого вируса, поскольку методы отделения могут зависеть от высокоспецифичных физико-химических свойств вируса, которые влияют на их взаимодействие с гелевыми матрицами и на свойства преципитации. Параметры производства, влияющие на отделение, подлежат надлежащему описанию и контролю. Различия могут быть обусловлены изменением поверхностных свойств, например, гликозилированием. Однако, несмотря на такие потенциальные различия, эффективная элиминация достигается путем комбинации дополнительных этапов отделения или комбинации этапов инактивации и отделения. Таким образом, хорошо спланированные этапы отделения, например, хроматографические процедуры, фильтрация и экстракция, могут оказаться эффективными способами элиминации вирусов, если они осуществляются в хорошо контролируемых условиях. Эффективный этап элиминации вирусов должен обладать воспроизводимостью в отношении снижения вирусной нагрузки, которую необходимо подтвердить не менее чем двумя независимыми исследованиями.

Совокупный фактор (коэффициент) снижения, как правило, выражается в виде суммы отдельных факторов. Если индивидуальный фактор (коэффициент) снижения составляет 1,0 lg или менее, то он признается незначительным и при отсутствии обоснования не учитывается в расчете совокупного фактора (коэффициента) снижения.

Если процесс производства не позволяет добиться удовлетворительного снижения инфицирующей способности, а элиминация вируса рассматривается в качестве основного фактора безопасности препарата, необходимо внедрить дополнительные этапы инактивации и (или) элиминации. В отношении всех вирусов производители должны обосновать приемлемость полученных факторов (коэффициентов) снижения. Результаты должны быть оценены на основании указанных факторов.

 

6.D. Ограничения исследований по очистке от вирусов
 

Исследования по очистке от вирусов влияют на обеспечение приемлемого уровня безопасности лекарственного препарата, однако сами по себе не определяют его безопасность. Тем не менее ряд элементов дизайна и выполнение исследований по очистке от вирусов могут привести к некорректной оценке способности процесса снижать инфицирующую способность вирусов. К таким факторам относятся следующие:

Вирусные препараты, использованные в исследованиях по очистке, как правило, получают на культуре тканей. Поведение вируса из культуры ткани на этапе производства может отличаться от свойств природного вируса, например, если природный и выращенный вирусы различаются по чистоте или степени агрегации.

Инактивация инфицирующей способности вирусов, как правило, описывается двухфазной кривой, в которой быстрая начальная фаза сменяется медленной. Существует вероятность, что вирусы, оставшиеся после первого этапа инактивации, могут быть более устойчивыми к последующим этапам. Например, если резистентная фракция принимает форму вирусных агрегатов, их инфицирующая способность может быть устойчива к различным химическим воздействиям и нагреванию.

Возможность совокупного процесса снижать инфицирующую способность выражается в виде суммы логарифмов снижения вирусной нагрузки на каждом этапе. Суммирование факторов (коэффициентов) снижения на различных этапах, особенно этапах с небольшим снижением (например, менее 1,0 lg), может привести к завышению истинного показателя оценки элиминации вируса. Кроме того, не допускается суммировать факторы (коэффициенты) снижения, полученные за счет повторения идентичных или схожих процедур, без должного снования.

Выражение факторов (коэффициентов) снижения в виде логарифма снижения титра означает, что, несмотря на существенное снижение остаточной инфицирующей способности вируса, она никогда не снизится до нуля. Например, снижение инфицирующей способности препарата, содержащего 8,0 lg инфицирующих единиц на миллилитр, на фактор 8,0 lg дает 0,0 lg на миллилитр или одну инфицирующую единицу на миллилитр с учетом предела обнаружения методики.

Опытно-промышленный способ обработки может отличаться от промышленного, даже несмотря на дизайн процесса с уменьшенным масштабом.

Сложение индивидуальных факторов (коэффициентов) снижения вирусной нагрузки, достигнутых за счет схожих механизмов инактивации, может привести к переоценке совокупной очистки от вирусов.

 

6.E. Статистический анализ данных
 

В целях интерпретации результатов исследований очистки от вирусов они должны включать в себя статистический анализ данных. Для подтверждения полученных выводов результаты исследования должны быть статистически значимы в соответствии с приложением N 3 к настоящей главе.

 

6.F. Повторная оценка очистки от вирусов
 

При значимых изменениях процесса производства или очистки необходимо оценить прямое и косвенное их влияние на очистку от вирусов и при необходимости подвергнуть систему повторной оценке. Например, изменения процессов производства могут служить причиной изменения продукции вирусов клеточной линией, изменения этапов производства могут повлиять на степень очистки от вирусов.

 
7. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
 

В настоящей главе охарактеризованы подходы к оценке рисков вирусной контаминации и очистке от вирусов продукта, которые вносят вклад в производство безопасных биотехнологических препаратов, получаемых из клеточных линий человека или животных и описано значение ряда стратегий, включая:

тщательное описание (скрининг) исходного материала клеточного субстрата на предмет наличия вирусных контаминантов;

оценку риска путем выявления контаминантов, тропных к организму человека;

внедрение надлежащей программы испытаний на посторонние вирусы в необработанном продукте;

детальное планирование исследований очистки от вирусов с использованием различных методов инактивации или элиминации вирусов в одном и том же процессе производства с целью достижения максимальной очистки от вирусов;

проведение исследований, направленных на анализ инактивации и элиминации вирусов.

 

Приложение N 1
к главе 2 Правил
проведения исследований
биологических лекарственных
средств Евразийского
экономического союза
 
ТРЕБОВАНИЯ
К ПРЕПАРАТАМ ПОЛУЧЕННЫМ ИЗ ОХАРАКТЕРИЗОВАННЫХ БАНКОВ
КЛЕТОК, КОТОРЫЕ БЫЛИ ВПОСЛЕДСТВИИ ВЫРАЩЕНЫ IN VIVO
 

Для препаратов, производимых из жидкостей, полученных от животных, инокулированных клетками охарактеризованных банков клеток, необходимо представлять дополнительные сведения о животных.

Если возможно, животных, используемых при производстве биотехнологических (биологических) продуктов, необходимо отбирать из четко охарактеризованных беспатогенных колоний. Должно быть проведено полноценное исследование на наличие вирусов (например, вирусов, указанных в таблице 3 главы 2 настоящих Правил). Должны быть описаны карантинные мероприятия для вновь прибывших и заболевших животных, а также должна обеспечиваться достаточность всех методов изоляции, очистки и деконтаминации, применяемых в питомнике, для сдерживания распространения посторонних агентов. Это можно сделать при использовании программы-сигнализатора. Необходимо представить перечень агентов, в отношении которых проводятся испытания. В питомнике или в непосредственной близости к нему должна быть организована ветеринарная служба. Необходимо описать, насколько хорошо виварий изолирован от других отделов производственного объекта. Методы, используемые персоналом в процессе производства препарата, должны быть достаточны для обеспечения вирусной безопасности.

Необходимо полностью описать процедуры содержания животных, включая рацион, график уборки и кормления, положение о периодическом ветеринарном наблюдении, если применимо, а также сведения о содержании животных, которым инокулирован возбудитель. Необходимо также представить описание режимов предварительной иммунизации животных, подготовки инокулята, а также сведения о точке и методе инокуляции.

Первичный собранный материал от животных может рассматриваться в качестве эквивалента необработанного продукта, полученного из биореактора. Именно поэтому к нему применяются все положения для испытаний, указанные в пункте 4 главы 2 настоящих Правил. В дополнение к этому производитель должен оценить бионагрузку в необработанном продукте, определить, свободен ли материал от микоплазм, и провести видоспецифичные пробы, а также испытания in vivo на взрослых и новорожденных мышах.

 

Приложение N 2
к главе 2 Правил
проведения исследований
биологических лекарственных
средств Евразийского
экономического союза
 
ПЕРЕЧЕНЬ
ВИРУСОВ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ИССЛЕДОВАНИЯХ ПО ОЧИСТКЕ ОТ ВИРУСОВ
 
I. ПОЛЕЗНЫЕ "МОДЕЛЬНЫЕ" ВИРУСЫ
 

В качестве неспецифичных "модельных" вирусов, обладающих широким набором физико-химических структур используются:

SV40 (полиомавирус макак 1), вирус полиомиелита человека 1 (Сэбина), парвовирус животных или некоторые другие некрупные безоболочечные вирусы;

вирусы гриппа и парагриппа, вирус Синдбис или другие безоболочечные РНК-вирусы от средних до крупных размеров;

вирусы герпеса (например, ВПГ-1 или вирус псевдобешенства) или некоторые другие ДНК-вирусы от средних до крупных размеров.

Указанные вирусы являются лишь примерами, их использование необязательно.

В качестве специфичных в отношении клеточных линий грызунов "модельных" вирусов используются ретровирусы мышей.

 

II. ВИРУСЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ИССЛЕДОВАНИЯХ
ПО ОЧИСТКЕ ОТ ВИРУСОВ
 

Некоторые вирусы, используемые в исследованиях по очистке от вирусов, перечислены в таблице A-1. Поскольку это исключительно примерный перечень и использование каких-либо вирусов из этой таблицы необязательно, производители вправе предлагать другие вирусы, особенно если они лучше подходят для отдельного процесса производства. Необходимо, как правило, проанализировать способность процесса очищать продукт по меньшей мере от трех различных вирусов с различными характеристиками.

 

 
Таблица A-1
 
Вирусы, используемые в исследованиях по очистке от вирусов
 
Вирус
Семейство
Род
Естественный хозяин
Геном
Оболочка
Размер (нм)
Форма
Резистентность <*>
Вирус везикулярного стоматита рабдовирусы везикуловирус лошадь, корова РНК да
70x150
пуля низкая
Вирус парагриппа парамиксовирусы парамиксовирус различные РНК да
100 - 200
плеосфера низкая
Вирус лейкемии мышей (MuLV) ретровирусы онковирус с типа мышь РНК да
80 - 110
сферическая низкая
Вирус Синдбис тогавирусы альфавирус человек РНК да
60 - 70
сферическая низкая
Вирус вирусной диареи коров (BVDV) флавивирусы пестивирус корова РНК да
50 - 70
плеосфера низкая
Вирус псевдобешенства герпесвирусы   свинья ДНК да
120 - 200
сферическая средняя
Вирус полиомиелита 1 типа пикорнавирусы энтеровирус человек РНК нет
25 - 30
икосаэдрическая средняя
Вирус энцефаломиокардита (EMC) пикорнавирусы кардиовирус мышь РНК нет
25 - 30
икосаэдрическая средняя
Реовирус 3 реовирусы ортореовирус различные РНК нет
60 - 80
сферическая средняя
SV40 паповавирусы полиомавирус обезьяна ДНК нет
40 - 50
икосаэдрическая очень высокая
Парвовирусы (собак, свиней) парвоаирусы парвовирус собака, свинья ДНК нет
18 - 24
икосаэдрическая очень высокая
 

 

<*> Резистентность к физико-химическим воздействиям основана на исследованиях процессов производства. Резистентность относительна к специфичному воздействию и используется для понимания биологии вируса и характера процесса производства. Фактические результаты зависят от вида воздействия.

 

Приложение N 3
к главе 2 Правил
проведения исследований
биологических лекарственных
средств Евразийского
экономического союза
 
ТРЕБОВАНИЯ
К СТАТИСТИЧЕСКИМ ПОДХОДАМ ИНТЕРПРЕТАЦИИ РЕЗУЛЬТАТОВ
ИСПЫТАНИЯ НА ВИРУСЫ
 

1. При определении титра вирусов возникают те же проблемы, что и для всех биологических методов анализа. Чтобы определить достоверность исследования, необходимо проанализировать правильность (accuracy) определения вирусных титров и факторов (коэффициентов) снижения вирусной нагрузки, полученных на их основании, и провести валидацию методик. Целью статистического анализа является подтверждение проведения исследования с приемлемым уровнем компетентности в отношении вирусологических данных.

2. Аналитические методики могут быть качественными и количественными. К качественным методикам относятся методики определения инфицирующей способности на животных и методики инфекционной дозы на культуре ткани (TCID), в которых подсчитывается количество инфицированных и неинфицированных животных или клеток. Затем по доле инфицированных животных или клеток определяются инфицирующие титры. В количественных методиках определяемая инфекционность зависит от вирусной нагрузки. К количественным методикам относятся методики бляшкообразования, в которых каждая бляшка принимается за одну инфекционную единицу, ПЦР в режиме реального времени. Результаты применения как качественных, так и количественных аналитических методик подлежат статистической обработке.

3. Вариабельность результатов методик может быть обусловлена ошибками при разведении, статистическими (случайными) эффектами и различиями в аналитических системах, которые либо неизвестны, либо трудно поддаются контролю. При сравнении результатов различных аналитических циклов (вариация между циклами (between-assay variation)) величина таких эффектов оказывается выше результатов внутри одного цикла (вариация внутри цикла (within-assay variation)).

4. Границы 95 % доверительных интервалов результатов внутри одного цикла должны, как правило, укладываться в интервал

+ 0,5lg от среднего. Вариабельность внутри цикла оценивается с помощью стандартных статистических тестов. Вариабельность между циклами можно определить путем включения препарата сравнения, значение активности (potency) которого должно укладываться в

+ 0,5lg от среднего значения, установленного в лаборатории, чтобы методика была приемлемой. При должном обосновании допускается использовать методики с худшей прецизионностью.

5. По возможности в исследованиях по очистке с использованием "релевантных" и специфичных "модельных" вирусов необходимо рассчитывать границы 95 % доверительных интервалов для установленного фактора (коэффициента) снижения вирусной нагрузки. Если границы 95 % доверительных интервалов для вирусологических методик изучения исходного материала равны

noname.png, а для вирусологических методик изучения материала на следующем этапе обработки равны

noname.png, то границы 95 % доверительных интервалов для фактора (коэффициента) снижения равны:

 

noname.png

 

Вероятность обнаружения вирусов в низкой концентрации

5. Очевидно, что при низкой концентрации вируса (например, 10 - 1000 инфекционных частиц на литр) проба объемом несколько миллилитров может не содержать инфекционных частиц. Вероятность (p), что такая проба не содержит инфекционных вирусов, равна:

 

noname.png

 

где:

V - общий объем подлежащего испытанию материала (л);

v - объем пробы (л);

n - абсолютное количество инфекционных частиц, статистически распределенных в объеме V.

Если V >> V, то уравнение приближенно описывается распределением Пуассона:

 
p = e-cv,
 

где c - концентрация инфекционных частиц на литр, тогда величина с определяется по формуле:

 

noname.png

 

Пример: Если испытуемая проба имеет объем 1 мл, вероятность (p), что в ней не содержится вирус, истинные концентрации которого находятся в диапазоне 10 - 1000 инфекционных частиц на литр, равна:

 

c
10
100
1000
p
0,99
0,90
0,37

 

То есть при концентрации 1000 вирусов на литр, 37 % проб объемом 1 миллилитр не будут содержать вирусных частиц.

6. Если лишь часть проб испытывается на вирусы и результаты отрицательны, необходимо рассчитать количество вирусов, которое должно содержаться в общем количестве проб, чтобы результаты оказались положительными. Полученное значение необходимо учитывать при расчете фактора снижения вирусной нагрузки. Рекомендуется рассчитать 95 % доверительные интервалы. Однако в некоторых случаях, ввиду недостаточного количества материала, их расчет невозможен.

 

Приложение N 4
к главе 2 Правил
проведения исследований
биологических лекарственных
средств Евразийского
экономического союза
 
УКАЗАНИЯ
ПО РАСЧЕТУ ФАКТОРОВ (КОЭФФИЦИЕНТОВ) СНИЖЕНИЯ ВИРУСНОЙ
НАГРУЗКИ В ИССЛЕДОВАНИЯХ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОЧИСТКИ ОТ ВИРУСОВ
 

Фактор (коэффициент) снижения вирусной нагрузки на отдельном этапе очистки или инактивации выражается в виде десятичного логарифма отношения вирусной нагрузки в материале до очистки к вирусной нагрузке в материале после очистки, готовом для передачи его на следующий этап. Если исходный материал имеет объем v', титр 10а', то вирусная нагрузка равна (v')x(10а'), а продукт, прошедший этап очистки (инактивации) имеет объем v", титр 10а" и его вирусная нагрузка равна (v")x(10а"), тогда индивидуальные факторы (коэффициенты) снижения (Ri) рассчитываются по следующей формуле:

 

noname.png

 

Формула учитывает как титры, так и объемы материалов до и после этапа очистки.

Ввиду неизбежной погрешности при определении титра некоторых вирусов индивидуальный фактор (коэффициент) снижения, используемый для расчета совокупного фактора (коэффициента) снижения вирусной нагрузки, должен превышать 1.

Совокупный фактор (коэффициент) снижения вирусной нагрузки всего процесса производства равен сумме логарифмов индивидуальных факторов (коэффициентов) снижения каждого этапа. Он представляет собой логарифм отношения вирусной нагрузки до начала первого этапа очистки и вирусной нагрузки по завершении всех этапов очистки. Факторы (коэффициенты) снижения, как правило, выражаются в логарифмических координатах, то есть, несмотря на то, что остаточная инфицирующая способность вируса никогда не будет снижена до нуля с математической точки зрения, ее можно значительно снизить на практике.

 

Приложение N 5
к главе 2 Правил
проведения исследований
биологических лекарственных
средств Евразийского
экономического союза
 
УКАЗАНИЯ
ПО РАСЧЕТУ ОЖИДАЕМОГО КОЛИЧЕСТВА ВИРУСНЫХ ЧАСТИЦ НА ДОЗУ
 

Расчет применим к вирусам, для которых можно рассчитать исходное их количество, например, для эндогенных вирусов.

Пример.

1. Условия. Измеренная или расчетная концентрация вирусов в сборе клеточной культуры равна 106/мл.

Расчетный фактор очистки от вирусов составляет >1015.

Объем сбора культуры, необходимый для приготовления одной дозы препарата равен 1 л (или 103 мл).

2. Расчет примерного количества частиц на дозу:

 

6 3

(10 вирусных частиц/мл) x (10 мл/доза)

--------------------------------------- =

15

фактор очистки > 10

 

9

10 вирусных частиц/доза

-6

= ------------------------ = < 10 вирусных частиц/доза

15

фактор очистки > 10

 

Таким образом, ожидаемое содержание равно менее чем одна частица на миллион доз.

 

Глава 3
 
ОЦЕНКА ВИРУСНОЙ БЕЗОПАСНОСТИ ИССЛЕДУЕМЫХ
ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ (ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ КЛИНИЧЕСКИХ
ИССЛЕДОВАНИЙ), ПОЛУЧЕННЫХ С ПОМОЩЬЮ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ
МЕТОДОВ
 
1. ВВЕДЕНИЕ
 

Обеспечение вирусной безопасности лекарственных препаратов, полученных с помощью биотехнологических методов, является комплексным процессом, при этом надежная оценка вирусной безопасности исследуемого лекарственного препарата (ИЛП) имеет критическое значение. Настоящая глава содержит рекомендации по данным и документации о вирусной безопасности, которые необходимо включать в состав досье на получение разрешения для проведения клинического исследования биотехнологических препаратов для медицинского применения. Следует также руководствоваться главой 2 настоящих Правил, в которой приведены требования к составлению соответствующих разделов регистрационного досье. Несмотря на то, что глава 2 настоящих Правил не содержит рекомендаций в отношении биотехнологических лекарственных препаратов, изучаемых в клинических исследованиях, их основные принципы совпадают и подлежат выполнению.

Настоящая глава содержит гармонизированный подход к оценке вирусной безопасности исследуемых биотехнологических лекарственных препаратов во время клинических исследований как для спонсоров, так и для регулирующих органов. Это особенно ценно при проведении многоцентровых исследований, потенциально охватывающих различные государства-члены.

 

2. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
 

Область применения настоящей главы распространяется на исследуемые биотехнологические лекарственные препараты для медицинского применения, произведенные из культивированных in vitro клеток, полученных из охарактеризованных банков клеток человеческого или животного происхождения, указанных в главе 2 настоящих Правил. Многие исследуемые лекарственные препараты получены из хорошо охарактеризованных клеточных линий грызунов, например, CHO, NS0 или SP2/0, хотя также используется и находится в стадии разработки ряд других клеточных линий, использование которых следует рассматривать в индивидуальном порядке.

Положения настоящей главы распространяются на моноклональные антитела и исследуемые лекарственные препараты, полученные методом рекомбинантной ДНК, включая рекомбинантные субъединичные вакцины. Однако требования настоящей главы не применяются в отношении исследуемых лекарственных препаратов, содержащих рекомбинантные вирусы или бактерии (как реплицирующиеся, так и нереплицирующиеся), или живых аттенуированных и инактивированных вакцинх. Исследуемые лекарственные препараты, полученные из гибридомных клеток, выращенных in vivo, также не входят в сферу применения настоящей главы.

В настоящей главе изложены требования к вирусной безопасности, применимые ко всем этапам клинической разработки лекарственных препаратов. Она не распространяется на лекарственные препараты, исследуемые исключительно в доклинических испытаниях. Требования к данным, подлежащим включению в регистрационное досье, содержатся в главе 2 настоящих Правил.

 
3. ПРАВОВАЯ ОСНОВА
 

Проведение клинических исследований в государствах-членах регулируется международными договорами и актами, составляющими право Союза, и законодательством государств-членов. Исследуемые лекарственные препараты, изучаемые в клинических исследованиях, должны быть произведены в соответствии с правилами надлежащей производственной практики Союза, утверждаемыми Комиссией.

 

4. ПРАВИЛА
 
4.1. Общие принципы
 

Целью исследований вирусной безопасности биотехнологических исследуемых лекарственных препаратов является подтверждение приемлемого уровня безопасности для субъектов клинических исследований.

Вирусная безопасность зарегистрированного биотехнологического лекарственного препарата обеспечивается тремя взаимодополняющими подходами, включающими в себя:

отбор и испытание клеточных линий и другого сырья человеческого или животного происхождения на вирусную контаминацию;

оценку возможностей последующих после культивирования процессов обработки обеспечивать очистку от инфекционных вирусов;

испытание препарата на определенных этапах производства на наличие контаминирующих вирусов в соответствии с главой 2 настоящих Правил).

В связи с экспериментальным характером производственного процесса и препарата в отношении исследуемых биотехнологических лекарственных препаратов предусматривается сокращенная программа испытаний по обеспечению вирусной безопасности в сравнении с требованиями к данным, необходимым для регистрации лекарственного препарата: во-первых, по объему оценки на наличие вирусов в клетках-продуцентах по завершении производства или в необработанном нерасфасованном продукте в соответствии с подразделом 4.2.3 настоящей главы и, во-вторых, по объему исследований по валидации снижения вирусной нагрузки в соответствии с подразделом 4.2.4 настоящей главы. Такая сокращенная программа будет применима только к клеточным линиям, относимым согласно главе 2 настоящих Правил, к "ситуации 1" и "ситуации 2". Собственный опыт фармацевтического производителя в соответствии с подразделом 4.2.4 настоящей главы также может способствовать сокращению объема исследований вирусной безопасности. Помимо представления данных, оценку риска следует осуществлять с учетом нескольких или всех следующих факторов:

природа и история клеточной линии;

степень установления свойств клеточной линии;

использование сырья человеческого и (или) животного происхождения во время производства и контроля их качества;

возможность контаминации продукта посторонними агентами;

опыт работы производителя с используемой клеточной линией;

опыт применения производителем специальных методик снижения вирусной нагрузки, которые будут использоваться;

опубликованные данные.

 
4.2. Обеспечение вирусной безопасности биотехнологических
исследуемых лекарственных препаратов
 

4.2.1. Квалификация клеточной линии: испытание на наличие вирусов.

Перед началом исследований I фазы необходимо выполнить испытание ГБК на наличие вирусной контаминации в соответствии с главой 2 настоящих Правил. Создание РБК возможно только в процессе клинического исследования, поэтому в отношении некоторых исследуемых биотехнологических лекарственных препаратов, используемых на ранних этапах клинического исследования, он может быть еще не создан. После создания первого РБК он должен быть испытан в соответствии с главой 2 настоящих Правил. Тем не менее при испытании необработанного нерасфасованного продукта в соответствии с подразделом 4.2.3 настоящей главы испытание клеток с предельным для производства клеточным возрастом in vitro не требуется.

Поскольку эндогенные ретровирусы или ретровирусоподобные частицы присутствуют в большинстве клеточных линий, используемых в настоящее время, и есть вероятность того, что они будут содержаться в новой клеточной линии, особое внимание следует уделять испытанию клеточной линии на их наличие.

 

4.2.2. Сырье биологического происхождения.

При оценке вирусной безопасности исследуемых биотехнологических лекарственных препаратов необходимо учитывать биологическое сырье (особенно животного или человеческого происхождения), используемое в производстве. Приемлемыми подходами к оценке его вирусной безопасности являются оценка с учетом рисков вида и происхождения сырья, условий его переработки и испытания, а также его использование в производстве лекарственных препаратов и испытания, проведенные с необработанным нерасфасованным материалом, согласно подразделу 4.2.3 настоящей главы.

В отношении вирусной безопасности сырья биологического происхождения необходимо представить соответствующие документы. Следует руководствоваться документами по обеспечению безопасности при использовании бычьей сыворотки и требованиям Фармакопеи Союза по минимизации риска передачи губчатой энцефалопатии животных.

 

4.2.3. Испытание необработанного нерасфасованного продукта на наличие вирусов.

Независимо от этапа исследования каждую серию необработанного нерасфасованного продукта, которая будет использоваться для производства материалов для клинического исследования (исследуемого лекарственного препарата), необходимо испытать в соответствии с требованиями главы 2 настоящих Правил. Испытуемый образец должен включать в себя клетки (при необходимости), а испытания - тесты in vitro, ПЦР-скрининг на наличие посторонних агентов и оценку наличия ретровирусоподобных частиц, если это применимо. Для нерасфасованных материалов, полученных из клеточных линий CHO, дополнительных испытаний не требуется. Если производство основано на клеточных линиях NS0 или Sp2/0, испытания на инфекционные ретровирусы следует проводить однократно, но в случае существенных изменений в культурах клеток-продуцентов, например, при переводе производства на промышленный масштаб, их необходимо провести повторно. Если производство основано на иных клеточных линиях, испытания на инфекционные ретровирусы и испытания in vivo, предусмотренные подразделом 3.2.3 главы 2 настоящих Правил, следует проводить однократно, но в случае существенных изменений в культурах клеток-продуцентов, например, при переводе производства на промышленный масштаб, их необходимо провести повторно. Рекомендации по указанным испытаниям представлены в таблице 1.

 
Таблица 1
 
Требования к испытаниям необработанного
нерасфасованного продукта
 
 
Испытания in vitro
Испытания на инфекционные ретровирусы <*>
Испытания in vivo <*>
CHO
Да, все полученные нерасфасованные продукты <**>
Нет
Нет
NS0 Sp2/0
Да, все полученные балк-препараты <**>
Да, 1 раз для заданного масштаба производства
Нет
все иные клеточные линии
Да, все полученные балк-препараты <**>
Да, 1 раз для заданного масштаба производства
Да, 1 раз для заданного масштаба производства

 

<*> По возможности, для выявления вирусов, ассоциированных с клетками, испытуемый материал должен содержать клетки или фрагменты клеток. В отношении клеточных культур, подвергающихся перфузии, производитель должен определить и обосновать наиболее подходящий этап для отбора проб, содержащих клетки для целей испытаний. Также допускается получение испытуемого материала из клеток, культивированных сверх срока, используемого для производства серии продукта; в этом случае необходимо обосновать выбранный подход. Испытания на инфекционные ретровирусы могут быть опущены, если более чувствительные тесты показали отрицательные результаты.

<**> Количественное определение ретровирусов или ретровирусоподобных частиц следует проводить только в отношении первых трех серий нерасфасованного продукта на определенном этапе разработки (или на меньшем количестве, если произведено менее трех серий нерасфасованного продукта).

 

Целесообразно включить испытание на мелкий вирус мышей (MMV), если клеточная линия восприимчива к этому вирусу.

При разработке испытаний для необработанного нерасфасованного материала необходимо принять во внимание источник и вирусную безопасность сырья, используемого во время культивирования клеток, согласно подразделу 4.2.2 настоящей главы. Если используется сырье человеческого или животного происхождения, например, бычья сыворотка, могут потребоваться дополнительные специальные испытания.

 

4.2.4. Валидация методов обеспечения вирусной безопасности.

Целями валидации методов являются характеристика и оценка этапов процесса, которые могут считаться эффективными для инактивации (элиминации) вирусов и количественная оценка общей величины снижения содержания вирусов (вирусных частиц), например эндогенных ретровирусных частиц. В каждом случае потребуется индивидуальный подход с учетом характеристик клеточной линии, использования сырья биологического происхождения, а также природы этапов процесса, которые могут быть эффективными в инактивации (элиминации) вирусов.

Независимо от объема прямых испытаний линии клеток-продуцентов на вирусы, в связи с ограничениями методик обнаружения вирусов сохраняется возможность неизвестной контаминации клеток вирусом, изначально присутствующим в клетках или содержащимся в материале биологического происхождения, используемом во время культивирования клеток-продуцентов. Следовательно, даже если сырье биологического происхождения не используется и клеточная линия полностью проверена, необходимо оценить последующие этапы обработки всех исследуемых лекарственных препаратов на предмет способности инактивировать (элиминировать) вирусы.

Валидацию методов обеспечения вирусной безопасности следует провести до начала клинического исследования. Потенциальными контаминантами могут быть оболочечные и безоболочечные вирусы, и исследования по вирусной безопасности должны включать определение как оболочечных, так и малых безоболочечных вирусов, желательно парвовирусов. Необходимо подтвердить, что все вирусы или вирусные частицы, о наличии которых в нерасфасованном сборе было заведомо известно, эффективно инактивированы или элиминированы в ходе последующей обработки продукта. В ситуации 2, предусмотренной главой 2 настоящих Правил, в случае содержания эндогенных ретровирусов или ретровирусоподобных частиц, при валидации инактивации (элиминиации) вирусов необходимо использовать ретровирус для подтверждения полной очистки от частиц, присутствующих в нерасфасованном сборе.

Исследования по снижению вирусной нагрузки следует осуществлять в соответствии с принципами, указанными в главе 2 настоящих Правил, однако не всегда требуется подтверждение устойчивости (то есть влияние показателей процесса производства на снижение вирусной нагрузки). Необходимо представить описание соответствующих этапов очистки препарата, способствующих обеспечению вирусной безопасности. Во время инактивации (элиминации) потенциальных вирусов на этих этапах следует учитывать вирусную безопасность линии клеток-продуцентов, например, вид и степень эндогенной ретровирусной контаминации или использование во время производства материалов человеческого или животного происхождения, а также возможную степень контаминации. Глава 4 настоящих Правил также содержит подробную информацию об этих исследованиях.

Желательно исследовать влияние более чем 1 этапа производства на обеспечение вирусной безопасности и произвести оценку не менее 2 ортогональных стадий. Ортогональные стадии представляют собой стадии процесса, характеризующиеся разными механизмами инактивации (элиминации) вирусов. Критерии эффективности приведены в главе 4 настоящих Правил. Не требуется исследовать этапы производства, которые не предполагают существенного обеспечения вирусной безопасности.

Воспроизводимость эффективного этапа обеспечения вирусной безопасности должна быть подтверждена не менее чем в 2 независимых экспериментах.

При проведении валидационного исследования необходимо использовать предельные параметры технологического процесса (наихудший сценарий), если они известны. Однако в ходе разработки такие наихудшие предельные параметры нового технологического процесса могут быть не установлены. В этих случаях обоснованно применение репрезентативных (модельных) условий при подтверждении производителем осуществления фактического процесса производства в заданном режиме.

Сокращению объема указанных исследований способствуют следующие условия:

исследование одного конкретного этапа инактивации (элиминации) вирусов может быть достаточным, если во время этого этапа может быть продемонстрировано эффективное снижение вирусной нагрузки, обусловленной широким спектром вирусов, включая такие малые безоболочечные вирусы, как парвовирусы. Однако для подтверждения полноценной очистки клеток, подпадающих под ситуацию 2, от ретровирусных частиц обычно необходимо провести оценку более чем 1 этапа производства;

необходимо учитывать предыдущий опыт производителя по использованию определенных стадий производства, следующих после культивирования. Если производитель разрабатывает подобные типы препаратов путем применения отработанных и хорошо охарактеризованных процессов производства, данные по снижению вирусной нагрузки таких препаратов могут быть применены к новому препарату на эквивалентном этапе производства.

Как правило, чтобы использовать данные по этому этапу производства, он должен пройти тщательную проверку, включая детальное изучение параметров процесса производства, обеспечивающих снижение вирусной нагрузки. Если в отношении конкретного этапа есть данные, которые можно использовать для более чем одного препарата, эффективность обеспечения вирусной безопасности в каждом случае должна быть сопоставимой. Обработка нового и уже производимого ранее препарата (препаратов) до этого конкретного этапа должна осуществляться по сходной стратегии.

Необходимо представить обоснование применения внутренних данных разработчика для производства нового препарата, например, на данные об обеспечении вирусной безопасности на определенном этапе производства можно будет ссылаться, если промежуточный продукт, полученный на стадии, предшествующей этому этапу, имеет сопоставимые биохимические свойства и проходит очистку идентичными методами. Производитель должен представить результаты критического анализа этапа производства, на котором будут применяться внутренние данные разработчика, и состав соответствующего промежуточного продукта. Эти сведения должны включать в себя, например, тип фильтра, удельную нагрузку на фильтр, скорость потока, давление и состав промежуточных продуктов (в отношении вирусных фильтров) или размеры колонок, включая высоту слоя наполнителя, нагрузку, состав буферного раствора и промежуточных продуктов производства, а также линейные скорости потоков для хроматографических методов. Помимо этого, каждый новый препарат может иметь компоненты, не содержащиеся в предыдущих препаратах, поэтому необходимо учитывать потенциальное влияние компонентов, специфичных для этого препарата. Анализ должен полностью подтвердить вывод о том, что в обоих случаях используемый этап производства имеет аналогичную способность инактивировать (элиминировать) потенциальные вирусные контаминанты. Если сравнение этого этапа неубедительно или база данных недостаточно убедительна, чтобы исключить опосредованное препаратом влияние на способность процесса снижать вирусную нагрузку, для подтверждения фактической эффективности этапа необходимо осуществить не менее одного цикла обработки с соответствующим вирусом. Если показатели технологического процесса явно отличаются, например, при использовании аналогичного оборудования получены различные хроматографические профили, этап подлежит валидации в соответствии с указанной методикой и принципами, предусмотренными в главе 2 настоящих Правил.

Опубликованные данные могут оказаться полезными для определения возможностей этапа инактивировать (элиминировать) вирусы, а также способствовать пониманию механизмов, лежащих в их основе. Это упрощает изучение ключевых технологических параметров, влияющих на снижение вирусной нагрузки, и установление наихудших предельных значений на определенных этапах, подлежащих валидации. Тем не менее применение опубликованных факторов снижения вирусной нагрузки к конкретному препарату потребует расширенного подтверждения сопоставимости технологических процессов, промежуточных продуктов и гарантирования того, что опосредованные препаратом факторы производства не влияют на снижение вирусной нагрузки. Снижение вирусной нагрузки может зависеть от разных технологических параметров и конкретного состава промежуточного продукта. Более того, заданная способность по снижению вирусной нагрузки может быть специфична для выбранных вирусов (например, при использовании хроматографических методов). Именно поэтому опубликованные данные должны быть тщательно проанализированы.

В связи с использованием специализированных колонок и малым количеством серий препарата на ранних этапах разработки проведение в отношении исследуемых лекарственных препаратов специальных исследований по повторному использованию и регенерации колонок, как правило, не требуется. Тем не менее во всех случаях интенсивного повторного использования колонок для производства исследуемых лекарственных препаратов этот факт следует учитывать при исследовании способности процесса снижать вирусную нагрузку.

 

Ревалидация методов снижения вирусной нагрузки.

Данные об исследуемых лекарственных препаратах, использованных в предыдущем исследовании (например, первом исследовании I фазы), могут быть применены в последующих исследованиях. Однако во время разработки исследуемых лекарственных препаратов могут произойти значительные изменения в процессе производства, и эти изменения могут повлиять прямо или косвенно (если изменения не учитывались во время оценки этапов производства) на способность снижения вирусной нагрузки. Следовательно, если имеющиеся данные не отражают производство исследуемых лекарственных препаратов, используемых в предстоящем клиническом исследовании, повторная оценка должна быть произведена до начала следующих клинических исследований. В зависимости от введенных изменений следует пересмотреть подбор вирусов и при необходимости ввести дополнительные вирусы для обеспечения возможностей процесса снижать вирусную нагрузку. Даже если в соответствии с главой 2 настоящих Правил в продленных клинических исследованиях на поздних стадиях (например, III фазы) полная валидация не требуется, производители должны обосновать выбранный подход с учетом "модельных" вирусов и оценки этапов процесса производства. B соответствии с главой 2 настоящих Правил полномасштабные валидационные исследования вирусной безопасности необходимо проводить после создания окончательного процесса производства и очистки.

 

4.2.5. Описание и аттестация аналитических методик.

Для испытания исходного материала и промежуточных продуктов на наличие вирусов или при оценке способности процесса снижать вирусную нагрузку могут использоваться различные аналитические методики. Методы исследований по обнаружению вирусов включают в себя широкий спектр испытаний in vitro по оценке цитопатического действия (ЦПД) и гемоадсорбции на множестве индикаторных клеточных линий, испытаний in vivo и специфических испытаний на наличие вирусов с применением, например, ПЦР. Для проведения испытаний на наличие ретровирусов могут быть использованы трансмиссионная электронная микроскопия (ТЭМ), анализ методом совместного культивирования с использованием разных линий клеток и исследования на обратную транскриптазу (например, усиленная в препарате обратная транскриптаза (PERT)).

Независимо от фазы клинического исследования необходимо обосновать пригодность аналитических методик, используемых для проверки на наличие вирусов (как качественных, так и количественных методов). Как правило, применяются подразделы 3.2 и 4 главы 2 настоящих Правил. Чтобы дать точное представление об используемом методе и способе его контроля, следует представить достаточно подробное описание аналитических методик, включая реагенты, контроли, процедуру испытания и критерии валидности. При использовании фармакопейных методик необходимо привести точные ссылки.

При необходимости в отношении аналитических методик, использованных при квалификации системы банков клеток и других исходных материалов, так же, как для испытания необработанного нерасфасованного материала на наличие вирусов, следует представить резюме результатов квалификации и (или) валидации аналитических методик в формате таблицы (например, результаты значений, полученных в отношении специфичности с применением положительного и отрицательного контроля, чувствительности, количественного определения и предела обнаружения). Полный отчет о квалификации каждого метода представлять не следует, но необходимо иметь их в наличии для представления по запросу уполномоченных органов государств-членов.

В отношении дополнительных аналитических методик, используемых в исследованиях по снижению вирусной нагрузки, необходимо представить подробную информацию, подтверждающую пригодность этих методик для определения количества вирусных частиц. Информация должна включать в себя описание исследований по оценке, например, предела количественного определения, специфичности, вариабельности внутри исследования, влияния буферного раствора (матрицы) на определение вирусной инфекционности, а также цитотоксичности препарата и буферного раствора, которые могут повлиять на способность выбранных "модельных" вирусов инфицировать индикаторные клетки. Рекомендации по статистической оценке результатов вирусологических испытаний приведены в приложении N 3 к главе 2 настоящих Правил. Если применимо, возможно принятие отчета контрактной лаборатории, выполнившей проверку на наличие вирусов.

 

4.3. Оценка риска вирусной безопасности
 

Помимо представления данных о вирусной безопасности препарата, вместе с заявлением о получении разрешения на проведение клинического исследования необходимо представить оценку риска вирусной безопасности. Основными факторами следует считать факторы, указанные в подразделах 4.1 и 4.2.1 - 4.2.4 настоящей главы. В соответствии с главой 2 настоящих Правил необходимо учитывать результаты испытаний клеточной линии и всего сырья человеческого и животного происхождения на наличие вирусных контаминантов, валидацию вирусной безопасности и проверку препарата на соответствующих этапах процесса производства на отсутствие инфекционных вирусов.

Оценка риска должна включать в себя определение количества предполагаемых частиц на дозу в соответствии с приложением N 5 к главе 2 настоящих Правил и содержать все этапы производственного процесса.

В отдельных случаях при оценке совокупного риска для клинического исследования целесообразно рассмотреть такие клинические параметры, как показание к применению, доза, частота применения, число лиц, которые подвергнутся экспозиции, длительность исследования и иммунологический статус пациентов. В этом контексте следует учесть, что некоторые из этих параметров могут измениться в период между фазами I, II и III. Клинические параметры не должны рассматриваться в качестве параметров, используемых для принятия первоочередных решений, но они могут учитываться при принятии заключительного решения о выдаче разрешения на проведение клинического исследования с точки зрения вирусной безопасности.

Каждую ситуацию следует рассматривать индивидуально.

 

4.4. Повторная оценка вирусной безопасности
во время исследования
 

Во время испытаний исследуемых лекарственных препаратов часто вносятся технологические изменения, при этом некоторые из них могут повлиять на ранее определенную оценку вирусной безопасности. Во всех случаях внесения изменений в процесс производства исследуемого лекарственного препарата, для которого уже была выполнена оценка риска вирусной безопасности, производитель должен документировать все внесенные изменения и принять решение о необходимости переоценки риска по каждому из них. В некоторых случаях будет ясно, что изменение не влияет на оценку риска вирусной безопасности. Однако при явном влиянии или неопределенности исхода следует провести повторную оценку риска и в необходимых случаях провести надлежащие экспериментальные исследования. В этих случаях необходимо учитывать все аспекты обеспечения вирусной безопасности.

В отношении изменений, которые могут снизить валидность исследований по вирусной безопасности, следует обратиться к подразделу "Ревалидация методов снижения вирусной нагрузки" подраздела 4.2.4 настоящей главы.

 

4.5. Формат документации для получения разрешения
на проведение клинического исследования
 

В досье для получения разрешения на проведение клинического исследования необходимо включить раздел, содержащий документы, касающиеся вирусной и ТГЭ безопасности. Все данные должны быть собраны воедино с минимальным количеством ссылок на другие разделы основного досье, что позволит выполнить их единую оценку. Полные отчеты, включая исходные данные об испытании клеточных линий и исследования по вирусной безопасности, необходимо представлять по требованию. Во время оценки представленных данных уполномоченные органы государств-членов вправе запросить эти отчеты, чтобы получить наиболее точное и ясное представление о вирусной безопасности исследуемых лекарственных препаратов. Исходные данные могут быть представлены контрактными или собственными лабораториями как часть отчета. Если заявитель использует ранее полученные собственные данные (то есть данные по другим препаратам), необходимо представить достаточный комплект данных, позволяющих оценить собственные данные и получить уверенность в том, что они валидны или обосновывают разработку исследуемого лекарственного препарата.

 

Глава 4
 
ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДОВ ОБЕСПЕЧЕНИЯ ВИРУСНОЙ
БЕЗОПАСНОСТИ: РАЗРАБОТКА, ПРОВЕДЕНИЕ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ
РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ ПО ВАЛИДАЦИИ МЕТОДОВ
ИНАКТИВАЦИИ И УДАЛЕНИЯ ВИРУСОВ
 
1. ВВЕДЕНИЕ
 

1.1. В настоящей главе рассматривается необходимость проведения и влияния валидационных исследований на вирусы на обеспечение вирусной безопасности биологических препаратов. Основными целями настоящей главы являются представление рекомендаций по планированию валидационного исследования, включая выбор используемых вирусов, и интерпретация полученных данных, особенно в отношении определения этапа процесса, который можно считать эффективным для инактивации и (или) элиминации вирусов.

1.2. В настоящей главе рассматривается валидация процедур инактивации и (или) элиминации вирусов из всех категорий биологических лекарственных препаратов для медицинского применения, за исключением живых вирусных вакцин (в том числе генно-инженерных живых векторов). Виды рассматриваемых препаратов:

препараты, получаемые при культивировании in vitro клеточных линий человеческого или животного происхождения;

препараты, получаемые при культивировании in vivo или из органов и тканей человека или животных;

препараты, полученные из крови или мочи, или других биологических жидкостей человека или животных.

1.3. Риск вирусной контаминации характерен для всех биологических препаратов, производство которых предполагает использование материала животного или человеческого происхождения. Вирусная контаминация биологического препарата может быть обусловлена исходным материалом, например, банками клеток животного происхождения, кровью человека, тканями человека или животных, посторонние агенты могут быть привнесены в процесс производства, например, при использовании сыворотки животных при культивировании клеток.

1.4. Основной причиной передачи вирусов, предусмотренной пунктом 1.3 настоящей главы, является контаминация исходных материалов. Контаминация биологического препарата может также происходить при использовании инфицированного материала в процессе производства или с вспомогательным веществом. В некоторых случаях вирус может быть обнаружен спустя годы после ввода препарата в обращение, поскольку контаминация произошла до получения достаточных знаний о наличии инфекционных агентов (вакцина для профилактики желтой лихорадки, может быть контаминирована вирусом лейкоза птиц, который естественным образом инфицирует куриные яйца, и вирусом гепатита В, содержащимся в сыворотке человека, использованной в качестве стабилизатора, вирус SV40 может контаминировать вакцины для профилактики полиомиелита и аденовирусной инфекции, производимые на первичных культурах клеток почек, взятых от макак-резусов, которые являются естественным резервуаром вируса SV40). Кроме того, вирусы, содержащиеся в плазме человека, например, ВИЧ и вирус гепатита C, могут контаминировать препараты крови.

1.5. В целях контроля потенциальной вирусной контаминации биологических лекарственных препаратов можно использовать три основных взаимодополняющих подхода:

отбор и испытание исходных материалов на предмет отсутствия обнаруживаемых вирусов;

испытание способности производственных процессов элиминировать или инактивировать вирусы;

испытание препарата на соответствующих этапах производства на предмет отсутствия обнаруживаемых вирусов.

Ни один из подходов сам по себе не дает достаточной гарантии, поэтому в целях ее достижения необходимо использовать их комбинацию.

1.6. Испытание исходных материалов является обязательным условием минимизации вирусной контаминации. Испытания могут обнаруживать один или более видов вирусов, однако ни одно отдельное испытание не способно подтвердить присутствие всех известных вирусов. Более того, в целях получения положительного результата любые аналитические системы требуют некоторой минимальной вирусной контаминации, испытания также ограничены статистическими погрешностями при отборе проб. Некоторые испытания, например, на антитела к вирусному гепатиту C в плазме человека, способны измерять маркеры инфекции, которые появляются спустя некоторое время после инфицирования. Аналогичные соображения справедливы и в отношении испытания лекарственного препарата.

1.7. В связи с этим подтверждение отсутствия в биологическом лекарственном препарате инфекционных вирусов во многих случаях происходит не только за счет прямого испытания на их наличие, но также путем подтверждения того, что процесс производства способен элиминировать или инактивировать их. Валидация процесса инактивации и (или) элиминации вирусов может играть ключевую роль в установлении безопасности биологических препаратов, особенно при высокой вероятности контаминации исходного материала и сырья патогенными для человека вирусами, например, препаратов, полученных из плазмы. Кроме того, поскольку во многих случаях в прошлом происходила контаминация агентами, о которой не было известно, и даже отсутствовали подозрения о такой возможности на момент производства, оценка процесса производства может дать определенную уверенность в том, что широкий спектр вирусов (включая неизвестные опасные вирусы) подвергается элиминации.

1.8. Целью настоящей главы является описание общих принципов проведения валидационных исследований и вирусологического подхода, который необходимо использовать при планировании валидационных исследований на вирусную нагрузку. Производители должны использовать правила, содержащиеся в настоящей главе, в отношении конкретного препарата с учетом свойств исходного материала и сырья, используемых при производстве и в процедурах очистки, а также любых других факторов, которые могут влиять на этот аспект безопасности. Производители должны объяснить и обосновать подход, использованный ими в исследованиях по оценке элиминации вирусов, в регистрационном досье.

 

2. ИСТОЧНИКИ ВИРУСНОЙ КОНТАМИНАЦИИ
 

Вирусная контаминация биологических препаратов может быть обусловлена следующим.

2.1. Исходный материал и сырье могут быть контаминированы вирусами, инфицирующими вид животных, являющийся источником материала или сырья. Кровь может содержать различные вирусы, и применение препаратов, полученных из плазмы человека, приводило к инфицированию вирусами гепатитов B и C, ВИЧ, парвовирусом B19 и иногда вирусом гепатита A. Мышиные вирусы, некоторые из которых патогенны для человека, могут контаминировать мышиные гибридомы. Клеточные линии, предназначенные для осуществления генетической манипуляции, могут быть контаминированы вирусами, в связи с чем необходимо внимательно подходить к их выбору и проводить испытания на предмет отсутствия обнаруживаемых посторонних агентов еще до генетической манипуляции, чтобы начать работу с должным образом охарактеризованной клеточной линией.

2.2. Клетки могут быть источником латентной или персистирующей инфекции, например, вируса герпеса или ретровируса, которые могут передаваться вертикально от одного поколения клеток к следующему в виде вирусного генома и которые могут периодически экспрессироваться в качестве инфекционного вируса.

2.3. При создании производственной клеточной линии может быть привнесен контаминирующий вирус, характерный для других видов животных, например, трансформированная вирусом Эпштейна-Барр лимфобластоидная клеточная линия человека, секретирующая моноклональные антитела, может быть инфицирована мышиным ретровирусом после слияния с клетками миеломы мышей.

2.4. Посторонние вирусы могут быть привнесены при использовании в процессе производства контаминированных животных продуктов, например, клеточные культуры могут быть контаминированы бычьими вирусами вследствие использования бычьей сыворотки, или мышиные моноклональные антитела, используемые в аффинной хроматографии, могут контаминировать препарат вирусами мышей.

2.5. Возможны иные источники контаминации, например, производственный персонал или сырье небиологического происхождения.

 

3. ПРОЦЕСС ВАЛИДАЦИИ
 

3.1 Цель валидационных исследований по очистке от вирусов заключается в:

подтверждении того, что процесс производства эффективно инактивирует и (или) элиминирует вирусы, которые известны своей способностью контаминировать исходные материалы и сырье, или вирусы, которые, предположительно, обладают такими свойствами;

непрямом подтверждении того, что процесс производства способен инактивировать и (или) элиминировать новые или непредвиденные вирусы.

Это достигается за счет преднамеренного добавления (spiking) вируса к материалу, находящемуся на различных этапах производства, и измерения степени его элиминации или инактивации в ходе последующих этапов. Этот подход позволяет определить этапы производства, которые эффективны в обеспечении снижения содержания инфекционного вируса; он характеризует общую способность процесса элиминировать инфекционность контаминирующих вирусов.

3.2. Валидационные исследования на вирусы, подобно прямому испытанию материалов на соответствующих этапах, влияют на обеспечение вирусологической безопасности препарата. Вместе с тем, все валидационные исследования на вирусы следует рассматривать как некоторую приближенную оценку истинных возможностей процесса, поскольку проведение идеального валидационного исследования процесса производства может оказаться затруднительным в связи с вовлечением большого числа сложных переменных. Результаты свидетельствуют о том, что даже незначительные модификации в процедуре или определенном лабораторном штамме используемого вируса могут оказывать большое влияние на элиминацию и инактивацию вирусов.

3.3. Если исходный материал или сырье недостаточно охарактеризованы, например, кровь, ткани и органы человека или животных, или если культивирование клеток осуществлялось в условиях in vivo, повышается вероятность вирусной контаминации, поэтому процесс производства, как правило, должен включать в себя один или несколько эффективных этапов инактивации и (или) элиминации вирусов. Препараты, полученные из плазмы, вызывают особые опасения в отношении вирусной безопасности.

3.4. Допускается что, если исходный материал (например, полностью охарактеризованный банк клеток) представляет меньший вирусологический риск, процесс очистки, как правило, не включет специальный этап инактивации и (или) элиминации вирусов, и считается, что валидированный процесс очистки обеспечивал достаточную степень инактивации и (или) элиминации вирусов. Имеющийся клинический опыт не обнаружил какие-либо недостатки этого подхода. Тем не менее некоторые производители моноклональных антител (МкАТ) используют специальные этапы инактивации и (или) элиминации вирусов в процессе производства, поскольку клеточные линии-продуценты МкАТ мышиного происхождения выделяют различное количество потенциально инфекционных ретровирусов.

3.5. Следует помнить, что системам культур клеток присуще поддержание репликации вирусов. В связи с этим, несмотря на то, что банк клеток хорошо охарактеризован, сохраняется риск вирусной контаминации культуры, имеются сообщения о единичных случаях контаминации посторонними вирусами.

3.6. Обоснование проведения требуемых валидационных исследований и их объем зависят от процесса производства и типа препарата (например, вида животных, являющихся источником исходного материала, степени вариабельности исходного материала и сырья, стабильности активного продукта и т.д.). Достаточность исследований будет определяться в индивидуальном порядке.

 

4. ВЫБОР ВИРУСОВ ДЛЯ ВАЛИДАЦИИ
 

4.1. Вирусы для валидации должны, во-первых, быть как можно ближе по своей природе к вирусам, которые могут контаминировать препарат, а во-вторых, обладать как можно более широким диапазоном физико-химических свойств, чтобы определить способность системы элиминировать вирусы в целом.

4.2. В большинстве валидационных исследований используются штаммы вирусов, которые легко получить и количественно определить. Различные лабораторные штаммы вирусов могут обладать отличными друг от друга, а также от естественно встречающихся вирусов свойствами. Следовательно, любой вирус, использованный в валидационном исследовании, является фактически "модельным" вирусом. Производитель должен обосновать выбор вирусов в соответствии с целями валидационного исследованиями и принципами, указанными в настоящей главе. В случае если два сходных вируса можно использовать для валидационых исследований из-за их большого сходства с возможными контаминантами либо из-за сходства их свойств, следует использовать более резистентный вирус, если не обосновано иное.

4.3. Примеры выбора вирусов

Концентраты факторов свертывания, полученные из плазмы человека, подвергались контаминации ВИЧ. В связи с этим производство подобных материалов необходимо оценить на способность процесса очистки от вирусов инактивировать и (или) элиминировать инфекционный ВИЧ.

Клеточные линии, полученные от грызунов, как правило, содержат эндогенные ретровирусные частицы, которые могут быть инфекционными (частицы C-типа) или неинфекционными (частицы A-типа). Если исходный материал или сырье получают из клеточных линий грызунов, процесс производства необходимо оценить на его способность инактивировать и (или) элиминировать один из близкородственных лабораторных ретровирусов мышей.

Примерами вирусов, обладающих широким диапазоном физико-химических свойств, использованных для оценки общей способности процесса элиминировать вирусную инфекционность, являются:

SV40, полиовирус и парвовирус животных - в качестве небольших безоболочечных вирусов;

парагрипп или мышиный ретровирус - в качестве крупных оболочечных РНК-вирусов;

герпесвирус - в качестве крупного ДНК-вируса.

Примеры вирусов, использованных в прошедших валидационных исследованиях, приведены в таблице.

 

 
Таблица
 
Примеры вирусов, использованных в валидационных
исследованиях на вирусы
 
Вирус
Семейство
Род
Естественный хозяин
Геном
Оболочка
Размер (нм)
Форма
Резистентность к физико-химической обработке
Вирус везикулярного стоматита рабдовирусы везикуловирус лошадь, корова РНК да
70x150
пуля низкая
Вирус парагриппа парамиксовирусы парамиксовирус различные РНК да
100 - 200
плеосфера низкая
Вирус иммунодефицита человека ретровирусы лентивирус человек РНК да
80 - 100
сферическая низкая
Вирус лейкоза мышей ретровирусы онковирус с типа мышь РНК да
80 - 110
сферическая низкая
Вирус Синдбис тогавирусы альфавирус человек? РНК да
60 - 70
сферическая низкая
Вирус бычьей вирусной диареи тогавирусы пестивирус корова РНК да
50 - 70
плеосфера низкая
Вирус псевдобешенства герпесвирусы варицелловирус свинья ДНК да
120 -200
сферическая средняя
Вирус полиомиелита 1 типа пикорнавирусы энтеровирус человек РНК нет
25 - 30
икосаэдрическая средняя
Вирус энцефаломиокардита пикорнавирусы кардиовирус мышь РНК нет
25 - 30
икосаэдрическая средняя
Реовирус 3 реовирусы ортореовирус различные РНК нет
60 - 80
сферическая средняя
Гепатит A пикорнавирусы гепатовирус человек РНК нет
25 - 30
икосаэдрическая высокая
SV40 паповавирусы полиомавирус обезьяна ДНК нет
40 - 50
икосаэдрическая очень высокая
Парвовирусы (собак, свиней) парвовирусы парвовирус собака, свинья ДНК нет
18 - 24
икосаэдрическая очень высокая
 

 

Данная таблица содержит неполный перечень вирусов, использованных в валидационных исследованиях. Следовательно, необязательно использовать вирусы, указанные в таблице. Производителям рекомендуется использовать и другие вирусы, особенно если они более пригодны для конкретных производственных процессов.

4.4. Необходимо располагать эффективным, чувствительным и надежным методом количественного определения инфекционности использованных вирусов. Предпочтительно использовать вирусы, которые можно получить в высоком титре, однако это не всегда достижимо.

4.5. Препараты, получаемые из овечьих, козьих и бычьих тканей, могут быть контаминированы такими агентами трансмиссивной губчатой энцефалопатии, как скрейпи, которые накапливаются в центральной нервной системе и лимфоидной ткани. Указания по этим агентам приведены в фармакопее Союза, утверждаемой Комиссией, и отдельной главе настоящих Правил.

 

5. ДИЗАЙН ВАЛИДАЦИОННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
 

5.1. Валидационные исследования предполагают намеренное добавление вирусов на различных этапах производства и измерение степени его элиминации (инактивации) в ходе последующего специального этапа или этапов производства. Необязательно валидировать каждый отдельный этап процесса производства. Предметом валидационного исследования необходимо сделать лишь те этапы, которые, вероятнее всего, вносят вклад в инактивацию (элиминацию) вируса.

5.2. Правила надлежащей производственной практики Союза, утверждаемые Комиссией, не допускают намеренное привнесение какого-либо вируса в производственные технологические линии. В связи с этим валидацию необходимо проводить на отдельном лабораторном оборудовании, предназначенном для вирусологической работы, на разукрупненной (уменьшенной) версии технологической линии, ей должен заниматься персонал, обладающий опытом работы по вирусологии и промышленной биоинженерии. Исследования необходимо проводить в соответствии с правилами надлежащей лабораторной практики Союза, утверждаемыми Комиссией.

5.3. В целях оценки вирусной безопасности препарата обязательным условием приемки результатов, полученных на разукрупненной системе, является сопоставимость модельных и полномасштабных процедур. В связи с этим необходимо путем сравнения таких параметров процесса, как pH, температура, концентрация белка и других компонентов, время реакции, высота колонки (column bed height), линейная скорость потока, отношение скорости потока к высоте (bed height), профиль элюирования и эффективность этапа (например, выход, баланс, специфическая активность, состав), подтвердить валидность разукрупнения. Необходимо проанализировать неизбежные отклонения с точки зрения их потенциального влияния на результаты.

5.4. По возможности необходимо показать, за счет какого процесса достигается снижение вирусной инфекционности (инактивации вируса или элиминации вирусных частиц). Этого можно достичь посредством определения кинетики снижения и (или) баланса вирусной нагрузки, исходя из обстоятельств. Процесс, снижающий вирусную инфекционность, потенциально легче поддается моделированию, чем процессы, обеспечивающие элиминацию частиц. Необходимо изучить кинетику инактивации этапа инактивации вирусов и описать ее в отчетах в табличном и графическом формате. Если слишком быстрая инактивация не позволяет отразить кинетику вирусной нагрузки с помощью описания и регистрации условий процесса, необходимо провести дополнительные исследования, чтобы доказать, что инфекционность действительно снижается за счет инактивации. Таким образом, необходимо внедрить надлежащие контроли, направленные на обнаружение возможного искажающего влияния образца или матрицы, в которую привнесен вирус, на методику количественного определения с установлением пределов обнаружения.

5.5. Необходимо изучить производственные параметры, влияющие на эффективность инактивации (элиминации) вирусов с помощью данного этапа производства, и привести результаты, использованные для установления надлежащих внутрипроизводственных пределов содержания вирусной нагрузки. К критическим параметрам относятся:

такие механические параметры, как скорость потока, скорость перемешивания, размеры колонок, повторное использование колонок и т.д.;

такие физико-химические параметры, как содержание белка, pH, температура, содержание влаги и т.д.

5.6. Антитела, содержащиеся в исходном материале, могут влиять на поведение вируса на этапах разделения и инактивации. В валидационных исследованиях необходимо учесть данное обстоятельство.

5.7. Валидность достигаемого лог-снижения вирусной нагрузки определяется влиянием вариации критических параметров процесса, использованных для установления внутрипроизводственных пределов.

5.8. Опубликованные работы по способности схожих или таких же процессов инактивировать (элиминировать) вирусы могут позволить выявить наиболее эффективные этапы. Однако присущая валидационным исследованиям и обусловленная необходимостью моделирования процесса, выбора используемых вирусов и определения параметров полномасштабного производства в лабораторном масштабе вариабельность означает, что данные о валидации должны основываться на экспериментальных исследованиях, представленных самим заявителем.

5.9. Количество добавляемого в исходный материал вируса на производственном этапе, подлежащем изучению, должно быть как можно большим, чтобы определить способность производственного этапа должным образом инактивировать (элиминировать) вирусы. Однако количество добавляемого вируса не должно существенно нарушать состав производимого материала (количество добавляемого вируса обычно составляет менее 10 %). По возможности вычисленные факторы снижения вирусной нагрузки должны основываться на количестве вируса, которое можно обнаружить в исходном материале после добавления к нему вируса, а не на количестве исходного добавленного в материал вируса.

5.10. По возможности вирус из образцов, взятых из модельных экспериментов, следует титровать без дальнейших манипуляций, таких как ультрафильтрация. Если дальнейшая обработка неизбежна (например, удаление ингибиторов или токсических веществ) или предполагается хранение, направленное на обеспечение одновременного титрования всех образцов, необходимо включить надлежащие контроли с целью определения, какое влияние оказывают эти процедуры на результат исследования. Влияние образца на систему обнаружения, включая токсические эффекты, необходимо документировать, поскольку образцы влияют на пределы обнаружения.

5.11. Количественное определение инфекционности необходимо проводить в соответствии с принципами, определенными правилами надлежащей лабораторной практики Союза, утверждаемыми Комиссией, они могут включать бляшкообразование, обнаружение других цитопатических эффектов, таких как образование синцития или очагов, титрование по конечным точкам (например, методики определения TCID50), обнаружение синтеза вирусных антигенов и другие методы. С целью обеспечения надлежащей статистической правильности результата метод должен обладать достаточной чувствительностью и воспроизводимостью и проводиться с достаточным количеством повторов и контролями в соответствии с приложением N 1 к настоящей главе.

5.12. Методы амплификации нуклеиновых кислот (например, ПЦР) являются подходом, обладающим большой чувствительностью для выявления вирусных геномов, они способны обнаруживать такие вирусы, как гепатит B и C, которые не растут на культурах клеток. Однако важным ограничением этой технологии является обнаружение инактивированного вируса в методике амплификации генома, что может занижать степень вирусной инактивации, достигнутой с помощью потенциально эффективного процесса. ПЦР обладает высокой чувствительностью в исследованиях процессов, зависящих от элиминации вирусов. Основными затруднениями при использовании этой технологии являются квантификация, стандартизация, контроль качества и интерпретация результатов. Необходимо однозначно валидировать и стандартизировать методики ПЦР перед внедрением их в процесс валидации, необходимо проявлять предельную осторожность при интерпретации как положительных, так и отрицательных результатов.

5.13. Необходимо обеспечить надлежащее уничтожение любого вируса, который потенциально мог задержаться в системе, перед повторным использованием данной системы (например, путем очистки колонок и т.д.).

 

6. ИНТЕРПРЕТАЦИЯ ДАННЫХ
 

6.1. При определении эффективности этапа инактивации (элиминации) вирусов необходимо учитывать комбинацию факторов. Оценка этапа исключительно на основании количества инактивированного (элиминированного) вируса может стать причиной ошибочного заключения о том, что процесс, обеспечивающий определенную степень снижения содержания вирусов, будет приводить к получению безопасного препарата. Следующие факторы влияют на эффективность этапа инактивации (элиминации) вирусов, поэтому в каждом случае их необходимо тщательно оценивать:

правильность использованных испытуемых вирусов в соответствии с разделом 4 настоящей главы;

дизайн валидационных исследований в соответствии с разделом 5 настоящей главы;

достигнутое значение снижения вирусной нагрузки (lg). Факторы снижения вирусной нагрузки, равные или превышающие 4,0 lg, свидетельствуют об однозначном влиянии на конкретный исследуемый испытуемый вирус. Вместе с тем следует отметить, что численное значение фактора снижения вирусной нагрузки нельзя использовать в качестве единственной, абсолютной меры эффективности этапа;

кинетику инактивации, которая указывает, является ли измеренный лог-фактор снижения консервативной (стабильной) оценкой. Инактивация вирусов, как правило, не является простой реакцией первого порядка, она обычно состоит из быстрой начальной фазы с последующей медленной фазой. Существенное снижение скорости инактивации со временем может свидетельствовать о снижении эффективности инактивирующего агента или о том, что остаточное содержание вирусов устойчиво к инактивирующему агенту, а это значит, что этап не является ни высокоэффективным, ни устойчивым;

характер инактивации (элиминации) и ее селективность в отношении лишь определенных классов вирусов. Этап процесса инактивации (элиминации) вирусов может быть высокоэффективен в отношении одних вирусов и неэффективен в отношении других (например, обработка Р/Д эффективна против оболочечных, но не безоболочечных вирусов);

подверженность процесса инактивации (элиминации) вирусов небольшим вариациям параметров будет влиять на степень пригодности этапа;

пределы чувствительности методик количественного определения.

На основании совокупной оценки вышеперечисленных факторов принимается решение об отнесении этапа к эффективному, умеренно эффективному или неэффективному по способности к инактивации (элиминации) вирусов.

6.2. Частные варианты интерпретации данных по эффективности отдельного этапа процесса инактивации (элиминации) вирусов определяются следующими условиями:

если на этап процесса привнесено 6,0 lg вируса и из внесенного количества обнаружено 4,0 lg вируса, этап нельзя признать эффективным, хотя он и может вносить вклад в общую элиминацию;

если на этап процесса привнесено 6,0 lg вируса, однако вследствие цитотоксичности препарата предел чувствительности методики в препарате составляет 4,0 lg вируса, подтверждается лишь элиминация 2,0 lg вируса, а этап не признается эффективным. Этап процесса фактически способен элиминировать большее количество вируса, что можно подтвердить с помощью другого дизайна эксперимента;

если на этап процесса привнесено 6,0 lg вируса и из внесенного количества обнаружено 2,0 lg вируса, элиминировано значительное количество вируса. Препарат не является вирусологически стерильным. Однако если такое снижение содержания вирусов воспроизводимо и на него не влияют переменные процесса, процесс обладает определенной эффективностью. Он вносит вклад в совокупное снижение вирусной нагрузки и может признаваться в качестве процесса, снижающего вирусную нагрузку.

если на этап процесса привнесено 6,0 lg вируса и вирус не обнаруживается в препарате с пределом чувствительности, равным 2,0 lg вируса, подтверждена элиминация приблизительно 4,0 lg вируса. Этот показатель является значимым, а процесс фактически способен гарантированно элиминировать гораздо большее количество вируса, чем можно определить при количественном исследовании или заявить в спецификации;

если вирус подвергается инактивации, важна кинетика снижения инфекционности. Если этап процесса предполагает продолжительную инкубацию (например, нагревание в течение десяти часов), а инфекционность быстро достигает пределов обнаружения, процесс, вероятнее всего, обладает большим, чем зачастую можно подтвердить, вирулицидным эффектом. Однако если инфекционность снижается медленно, а пределы обнаружения достигаются к концу обработки, этап дает меньшую гарантию вирусной безопасности.

6.3. Процессы разделения в целом не являются эффективными этапами элиминации вирусов, однако они могут вносить вклад в их элиминацию. Процессы разделения, как правило, обладают рядом переменных, которые сложно поддаются контролю и разукрупненению для валидационных целей. Разделение зависит от крайне специфичных физико-химических свойств вируса, влияющих на его взаимодействие с гелевыми матрицами, и особенностей преципитации. Таким образом, разделение "модельного" вируса может полностью не соответствовать профилю разделения целевого вируса в связи с относительно небольшими различиями в таких поверхностных свойствах, как гликозилирование. Даже "релевантный" вирус, полученный в лаборатории, может проявлять в этом отношении другие свойства по сравнению с "диким" вирусом. Однако если процесс разделения дает воспроизводимое снижение вирусной нагрузки, и если параметры производства, влияющие на разделение, можно должным образом охарактеризовать и контролировать, а желаемую фракцию можно надежно отделить от предположительно содержащей вирусы фракции, тогда этот процесс может подпадать под критерии эффективного этапа.

6.4. Цель валидации заключается в выявлении эффективных этапов инактивации (элиминации) вирусов и получении оценки общей способности процесса производства инактивировать (элиминировать) их. Совокупный фактор снижения вирусной нагрузки, как правило, выражается суммой отдельных факторов в соответствии с приложением N 2 к настоящей главе. Простое суммирование малых факторов снижения, получаемых на каждом этапе, может вводить в заблуждение. Снижение вирусного титра на 1,0 lg и менее является ненадежным вследствие имеющихся ограничений валидационных исследований на очистку от вирусов, поэтому все факторы с такой величиной снижения вирусного титра следует игнорировать. Производители должны дифференцировать эффективные этапы от этапов процесса, которые могут вносить вклад в элиминацию, но обладают меньшей надежностью. Необходимо также учесть вероятность резистентности вируса, выжившего на одном этапе, к последующему этапу или, наоборот, наличия у него повышенной восприимчивости. В целом один этап, обладающий большим эффектом, дает большую гарантию вирусной безопасности, чем несколько этапов, обладающих таким же совокупным эффектом.

6.5. Если с помощью процесса производства достигается небольшое снижение вирусной нагрузки и основным фактором безопасности препарата является элиминация вируса, необходимо предусмотреть специфический дополнительный этап или этапы инактивации (элиминации).

6.6. В отношении всех вирусов производители должны обосновать приемлемость достигнутых факторов снижения вирусной нагрузки. Результаты будут рассматриваться в индивидуальном порядке.

6.7. Необходимо строго соблюдать принципы правил надлежащей производственной практики Союза, утверждаемых Комиссией, предусматривающие разграничение материала, подвергшегося эффективному этапу инактивации (элиминации) вирусов, и необработанного материала.

 

7. ОГРАНИЧЕНИЯ ВАЛИДАЦИОННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
 

Валидационные исследования вносят вклад в обеспечение установления приемлемого уровня безопасности лекарственного препарата, но самостоятельно не обеспечивают безопасность лекарственного препарата. Ряд факторов планирования и проведения валидационных экспериментов по очистке от вирусов может привести к некорректной оценке способности процесса элиминировать естественную вирусную инфекционность. К ним относятся перечисленные ниже факторы.

7.1. Различные лабораторные штаммы вируса могут отличаться по своей чувствительности к одному и тому же виду обработки. Таким образом, определенный выбранный в исследовании вирус может не отражать свойства того вируса, для моделирования процесса очистки от которого он выбран. Природные вирусы могут обладать непредсказуемыми свойствами, например, при взаимодействии с липидами, которое могут влиять на их свойства. Вирусные препараты, используемые в целях валидации процесса производства, чаще всего, получают на культуре тканей. Поведение вируса из тканевой культуры на производственном этапе может отличаться от поведения природного вируса, например, если природный и культивированный вирусы отличаются по чистоте или степени агрегации. Необходимо документировать штаммы вируса, их культивирование и количественное определение, а также пробоподготовку и хранение.

7.2. В некоторых случаях сложение логарифмических факторов снижения вирусной нагрузки недопустимо. Например, если матрица способна адсорбировать 104 инфекционных единиц вируса и далее неспособна адсорбировать материал с сопоставимой аффинностью, будут удалены все вирусы, введенные в количестве 104 инфекционных единиц, но только 1 % вирусов при введении 106 инфекционных единиц. Таким образом, измеряемый клиренс будет розниться в зависимости от введенного титра.

7.3. Инактивация вирусной инфекционности зачастую представляет собой двухфазную кривую с быстрой начальной фазой и более медленной последующей фазой. Нельзя исключать, что вирус, избежавший первого этапа инактивации, будет более устойчив к последующим этапам. Как следствие совокупный фактор снижения вирусной нагрузки необязательно является суммой факторов снижения, рассчитанных на каждом этапе, на котором привносилась суспензия свежеприготовленного вируса. Например, если резистентная фракция принимает форму вирусных агрегатов, инфекционность может быть устойчива к различным видам химической обработки и нагреванию.

7.4. Обработка в модельном масштабе, как правило, будет отличаться от полномасштабной обработки, несмотря на проведение разукрупненного процесса.

7.5 Наличие антител к природному вирусу может влиять на их отделение от вирусной частицы или его чувствительность к химической инактивации, но оно также может осложнять планирование исследования за счет нейтрализации инфекционности. Определение правильности дизайна исследования может быть затруднительным. Содержание антител может являться значимой переменной процесса.

7.6. Небольшие различия в таких производственных параметрах, как содержание белка или температура, могут приводить к большим различиям в снижении вирусной инфекционности за счет различных механизмов.

 

8. ПОВТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
 

8.1 Изменение процесса производства может потребовать проведения нового валидационного исследования.

8.2 По мере накопления теоретических знаний процессы валидации очистки будут требовать перепроверки в целях подтверждения того, что они продолжают удовлетворять приемлемому стандарту.

 

Приложение N 1
к главе 4 Правил
проведения исследований
биологических лекарственных
средств Евразийского
экономического союза
 
УКАЗАНИЯ
ПО СТАТИСТИЧЕСКОЙ ОЦЕНКЕ ВИРУСНЫХ ТИТРОВ И ФАКТОРОВ
СНИЖЕНИЯ ИХ СОДЕРЖАНИЯ, А ТАКЖЕ ОЦЕНКЕ ИХ ВАЛИДНОСТИ
 

1. Титрование вирусов подвержено вариации, что характерно для всех биологических систем количественного определения. Необходимо обеспечить правильность оценки вирусных титров и факторов снижения, полученных на их основе, а также валидность методик, чтобы определить надежность исследования. Цель статистической оценки заключается в установлении того, что исследование проведено на приемлемом уровне вирусологической компетентности.

2. Методы количественного определения могут быть квантовыми и количественными. К квантовым методам относятся методики определения инфекционности у животных и методики определения инфекционной дозы для тканевой культуры (TCID), в которых определяется число инфицированных и неинфицированных животных или клеточных культур. Титр инфекционности определяют как долю инфицированных животных или культур. В количественных методах измеренная инфекционность непрерывно варьирует в зависимости от количества введенного вируса. К количественным методам относятся методики бляшкообразования, в которых каждая бляшка соответствует одной инфекционной единице. Как квантовые, так и количественные методики подлежат статистической оценке.

3. Вариабельность методики может быть обусловлена ошибками разведения, статистическими эффектами и различиями в системе, которые неизвестны либо сложно поддаются контролю. Эти эффекты, будут более выражены при сравнении различных аналитических циклов (вариабельность между аналитическими циклами), чем при сравнении результатов одного аналитического цикла между собой (вариабельность внутри цикла).

4. 95% доверительные границы вариабельности внутри цикла и между циклами должны быть

+ 0,5lg или меньше. Вариабельность между аналитическими циклами следует контролировать путем включения собственного стандартного препарата, оценка активности которого должна находиться приблизительно в пределах

+ 0,5lg от средней оценки, установленной в лаборатории в качестве приемлемой для применяемой методики. Вариабельность внутри цикла можно определять с помощью стандартных методов, описанных в руководствах по аналитическим исследованиям. При достаточном обосновании могут быть приняты результаты любого эксперимента, даже если прецизионность титрования меньше указанных целевых значений.

5. Снижение вирусной нагрузки необходимо рассчитать на основании экспериментально установленных вирусных титров. По возможности необходимо определить 95% доверительные границы факторов снижения. Приблизительно их можно рассчитать с помощью следующей формулы:

 

noname.png

 

где:

noname.png - 95% для содержания вирусов в исходном материале;

noname.png - 95% границы для содержания вирусов в материале после прохождения этапа инактивации (элиминации).

Если после этапа инактивации (элиминации) инфекционность в образце не обнаруживается, фактор снижения невозможно рассчитать статистическими методами. В целях получения оценки минимального фактора снижения титр необходимо принять равным одной инфекционной единице или менее в объеме с наибольшей испытанной концентрацией. Отсутствие признаков инфекционности в пробе будет характерно после применения мощных процессов инактивации. Чтобы максимально увеличить расчетный минимальный фактор снижения вирусной нагрузки с помощью эффективного процесса инактивации, необходимо отбирать как можно большее количество обработанного неразведенного материала.

 

 

Приложение N 2
к главе 4 Правил
проведения исследований
биологических лекарственных
средств Евразийского
экономического союза
 
УКАЗАНИЯ
ПО РАСЧЕТУ ФАКТОРОВ СНИЖЕНИЯ ВИРУСНОЙ НАГРУЗКИ
 

Фактор снижения вирусной нагрузки (R) отдельного этапа инактивации или элиминации задается следующей формулой:

 

noname.png

 

где:

R - фактор снижения вирусной нагрузки;

V1 - объем исходного материала;

T1 - концентрация вируса в исходном материале;

V2 - объем материала после этапа инактивации (элиминации);

T2 - концентрация вируса после этапа инактивации (элиминации).

Данная формула учитывает как титр, так и объем материала до и после этапа инактивации (элиминации).

Факторы снижения, как правило, выражают в виде логарифмов, это значит, что даже при существенном снижении вирусной инфекционности она никогда не будет равна нулю. Согласно требованиям статьи (монографии) "Методы приготовления стерильных препаратов" фармакопеи Союза, утверждаемой Комиссией, в отношении методов стерилизации достаточными признаются процессы, которые обеспечивают гарантированный уровень стерильности (ГУС), равный 10-6 или менее, в отношении бактерий, плесеней и дрожжей. ГУС, равный 10-6, обозначает вероятность содержания не более одного жизнеспособного микроорганизма на 1x106 стерилизованных единиц лекарственного препарата.

 

Глава 5.1
 
ПРОИЗВОДСТВО И КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ
ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ, ПОЛУЧЕННЫХ
МЕТОДОМ РЕКОМБИНАНТНОЙ ДНК
 
1. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
 

Исследования в области молекулярной генетики и химии нуклеиновых кислот сделали возможными выявление, детальный анализ, передачу между организмами и экспрессию при заданных условиях (для синтеза полипептидов) генов, кодирующих естественные, биологически активные белки.

Многие лекарственные препараты, которые ранее было трудно получить из природных источников, сегодня можно получать с использованием технологии рекомбинантной ДНК. Кроме того, возможность синтезировать нуклеиновые кислоты и осуществлять над ними манипуляции позволяет конструировать гены, кодирующие модифицированные продукты, обладающие отличными от их природных аналогов свойствами, или даже принципиально новые продукты.

Общая стратегия при разработке препаратов с помощью технологии рекомбинантной ДНК - внедрение естественных, или намеренно модифицированных естественных последовательностей или новых нуклеотидных последовательностей в вектор, вводимый в подходящий организм-хозяин, для обеспечения эффективной экспрессии целевого продукта. В настоящее время разработаны и применяются прокариотические и эукариотические экспрессирующие системы "вектор/клетка-хозяин". На экспрессию чужеродных генов, вводимых в новый организм с помощью подходящего вектора, влияет комплекс факторов, поэтому важным аспектом разработки препарата является стабильная управляемая экспрессия клонированных ДНК-последовательностей.

В целях контроля качества этих препаратов необходимо придерживаться гибкого подхода, чтобы по мере накопления опыта производства и применения, а также вследствие разработки новых технологий, выполнять модификацию приведенных требований. Выполнение этих требований в отношении отдельных препаратов должно отражать их предполагаемое клиническое применение.

Цель данной главы - упростить сбор и представление данных, в составе регистрационного досье лекарственных препаратов на основе полипептидов, получаемых по технологии рекомбинантной ДНК и предназначенных для медицинского применения в Союзе. Требования настоящей главы связаны также с требованиями других актов в сфере обращения лекарственных средств, входящих в право Союза.

 
2. ВОПРОСЫ ПРОИЗВОДСТВА
 

Производители лекарственных препаратов, получаемых по технологии рекомбинантной ДНК, должны соответствовать требованиям, предъявляемым правилами надлежащей производственной практики Союза, утверждаемых Комиссией, законодательству государств-членов о генетически модифицированных организмах, а также соответствовать общим требованиям по контролю качества биологических лекарственных препаратов.

Необходимо обеспечить должное качество всех реагентов, используемых при производстве лекарственных препаратов, включая компоненты среды культивирования, спецификации на них необходимо включить в регистрационное досье, они должны соответствовать всем действующим требованиям, установленным актами, входящими в право Союза, (например, требованиям по минимизации риска передачи возбудителя губчатой энцефалопатии через лекарственные препараты). Соответствующие спецификации следует включать в регистрационное досье на лекарственный препарат.

Испытания на активность, пирогены, стерильность и т.д., проводимые на препаратах, получаемых с помощью традиционных методов, также применимы к препаратам, получаемым по технологии рекомбинантной ДНК. При производстве препаратов не рекомендуется использовать агенты, способные вызывать сенсибилизацию у некоторых лиц (например, пенициллин или другие β-лактамные антибиотики).

Несмотря на важность всесторонней характеристики лекарственного препарата, следует уделить большое внимание внутрипроизводственному контролю. Эта концепция доказала свою высокую эффективность при контроле качества бактериальных и вирусных вакцин, произведенных традиционными способами.

Некоторые факторы могут негативным образом отразиться на постоянстве качества, безопасности и эффективности препаратов, полученных по технологии рекомбинантной ДНК, поэтому таким факторам следует уделить особое внимание. При этом необходимо учитывать следующее:

все биологические системы претерпевают генетические изменения посредством мутаций и селекции, а чужеродные гены, вводимые в новые клетки хозяина, могут проявлять повышенную генетическую нестабильность. Цель молекулярно-генетических исследований показать, что правильная последовательность была получена и введена в клетку хозяина и что структура и число копий введенной последовательности остаются в клетке неизменными в ходе культивирования до завершения производства. Такие исследования могут дать значимую информацию, которую следует рассматривать в сочетании с результатами исследований целевого белка для обеспечения качества и постоянства свойств препарата;

целевые продукты, экспрессируемые чужеродными клетками-продуцентами, могут структурно, биологически или иммунологически отличаться от своих природных аналогов. Такие изменения могут возникнуть на посттрансляционном уровне или в ходе производства либо очистки и приводить к нежелательным клиническим последствиям. Должно быть показано, что наличие этих изменений допустимо, то есть не приводит к проявлению нежелательных клинических эффектов. В связи с этим присутствие целевых продуктов с такими изменениями необходимо обосновать и подтвердить наличие постоянного контроля;

выбор технологии производства влияет на свойства, разнообразие и количество потенциальных примесей в лекарственном препарате, а также определяет, в отношении каких процессов очистки необходимо подтверждать способность этих процессов элиминировать примеси (например, эндотоксины в препаратах, получаемых в бактериальных клетках, посторонние агенты и ДНК в препаратах, получаемых в клетках млекопитающих);

нежелательная изменчивость культуры в ходе производства может привести к изменениям, благоприятствующим экспрессии других генов в системе "хозяин-вектор", или вызывающим нарушения свойств препарата. Такая изменчивость может привести к изменению самого препарата (например, характера и степени гликозилирования) или его выхода и (или) может стать причиной возникновения количественных и качественных различий в профиле примесей. Именно поэтому обязательны процедуры, обеспечивающие постоянство условий производства, а также характеристик лекарственного препарата;

по мере перехода от лабораторной разработки к полномасштабному промышленному производству происходит существенное масштабирование процессов ферментации и (или) очистки, что может значительно повлиять на качество продукта, включая воздействие на его пространственную структуру, выход и (или) количественные и качественные различия в примесях. В связи с этим в ходе каждого производственного цикла необходимо предусмотреть внутрипроизводственный контроль и испытания по выпускающему контролю качества для подтверждения неизменности свойств получаемого препарата.

Настоящая глава применима ко всем препаратам, получаемым с использованием технологии рекомбинантной ДНК. Для отдельных препаратов могут возникнуть специфичные затруднения при контроле качества, поэтому при производстве и контроле качества каждого препарата следует учитывать все его свойства.

 

3. ГЕНЕТИЧЕСКАЯ РАЗРАБОТКА
 

Генетическая разработка должна соответствовать не только приведенным ниже правилам, но и требованиям, изложенным в главе 5.2 настоящих Правил.

 

3.1. Целевой ген, вектор и клетка-хозяин
 

Следует представить подробное описание клонированного гена. Это описание должно включать данные о его происхождении, подлинности и выделении, а также данные о происхождении и структуре экспрессирующего вектора. Необходимо представить описание штамма-хозяина или клеточной линии, включая историю исходного штамма или клеточной линии, их идентификационные признаки и потенциальные вирусные контаминанты. Особое внимание необходимо уделить возможности перекрестной контаминации другими клетками или вирусами.

 

3.2. Экспрессирующая конструкция
 

Следует представить подробные сведения о нуклеотидной последовательности целевого гена и фланкирующих контрольных участков экспрессирующего вектора, чтобы подтвердить, что конструкция гена идентична желаемой. Следует подробно описать этапы сборки экспрессирующей конструкции. Следует представить подробную карту и полную аннотированную последовательность функционально значимых участков вектора с указанием участков, секвенированных при создании конструкции, и участков, последовательность которых была определена на основе литературных данных. Последовательность в области точек лигирования фрагментов (непосредственно влияющих на экспрессию введенного гена) в ходе сборки конструкции необходимо подтвердить секвенированием. Необходимо идентифицировать все известные экспрессирующиеся последовательности.

 

3.3. Состояние рекомбинантной ДНК в клетке хозяина
 

Следует описать метод, с помощью которого вектор введен в клетку хозяина, и состояние рекомбинантной ДНК в ней (интегрированная или внехромосомная, число копий и т.д.). В отношении внехромосомных экспрессирующих систем необходимо определить процент клеток, сохраняющих экспрессирующую конструкцию. Последовательность экспрессирующей конструкции, кодирующую рекомбинантный препарат, необходимо проверить на уровне банка клеток. В системах, содержащих множественные интегрированные копии гена, полученные в результате амплификации или без нее, в дополнение к секвенированию молекул мРНК или кДНК следует провести детальное исследование с использованием разных рестрикционных ферментов и Саузерн-блоттинга, чтобы представить убедительные данные о целостности экспрессирующегося гена (генов).

 

3.4. Экспрессия
 

Следует детально описать стратегию обеспечения и контроля экспрессии соответствующего гена в ходе производства.

 

3.5. Стабильность экспрессирующей системы

 

Стабильность генетических и фенотипических характеристик системы "хозяин-вектор" необходимо исследовать до и после достижения уровня удвоения популяции или числа генераций, используемых при рутинном производстве (клетки предельного для производства клеточного возраста in vitro). Экспрессирующую конструкцию следует анализировать в клетках предельного для производства клеточного возраста in vitro, по меньшей мере, 1 раз для каждого главного банка клеток.

По результатам исследований стабильности необходимо также получить подробную информацию о:

числе копий гена относительно производительности культуры;

делециях и (или) вставках, влияющих на любую часть экспрессирующего вектора;

произведенном белке.

Анализ следует выполнять таким образом, чтобы его результаты могли подтвердить то, что число вариантов продукта ниже допустимого предела, устанавливаемого в индивидуальном порядке в зависимости от природы препарата и его предлагаемого применения. Можно провести анализ на уровне белка и (или) ДНК. Какой бы метод ни использовался, он должен пройти валидацию и для него должен быть определен предел обнаружения.

 

4. КОНТРОЛЬ БАНКОВ КЛЕТОК
 

Необходимо следовать требованиям, изложенным в главе 1 настоящих Правил.

 

5. ФЕРМЕНТАЦИЯ ИЛИ КУЛЬТИВИРОВАНИЕ КЛЕТОК
 

Необходимо представить четкое определение серии продукта, который подвергнется дальнейшей обработке.

Следует представить подробные данные по ферментации или культивированию клеток с описанием внутрипроизводственного контроля. Необходимо определить критерии отбраковки сбора клеток и преждевременного прекращения культивирования.

Наличие, степень и характер любой микробной контаминации в сосудах для культивирования следует внимательно изучить на соответствующей стадии в конце каждого производственного цикла. Необходимо представить подробную информацию для подтверждения достаточной чувствительности методов, используемых для выявления контаминации, и необходимо установить допустимые пределы контаминации.

В идеальном случае одновременно в одной производственной зоне следует культивировать не более одной клеточной линии. При параллельном культивировании других линий клеток следует документировать данные о разных клеточных линиях и представить результаты валидации, подтверждающие отсутствие (невозможность) перекрестной контаминации.

 

5.1. Производство с однократным сбором
 

Следует определить максимально допустимое число пассажей или удвоений популяции клеток при производстве. При определении этих показателей необходимо основываться на данных по стабильности системы "клетка-хозяин-вектор" на предельном для производства клеточном возрасте in vitro и превышающим его. Следует представить данные о постоянстве роста культуры и об обеспечении выхода препарата в определенных пределах. В конце производственных циклов следует проводить мониторинг характеристик клетки-хозяина и вектора. Необходимо представить подтверждение того, что вариабельность выхода препарата укладывается в установленные пределы и основные свойства и качество препарата остаются неизменными по ряду специфичных параметров.

 

5.2. Производство с многократным сбором

 

Следует определить период непрерывного культивирования, основываясь на данных о стабильности системы и постоянстве качества продукта в рамках этого периода и в течение большего периода времени. На протяжении культивирования требуется мониторинг системы производства. Требуемая частота и тип мониторинга зависят от нескольких факторов, включая тип экспрессирующей системы и препарата, а также общую продолжительность периода непрерывного культивирования. Приемлемость сборов для последующей обработки должна строго зависеть от использующегося режима мониторинга. Необходимо представить подтверждение того, что выход препарата укладывается в установленные пределы и основные свойства и качество препарата остаются неизменными по ряду специфичных параметров.

 
6. ОЧИСТКА ПРОДУКТА
 
6.1. Методы
 

Следует подробно описать, обосновать и валидировать методы, используемые для очистки продукта и применяемого внутрипроизводственного контроля, включая заданные в спецификациях допустимые пределы. Использование методик, включающих аффинную хроматографию (например, с использованием моноклональных антител) должно сопровождаться надлежащими мерами, обеспечивающими отсутствие негативного влияния этих веществ и любых других потенциальных контаминантов, образующихся при их использовании, на качество и безопасность лекарственного препарата. Следует учитывать требования, содержащиеся в главе 10 настоящих Правил и главе 4 настоящих Правил по валидации методов обеспечения вирусной безопасности.

Следует тщательно определить критерии повторной переработки всех промежуточных продуктов и готового нерасфасованного продукта, провести валидацию и обосновать их применимость.

 

6.2. Валидация процедуры очистки
 

Следует тщательно проанализировать возможности процесса очистки элиминировать (инактивировать) нежелательные белки, нуклеиновые кислоты, углеводы, вирусы, происходящие из клеток хозяина, и другие примеси, включая родственные белки.

Следует провести исследование с использованием тщательно отобранной группы вирусов, обладающих широким диапазоном физико-химических свойств, значимых для их поведения в ходе очистки в соответствии требованиями главы 4 настоящих Правил и намеренно привнесенных в неочищенный продукт (spiking). Следует также подтвердить способность процесса очистки элиминировать (инактивировать) специфичные контаминанты, такие как белки клетки-хозяина, ДНК и другие потенциальные производственные примеси. При необходимости с этой целью можно использовать такие контаминанты в концентрациях, превышающих ожидаемую в ходе нормального производства (spiking). Следует определить фактор снижения содержания таких контаминантов на каждой стадии очистки и общий фактор снижения их содержания.

Валидация процесса очистки должна также включать обоснование рабочих условий, например, емкости колонки, регенерации и санитарной обработки колонок и продолжительности использования колонок. Колонки также следует подвергать валидации в отношении вымывания лигандов (например, красителя, аффинного лиганда и др.) и (или) хроматографического субстрата в течение ожидаемого срока службы колонки.

 

7. АКТИВНАЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ СУБСТАЦНИЯ
 
7.1. Установление характеристик активной
фармацевтической субстанции
 

7.1.1. Физико-химическая характеристика, относительная молекулярная масса, изоэлектрическая точка.

Необходимо тщательно установить характеристики активной фармацевтической субстанции с помощью физико-химических и биологических методов. Особое внимание следует уделить использованию широкого диапазона аналитических методик, оценивающих разные физико-химические свойства молекулы; например, размер, заряд, изоэлектрическую точку и гидрофобность. Перечень аналитических возможностей не входит в настоящую главу. Далее представлены отдельные требования к разновидностям анализа.

 

7.1.2. Подтверждение структуры активной фармацевтической субстанции (включая сравнение с стандартным материалом или природным продуктом).

Следует представить данные об аминокислотной последовательности продукта гена в объеме, достаточном для его адекватной характеристики. Необходимая степень подробности описания генетической последовательности зависит от размера и сложности молекулы, а также от использования других испытаний для установления характеристик. Во многих случаях для оценки последовательности возможно использование разделения с помощью ВЭЖХ с последующим секвенированием пептидов, полученных с помощью ферментативного расщепления. Следует обратить внимание на возможное наличие N-концевого метионина и N-формилметионина, сигнальных или лидерных последовательностей, других возможных N и C-концевых модификаций (протеолитический процессинг). Следует рассмотреть возможность использования современных методов масс-спектрометрии при характеристике первичной структуры.

 

7.1.3. Посттрансляционные модификации

Помимо протеолитического процессинга потенциальными типами посттрансляционных модификаций являются N и О-гликозилирование и, например, ацетилирование, гидроксилирование и γ-карбоксилирование. Кроме того, существуют посттрансляционные модификации, возникающие в результате процессов расщепления, например, дезаминирования и окисления.

Некоторые препараты рекомбинантных ДНК являются гликопротеинами. Существует огромное множество олигосахаридных структур, которые характеризуются гетерогенностью гликоформ как в их естественной форме, так и образующихся по технологии рекомбинантных ДНК. На характер этой гетерогенности могут влиять многие факторы. Профиль гликозилирования молекулы может играть важную роль при определении ее активности особенно in vivo. Объем проводимого анализа должен определяться ролью, которую играют углеводные группы, если эти данные известны. Следует рассмотреть весь диапазон разных аналитических методик (например, количественное изоэлектрическое фокусирование или капиллярный электрофорез, анионообменная хроматография для анализа моносахаридного компонента и определения олигосахаридов, лектин-аффинная хроматография и масс-спектрометрия).

 

7.1.4. Данные о конформации макромолекул.

Рекомендуется применять соответствующие испытания, позволяющие установить то, что продукт имеет желаемую конформационную структуру и степень агрегированности. Примерами подходящих для таких целей методов являются электрофорез в полиакриламидном геле, изоэлектрическое фокусирование, высокоэффективная жидкостная хроматография (эксклюзионная, обращенно-фазовая, ионообменная, аффинная), пептидное картирование с последующим секвенированием, светорассеяние, ультрафиолетовая спектроскопия, круговой дихроизм и масс-спектроскопия. Значимая информация получается при проведении дополнительных исследований продукта, используя, например, ядерно-магнитную резонансную спектроскопию, рентгеновскую кристаллографию и соответствующие иммунохимические методы.

 

7.1.5. Установление биологических и иммунологических характеристик молекул, способ выражения дозировки продукта.

Для биологической и иммунологической характеристики следует использовать как можно более широкий набор методов. Необходимо определить удельную активность высокоочищенного материала (единицы активности на массу продукта).

По возможности биологическую активность продукта и его физические характеристики, включая аминокислотную последовательность, следует сравнивать с аналогичными показателями высокоочищенного продукта природного происхождения.

 
7.2. Чистота
 

Необходимо представить данные о контаминантах, наличие которых ожидается в готовом обработанном продукте. Необходимо обосновать допустимую степень контаминации и представить критерии приемлемости или отбраковки промышленной серии. Важно оценивать чистоту препарата с использованием как можно более широкого диапазона методик, включая физико-химические и иммунологические. Необходимо провести испытания на наличие нежелательных материалов, проистекающих от клеток хозяина, а также материалов, которые могли быть использованы (добавлены) в процессе производства или очистки, и, если применимо, контаминации вирусами и нуклеиновыми кислотами.

 

8. ПОСТОЯНСТВО ХАРАКТЕРИСТИК И ПОСЕРИЙНЫЙ КОНТРОЛЬ
ГОТОВОЙ НЕРАСФАСОВАННОЙ (БАЛК) ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ СУБСТАНЦИИ
 

В целях установления постоянства характеристик подлинности, чистоты и активности необходимо провести всесторонний анализ начальных серий продукта. Впоследствии можно будет ограничиться сокращенным набором испытаний, который представлен ниже. Следует четко различать аналитические испытания, проводимые в ходе разработки препарата с целью полного установления характеристик фармацевтической субстанции, и испытания, рутинно выполняемые с каждой серией очищенного нерасфасованного продукта.

 

8.1. Постоянство характеристик
 

Число последовательных серий нерасфасованного обработанного продукта, подвергшихся анализу, должно составлять не менее 5 серий (при достаточном обосновании допустимо меньшее число серий). Их следует охарактеризовать настолько полно, насколько это возможно, чтобы подтвердить постоянство состава. При производстве с многократным сбором продукта, как правило, следует исследовать серии продукта из разных циклов культивирования. Следует использовать биологические, физико-химические и иммунологические методы для характеристики и анализа активной фармацевтической субстанции (включая методы, подтверждающие постоянство профиля гликозилирования гликопротеинов) и методы выявления и идентификации примесей. Все выявленные различия между сериями необходимо документировать.

 

8.2. Посерийный контроль качества
 

8.2.1. Подлинность.

Для подтверждения подлинности каждой серии препарата необходимо выбрать часть испытаний, использованных для характеристики очищенной активной фармацевтической субстанции в соответствии с указания раздела 7.1 настоящей главы. Используемые методы должны включать испытания физико-химических и иммунологических свойств вместе с испытанием на ожидаемую биологическую активность. В зависимости от масштабов других испытаний на подлинность следует проводить верификацию N- или С-концевой аминокислотной последовательности или использовать другие методы, например, пептидное картирование.

 

8.2.2. Чистота.

Степень желаемой и достижимой чистоты будет зависеть от нескольких факторов: природы и целевого назначения продукта, метода его производства и очистки, а также от степени постоянства характеристик производственного процесса. Используя современные технологические процессы, можно добиться очень высокой степени чистоты большинства препаратов.

Следует определять чистоту продукта в каждой серии, она должна оставаться в заданных пределах. Анализ должен включать чувствительные и надежные методы исследования ДНК клетки-хозяина и (или) вектора, которым необходимо подвергать каждую серию продукта, приготовленного из линий клеток млекопитающих, при этом необходимо установить верхнее предельное содержание ДНК. Рекомендуется также проводить испытания каждой серии нерасфасованного продукта, полученного из других эукариотических клеточных систем, на содержание ДНК и установить предельное содержание ДНК. В прокариотических экспрессирующих системах следует проводить испытания на ДНК, если это необходимо для обеспечения качества препарата. Также необходимо с помощью достаточно чувствительного метода количественного определения определять остаточные клеточные белки путем проведения анализа с соответствующей чувствительностью (например, parts per million (ppm), частей на миллион) и установить строгое верхнее предельное их содержание. В некоторых случаях потенциальные примеси, например ДНК, могут быть выявлены в промежуточных продуктах очистки на более раннем этапе.

 

8.2.3. Испытание на активность.

Следует определить активность каждой серии препарата (например, в единицах биологической активности на миллилитр), по возможности используя соответствующий национальный или международный стандартный препарат, калиброванный в единицах биологической активности как это указано в разделе 9 настоящей главы.

Следует оценить удельную активность препарата (единицы биологической активности на единицу массы препарата). Оцененную удельную активность необходимо документировать. Для стандартизации определения удельной активности необходимо использовать высокоочищенный стандартный препарат в соответствии с разделом 9 настоящей главы.

Рекомендуется оценить корреляцию между результатами определения активности биологическими методами и физико-химическими методами анализа и представить полученные данные. По возможности серии следует стандартизовать, используя точные физико-химические методики, а биологический анализ следует применять для подтверждения биологической активности препарата "в указанных пределах".

 
9. СПЕЦИФИКАЦИЯ И СТАНДАРТНЫЕ МАТЕРИАЛЫ
 

Исследования, указанные в разделе 7 настоящей главы, позволяют подготовить окончательную спецификацию на препарат, если они подтверждаются данными, полученными при исследованиях последовательных серий, и данными посерийного контроля в соответствии с разделом 8 настоящей главы.

Правильно подобранную серию препарата, предпочтительно изученную клинически, следует полностью охарактеризовать с точки зрения ее химического состава, чистоты, активности и биологической активности, включая по возможности полное аминокислотное секвенирование. Исследованную таким образом серию препарата рекомендуется сохранить для использования в качестве химического и биологического стандартного материала.

Следует установить критерии продолжительности использования (срока годности) и (или) возможного повторного испытания и квалификации стандартных образцов.

 

10. ЛЕКАРСТВЕННЫЙ ПРЕПАРАТ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ РАЗРАБОТКА
 

Разработку лекарственного препарата необходимо подробно описать и обосновать, уделив особое внимание описанию наличия и содержания стабилизатора (например, альбумина и (или) детергентов). Необходимо подтвердить, что лекарственный препарат в окончательных контейнерах соответствует требованиям фармакопеи Союза, утверждаемой Комиссией, и актов в сфере обращения лекарственных средств, входящих в право Союза. При невозможности выполнения испытаний производитель должен обосновать их исключение.

 

Определения

Для целей настоящей главы используются понятия (термины), которые означают следующее:

"готовая нерасфасованная фармацевтическая субстанция" - получаемый из нерасфасованного сбора по завершении процесса производства готовый продукт, который хранится в одном контейнере или при необходимости в нескольких одинаковых контейнерах и используется при производстве готовой лекарственной формы. Производство серии готового продукта должно быть четко описано и подробно документировано производителем;

"лекарственный препарат" - активная фармацевтическая субстанция в составе лекарственной формы, расфасованной в первичную упаковку (укупоренные контейнеры) для ее сохранности, которая является лекарственным препаратом. Контейнеры, составляющие одну серию фасовки, должны обрабатываться в рамках одного производственного цикла, их содержимое и биологическая активность должны быть однородны;

"нерасфасованный сбор" - однородный пул отдельных сборов или лизатов, обрабатываемый в ходе одного цикла очистки.

 

Глава 5.2
 
АНАЛИЗ ЭКСПРЕССИРУЮЩЕЙ КОНСТРУКЦИИ КЛЕТОК,
ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ПРОИЗВОДСТВЕ БЕЛКОВЫХ ПРЕПАРАТОВ, ПОЛУЧЕННЫХ
ПО ТЕХНОЛОГИИ РЕКОМБИНАНТНОЙ ДНК
 
1. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
 

Настоящая глава содержит указания по определению характеристик экспрессирующей конструкции, предназначенной для синтеза белковых препаратов по технологии рекомбинантной ДНК в эукариотических и прокариотических клетках и данные, важные для оценки структуры экспрессирующих конструкций, используемых в производстве белков на основе рекомбинантной ДНК. Рассмотрение всех аспектов качества лекарственных препаратов, полученных по технологии рекомбинантной ДНК, не является целью настоящей главы.

Экспрессирующая конструкция - экспрессирующий вектор, содержащий последовательность, кодирующую рекомбинантный белок. Для обеспечения качества и постоянства свойств лекарственного препарата следует анализировать области экспрессирующих конструкций с использованием методов изучения нуклеиновых кислот в сочетании с подходами, применяемыми для анализа очищенных рекомбинантных белков. Анализ экспрессирующих конструкций на уровне нуклеиновых кислот является элементом целостного процесса оценки качества, при этом в таком исследовании оценивается только кодирующая последовательность рекомбинантного гена, но не точность трансляции или другие характеристики рекомбинантного белка, например, вторичная, третичная структуры и посттрансляционные модификации.

 

2. ОБОСНОВАНИЕ АНАЛИЗА ЭКСПРЕССИРУЮЩЕЙ КОНСТРУКЦИИ
 

Цель анализа экспрессирующей конструкции - подтвердить, что в клетку-хозяина внедрена правильная кодирующая последовательность продукта и она поддерживается в ней в течение культивирования до окончания производственного процесса. Генетическая последовательность рекомбианантных белков, синтезируемая в живых клетках, может подвергаться мутациям, способным изменить свойства белка, что может привести к негативным последствиям у пациентов. Ни один экспериментальный подход не позволяет выявить одновременно все возможные модификации белков. Для изучения аминокислотной последовательности и структурных особенностей экспрессируещегося белка, обусловленного посттрансляционными модификациями, например, протеолитическим процессингом, гликозилированием, фосфорилированием и ацетилированием, допускается использование методов белкового анализа. Белковый анализ может не выявить все изменения структуры рекомбинантного белка, обусловленные мутациями в кодирующей его последовательности. В этом случае данные анализа нуклеиновых кислот могут представлять особое значение. Относительная важность анализа нуклеиновых кислот и белков для разных препаратов различается.

Анализ нуклеиновых кислот можно применять для верификации кодирующей последовательности, а также для оценки физического состояния экспрессирующей конструкции. Анализ нуклеиновых кислот проводят, чтобы убедиться, что экспрессируемый белок имеет правильную аминокислотную последовательность, однако этот метод не предназначен для обнаружения малых количеств вариантных последовательностей. Если клетки-продуценты содержат множество встроенных копий экспрессирующей конструкции, не все из которых транскрибируются, наиболее подходящим методом может быть исследование самих продуктов транскрипции при помощи анализа мРНК или кДНК, а не исследование геномной ДНК. Аналитические подходы, направленные на изучение всей совокупности нуклеиновых кислот, например, проводимые на пуле клонов или материале, амплифицированном при помощи полимеразной цепной реакции, можно рассматривать как альтернативу методам, зависящим от отбора отдельных клонов ДНК. Возможно использование других методик, позволяющих быстро и с достаточной чувствительностью верифицировать в экспрессирующей конструкции последовательность, кодирующую рекомбинантный белок.

В настоящей главе описываются данные, которые следует учитывать при составлении характеристики экспрессирующей конструкции в процессе разработки и валидации производственного процесса. Аналитические методики должны пройти валидацию для подтверждения способности обнаружения последовательности. Валидационная документация должна по меньшей мере включать расчет пределов обнаружения вариантных последовательностей, для этого необходимо провести валидацию методик секвенирования нуклеиновых кислот либо белков. Принципы и рекомендации по анализу, описанные в настоящей главе, необходимо регулярно пересматривать для учета новых технических достижений и научных данных.

 

3. УСТАНОВЛЕНИЕ ХАРАКТЕРИСТИК ЭКСПРЕССИРУЮЩЕЙ СИСТЕМЫ
 
3.1. Экспрессирующая конструкция и клон клеток,
использованные для создания главного банка клеток
 

Производитель должен описать происхождение нуклеотидной последовательности, кодирующей белок. Это описание должно включать идентификацию и источник клеток, из которых получена последовательность нуклеотидов была исходно. Необходимо приложить описание методов, применявшихся для получения ДНК, кодирующей белок.

Необходимо представить подробное описание этапов сборки экспрессирующей конструкции. Это описание должно включать источник и функцию компонентов конструкции, например, ориджинов (точек начала) репликации, генов антибиотикорезистентности, промоторов, энхансеров, а также является ли белок продуктом слияния (химерным). Необходимо представить подробную карту компонентов и полную последовательность плазмиды с указанием участков, секвенированных в ходе создания конструкции, и участков, последовательность которых была взята из литературных данных. Необходимо указать другие экспрессирующиеся белки, кодируемые этой плазмидой. При помощи секвенирования ДНК необходимо определить нуклеотидную последовательность участка, кодирующего целевой ген, а также связанные с ним фланкирующие области, введенные в вектор, включая области в точках лигирования.

Следует представить описание метода введения экспрессирующей конструкции в клетку-хозяина. Кроме того, необходимо подробно описать методы, использованные для амплификации экспрессирующей конструкции, и критерии отбора клона клеток в качестве будущего продуцента.

 

3.2. Система банков клеток
 

Для синтеза рекомбинантных белков необходимо использовать только надлежащим образом охарактеризованные ГБК и РБК. Банк клеток представляет собой комплект хранящихся в определенных условиях контейнеров одинакового состава, каждый из которых содержит аликвоту, отобранную из одного и того же пула клеток. ГБК обычно получают из отобранного клона клеток, содержащего экспрессирующую конструкцию. РБК получают, культивируя клетки из одного или нескольких контейнеров ГБК. В регистрационном досье необходимо подробно описать процесс получения клеточной линии и формирования банка клеток, включая методы и реагенты, применявшиеся при культивировании, клеточный возраст in vitro и условия хранения. Во всех банках клеток должно быть определено наличие значимых генотипических и фенотипических маркеров, которые могут включать экспрессию рекомбинантного белка и наличие экспрессирующей конструкции.

Экспрессирующую конструкцию в ГБК следует анализировать согласно приведенной ниже последовательности испытаний. Если такой анализ на ГБК провести невозможно, его необходимо выполнить на каждом из рабочих банков.

Для определения числа копий экспрессирующей конструкции, выявления в ней инсерций или делеций, а также для установления числа участков интеграции следует применять картирование с использованием рестрикционных эндонуклеаз или другие подходящие методы. Для внехромосомных экспрессирующих систем следует определить процент клеток хозяина, сохраняющих экспрессирующую конструкцию.

Необходимо подтвердить (верифицировать) правильность последовательности экспрессирующей конструкции, кодирующей рекомбинантный белок. Для внехромосомных экспрессирующих систем следует изолировать экспрессирующую конструкцию и верифицировать нуклеотидную последовательность, кодирующую белок, не проводя дальнейшее клонирование. Для клеток с хромосомными копиями экспрессирующей конструкции нуклеотидную последовательность, кодирующую белок, следует подтверждать с помощью повторного клонирования и секвенирования хромосомных копий. В качестве альтернативного варианта нуклеотидную последовательность, кодирующую белок, можно верифицировать секвенированием пула клонов кДНК или материала, амплифицированного с помощью полимеразной цепной реакции. Кодирующая последовательность должна быть идентична (в границах предела обнаружения используемой методики) последовательности, требуемой для экспрессирующей конструкции, описанной в подразделе 3.1 настоящей главы, кроме того, она должна соответствовать ожидаемой аминокислотной последовательности белка.

 
3.3. Предельный для производства клеточный возраст in vitro
 

Предельный для производства клеточный возраст in vitro необходимо устанавливать на основе данных, полученных при культивировании клеток-продуцентов до предлагаемого клеточного возраста in vitro или в течение большего периода времени в рамках опытно-промышленного или промышленного производства. Как правило клетки-продуценты получают, культивируя клетки из РБК, тогда как ГБК для подготовки клеток-продуцентов следует применять только при надлежащем обосновании.

Экспрессирующую конструкцию клеток-продуцентов в ГБК необходимо проанализировать однократно (в соответствии с требованиями подраздела 3.2 настоящей главы). Последовательность экспрессирующей конструкции, кодирующей белок, в клетках-продуцентах может быть проверена при помощи анализа нуклеиновых кислот или анализа готового белкового препарата. Ранее установленный предельный для производства клеточный возраст in vitro можно увеличивать, только основываясь на данных, полученных на клетках, культивированных до клеточного возраста in vitro, равного или превышающего новый предельный клеточный возраст in vitro.

 

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
 

Определение характеристик экспрессирующей конструкции и готового очищенного белка - важные этапы обеспечения постоянства производства препарата, изготавливаемого по технологии рекомбинантной ДНК. Оценка аналитических данных, полученных по результатам анализа нуклеиновых кислот и готового очищенного белка, необходима для обеспечения надлежащего качества рекомбинантных белковых препаратов.

 

5. ОПРЕДЕЛЕНИЯ
 

Для целей настоящей главы используются понятия (термины), которые означают следующее:

"значимые генотипические и фенотипические маркеры" - маркеры, позволяющие идентифицировать штамм клеточной линии. Они должны включать экспрессию рекомбинантного белка или наличие экспрессионной конструкции;

"клеточный возраст in vitro" - период с момента оттаивания контейнеров с ГБК до сбора препарата в производственной емкости, измеряемый по продолжительности времени культивирования, степени удвоения популяции клеток или по числу пассажей клеток при субкультивировании с использованием определенной процедуры разведения культуры;

"опытно-промышленное производство" - получение рекомбинантного белка при помощи технологических процессов, полностью повторяющих или имитирующих полномасштабное промышленное производство. Методы культивирования клеток, сбора продукта и его очистки должны быть идентичными, за исключением масштаба производства;

"сайт интеграции" - участок, в котором в геном клетки встраивается одна или несколько копий экспрессирующей конструкции;

"фланкирующие контрольные области" - некодирующие нуклеотидные последовательности, прилегающие к 5'- и 3'-концам последовательности нуклеотидов нуклеиновой кислоты, кодирующей продукт. Фланкирующие контрольные области содержат важные элементы, влияющие на транскрипцию, трансляцию или стабильность кодирующей последовательности. Эти участки включают, например, промотор, энхансер и сплайсинговые последовательности и не содержат ориджины репликации и генов антибиотикорезистентности;

"экспрессирующая конструкция" - экспрессирующий вектор, содержащий последовательность, кодирующую рекомбинантный белок, и элементы, необходимые для ее экспрессии.

 

Глава 5.3
 
ДОКЛИНИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА БЕЗОПАСНОСТИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ
ПРЕПАРАТОВ, ПОЛУЧЕННЫХ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ
МЕТОДОВ (ОСНОВНЫЕ ТРЕБОВАНИЯ)
 
1. ВВЕДЕНИЕ
 
1.1. Цели
 

Государства-члены используют гибкий, основанный на индивидуальном подходе, научно обоснованный принцип доклинической оценки безопасности лекарственных препаратов, полученных с использованием биотехнологических методов, необходимый для подтверждения правильности клинической разработки и возможности регистрации этих лекарственных препаратов.

Основные задачи доклинической оценки безопасности:

определение первоначальной безопасной дозы и схемы последующего увеличения дозы лекарственного препарата при введении человеку;

выявление потенциальных органов-мишеней, в отношении которых проявляется токсическое воздействие препарата, и установление обратимости проявлений токсичности;

определение параметров безопасности лекарственного препарата для их последующего мониторинга в ходе клинического исследования.

Соблюдение требований, изложенных в настоящей главе, необходимо для улучшения качества, согласованности проведения и оценки результатов доклинических исследований безопасности, сопровождающих разработку биологических лекарственных препаратов.

 

1.2. Область применения
 

Положения настоящей главы представляют описание базовой модели доклинической оценки безопасности лекарственных препаратов, полученных с использованием биотехнологических методов. Они применимы в отношении препаратов, полученных из охарактеризованных клеток, с помощью различных экспрессирующих систем, к которым относятся бактериальные и дрожжевые клетки, клетки насекомых, растений и млекопитающих. Предполагаемые показания к применению могут включать in vivo диагностику, лечение и профилактику. Активные фармацевтические субстанции представляют собой белки, пептиды, их производные и препараты, в состав которых они входят. Активные фармацевтические субстанции могут быть выделены из клеточных культур или получены с использованием технологии рекомбинантной ДНК, включая производство с помощью трансгенных растений и животных. К ним относят в том числе: цитокины, активаторы плазминогена, рекомбинантные факторы плазмы крови, факторы роста, гибридные белки (фьюжн белки, химерные белки), ферменты, рецепторы, гормоны и моноклональные антитела.

Требования настоящей главы, также применимы к вакцинам, полученным с использованием технологии рекомбинантной ДНК, химически синтезированным пептидам, препаратам, полученным из плазмы, эндогенным белкам, выделенным из тканей человека, лекарственным препаратам на основе олигонуклеотидов.

Положения настоящей главы не распространяются на антибиотики, экстракты аллергенов, гепарин, витамины, клеточные компоненты крови, традиционные бактериальные или вирусные вакцины, ДНК-вакцины, а также на препараты для клеточной и генной терапии, если в главах, регламентирующих изучение этих групп лекарственных препаратов не указано иное.

 

2. СПЕЦИФИКАЦИЯ НА ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ
 

Риск, связанный с безопасностью применения биотехнологических лекарственных препаратов, может быть обусловлен присутствием в них примесей или контаминантов. Предпочтительнее удалять примеси и контаминанты с помощью процессов очистки, нежели полагаться на доклинические исследования для оценки их безопасности. В любом случае в целях надлежащего планирования доклинических исследований безопасности необходимо всегда всесторонне охарактеризовать свойства лекарственного препарата.

Существуют потенциальные риски, обусловленные наличием контаминантов из клетки-хозяина, которыми могут быть бактерии, дрожжи, клетки насекомых, растений или млекопитающих. Наличие контаминантов из клетки-хозяина может быть причиной развития аллергических или других иммунологических реакций. Теоретически существует опасность возникновения нежелательных реакций, обусловленных присутствием контаминантов в виде нуклеиновых кислот клетки-продуцента, в связи с их возможной интеграцией в геном хозяина. Для лекарственных препаратов, полученных с использованием клеток насекомых, растений и млекопитающих или клеточного материала из трансгенных растений и животных, необходимо учитывать дополнительный риск вирусной контаминации.

Как правило, препарат, изученный в основных фармакологических и токсикологических доклинических исследованиях, должен быть сопоставим с препаратом, предлагаемым для начальных клинических исследований. Однако необходимо учитывать, что во время осуществления программ исследований могут происходить изменения производственного процесса, направленные на совершенствование качества препарата и процесса его производства. При экстраполяции на человека данных, полученных в экспериментальных исследованиях на животных, необходимо рассмотреть возможное влияние изменений, внесенных в технологию производства, на свойства препарата и оценить потенциальную значимость подобных изменений, включая значимость посттрансляционных модификаций белка действующего вещества препарата.

Если в ходе программы разработки вводится новый производственный процесс, модифицируется существующий производственный процесс или происходят другие значимые изменения лекарственного препарата либо его состава, необходимо подтвердить сопоставимость характеристик изучаемого лекарственного препарата, полученного до и после изменения его технологического процесса. Сопоставимость может быть установлена по результатам сравнительной оценки биохимических и биологических свойств (то есть определения подлинности, чистоты, стабильности и активности). В отдельных случаях могут потребоваться дополнительные исследования (то есть исследования фармакокинетических параметров, фармакодинамических свойств и (или) безопасности). Необходимо представить научное обоснование используемого подхода для оценки сопоставимости препаратов. Информация об оценке сопоставимости препаратов при внесении изменений в процесс производства приведена в главах 9.1 - 9.2 настоящих Правил.

 

3. ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ
 
3.1. Общие принципы
 

Целью доклинических исследований безопасности является определение фармакологического и токсического действия препарата, оцениваемого на протяжении всего периода клинической разработки, а не только на этапе предшествующем началу клинических исследований с участием человека. Для такой характеристики могут потребоваться исследования как in vivo, так и in vitro. При этом для биологических лекарственных препаратов, которые структурно и фармакологически сопоставимы с препаратом, уже широко применяемым в клинической практике, исследования токсичности могут быть менее объемными.

При проведении доклинической оценки безопасности лекарственного препарата необходимо в первую очередь учитывать следующее:

выбор соответствующих (релевантных) видов животных, наиболее чувствительных в отношении фармакологического и токсического действия;

возраст экспериментальных животных;

физиологическое состояние животных;

способ введения лекарственного препарата, включая расчет дозы, путь введения и режим дозирования;

стабильность исследуемого материала в условиях исследования.

Токсикологические исследования должны проводиться в соответствии с требованиями правил надлежащей лабораторной практики Союза, утверждаемых Комиссией. Отдельные исследования, требующие использования специфических тест-систем, которые часто необходимы при исследовании биотехнологических лекарственных препаратов, могут частично не соответствовать требованиям правил надлежащей лабораторной практики Союза, утверждаемых Комиссией. В этих случаях необходимо указать области несоответствия и оценить степень их значимости по отношению к общей оценке безопасности. В отдельных случаях отсутствие полного соответствия исследований токсичности требованиям правил надлежащей лабораторной практики Союза, утверждаемых Комиссией, не является строгим препятствием для перехода к проведению клинических исследований и последующей регистрации биотехнологического лекарственного препарата.

Традиционные подходы, используемые для исследования токсичности лекарственных препаратов, могут не в полной мере подходить для биологических лекарственных препаратов. Причиной этого являются уникальность и разнообразие структурных и биологических свойств биотехнологических лекарственных препаратов, в частности видоспецифичность, иммуногенность и непредсказуемые плейотропные эффекты.

 

3.2. Биологическая активность (фармакодинамика)
 

Допускается оценивать биологическую активность с использованием испытаний in vitro в целях определения клинически значимых эффектов лекарственного препарата. Возможно использование клеточных линий и (или) первичных клеточных культур для оценки непосредственного влияния препарата на фенотип клеток и их пролиферацию. Вследствие видоспецифичности многих биотехнологических лекарственных препаратов в целях изучения их токсичности необходимо выбрать релевантный вид животных. Для прогнозирования активности в экспериментах in vivo, а также количественной оценки относительной чувствительности различных видов животных, в том числе человека, к данному биологическому лекарственному препарату могут быть использованы эксперименты in vitro на клеточных линиях, полученных из клеток млекопитающих. Целью подобных исследований может являться определение, например, специфичности и аффинности связывания с рецептором и (или) фармакологических эффектов. Кроме того, на основании результатов этих исследований могут быть выбраны релевантные виды животных, которые будут использованы в дальнейших фармакологических и токсикологических исследованиях in vivo. Объединенные результаты исследований in vitro и in vivo позволяют провести экстраполяцию полученных экспериментальных данных на человека. Для обоснования предлагаемого применения лекарственного препарата в клинических исследованиях часто используют результаты исследований in vivo, оценивающие фармакологическую активность, включая определение механизма действия препарата.

При исследовании лекарственных препаратов моноклональных антител необходимо подробно описать их отличные от предполагаемых иммунологические свойства, в частности антигенную специфичность, способность связывать комплемент, а также непредусморенную реактивность и (или) цитотоксичность по отношению к тканям человека. Такие исследования перекрестной реактивности должны быть проведены с использованием соответствующих иммуногистохимических методик и различных тканей человека.

 

3.3. Выбор видов животных (животной модели)
 

Наличие биологической активности, а также видовая и (или) тканевая специфичность многих лекарственных препаратов, полученных с использованием биотехнологических методов, часто препятствуют проведению стандартных исследований токсичности на широко используемых видах животных (например, крысах и собаках). Программы исследований безопасности должны включать использование релевантных видов животных. Релевантным является такой вид животных, при проведении исследования на котором изучаемый материал является фармакологически активным за счет взаимодействия препарата с рецептором (или эпитопом, если речь идет о моноклональных антителах). Для поиска релевантных видов животных могут быть использованы различные методы (например, иммунохимические или функциональные тесты). Сведения о распределении рецепторов и эпитопов позволяют получить более глубокое представление о потенциальной токсичности препарата в условиях in vivo.

При исследованиях моноклональных антител релевантными видами животных являются те, у которых экспрессируется необходимый эпитоп и для тканей которых можно продемонстрировать аналогичный профиль перекрестной реактивности по сравнению с тканями человека. Это позволяет правильно оценивать токсичность, обусловленную взаимодействием препарата с эпитопом либо неспецифической перекрестной тканевой реактивностью. Использование видов животных, у которых необходимый эпитоп не экспрессируется, может быть полезно для оценки токсичности в случае, если показана сравнимая неспецифическая перекрестная реактивность препарата с тканями человека.

Программа оценки безопасности, как правило, должна включать исследования на 2 релевантных видах животных. В отдельных обоснованных случаях достаточно использования 1 релевантного вида животных (например, если был найден только 1 релевантный вид или биологическая активность биотехнологического лекарственного препарата хорошо изучена). Кроме того, даже в случаях, когда для характеристики токсичности в краткосрочных исследованиях необходимо использовать 2 вида животных, в последующих долгосрочных исследованиях токсичности может быть достаточным использование только 1 вида животных (например, если в краткосрочных исследованиях профиль токсичности у 2 видов животных сопоставим).

Результаты исследований токсичности, проведенных на нерелевантных видах животных, могут вводить в заблуждение, поэтому их проведение не рекомендуется. Если релевантных видов животных не существует, можно использовать соответствующие виды трансгенных животных, у которых экспрессируются рецепторы, сходные по структуре с рецепторами человека (гуманизированные белки-рецепторы), или использовать гомологичные белки. Если взаимодействие между препаратом и рецептором человека оказывает сходные физиологические эффекты, сравнимые с теми, что ожидаются у человека, информация, полученная в ходе исследований на модели трансгенных животных, у которых экспрессируется рецептор человека, является наиболее адекватной. Полезная информация может быть получена и с использованием гомологичных белков. При этом следует учитывать, что производственный процесс, профиль примесей (контаминантов), фармакокинетика и точные фармакологические механизмы действия для гомологичной формы и исследуемого лекарственного препарата, предназначенного для клинического использования, могут различаться. Если использование трансгенных моделей и гомологичных белков невозможно, целесообразно оценить некоторые аспекты потенциальной токсичности в рамках ограниченных исследований токсичности на одном виде животных. Например, могут быть проведены исследования токсичности при многократном введении продолжительностью

noname.png суток, которые включают оценку показателей функционирования наиболее важных систем организма (например, сердечно-сосудистой и дыхательной систем).

Следует учитывать прогресс, достигнутый в разработке животных моделей заболеваний, которые считаются сходными с заболеваниями человека. К ним относят животные модели в результате спонтанного или индуцированного развития заболеваний, нокаут гена (генов), а также трансгенные животные. Использование таких моделей может обеспечить проведение дальнейших исследований, которые ограничиваются не только изучением фармакологического действия препарата, его фармакокинетики и установлением диапазона доз. Модели могут быть использованы также и для исследования безопасности (например, для оценки перспективы нежелательного стимулирования прогрессирования заболевания). В некоторых случаях исследования, проведенные на животных моделях заболевания, могут использоваться в качестве подходящей альтернативы исследованиям токсичности на обычных животных (как это указано в пояснении 1 к настоящей главе). При этом необходимо представить научное обоснование использования животных моделей заболевания для исследования безопасности.

 

3.4. Число и пол животных
 

Число животных, используемых в расчете на одну дозу препарата, должно быть достаточным для оценки токсического действия препарата. Небольшой размер выборки животных может привести к тому, что признаки токсичности не будут обнаружены вследствие небольшой частоты их проявления, независимо от их тяжести. Ограничения, которые обусловлены недостатком выборки и часто наблюдаются в исследованиях на нечеловекообразных приматах (НЧП), могут быть частично компенсированы повышением частоты и продолжительности мониторинга за состоянием животных. Как правило, в экспериментах необходимо использовать животных обоих полов либо должно быть представлено обоснование в случае отсутствия таких данных.

 

3.5. Способ введения и выбор дозы
 

Способ и частота введений лекарственного препарата экспериментальным животным должны быть максимально приближены к условиям предполагаемым для клинического применения. Следует учитывать фармакокинетические характеристики исследуемого лекарственного препарата и его биодоступность у используемых видов животных. Кроме того, необходимо учитывать объем препарата, который можно вводить экспериментальным животным в соответствии с принципами безопасности и гуманности. Например, частота введения препарата лабораторным животным может быть увеличена по сравнению с предлагаемым режимом введения препарата субъектам клинических исследований. Причиной такого увеличения может быть необходимость компенсировать более высокий клиренс или низкую растворимость действующего вещества исследуемого препарата. В данном случае необходимо определить соотношение величины экспозиции препарата в крови подопытного животного и экспозиции препарата у человека в клинических условиях. Также следует учитывать зависимость эффекта от объема вводимого препарата, концентрации действующего вещества, состава и места введения. В некоторых случаях допускается изменение способа введения по сравнению с тем, который предполагается использовать в клинических исследованиях. Причинами такого изменения могут быть низкая биодоступность и ограничения, обусловленные способом введения или размером (физиологическими особенностями) используемых видов животных.

В целях получения сведений о зависимости "доза - эффект", включая токсическую дозу и высшую нетоксическую дозу (ВНТД, no observed adverse effect level (NOAEL)), необходимо выбрать исследуемые дозы. Установить максимальную дозу некоторых классов лекарственных препаратов с низкой или ничтожной токсичностью невозможно. В таких случаях необходимо представить научное обоснование стратегии выбора доз и предполагаемой кратности превышения экспозиции у человека. В целях обоснования выбора высоких доз необходимо проанализировать ожидаемые фармакологические (физиологические) эффекты, доступность подходящего исследуемого материала и предполагаемое клиническое применение. Если лекарственный препарат обладает низкой аффинностью или активностью в отношении клеток выбранного вида животных по сравнению с клетками человека, может потребоваться исследование более высоких доз. Границы безопасности диапазона доз у человека, подлежащие определению, могут варьироваться в зависимости от класса лекарственных препаратов, полученных биотехнологическим путем, и показаний к применению.

 

3.6. Иммуногенность
 

Многие лекарственные препараты для медицинского применения, полученные с использованием биотехнологических методов, являются иммуногенными у животных. Следовательно, определение концентрации антител, обусловленных введением препарата, необходимо осуществлять при проведении исследований токсичности при многократном введении (в соответствии с требованиями главы 5.4 настоящих Правил). Такие исследования необходимы для правильной интерпретации результатов токсикологических исследований. Необходимо охарактеризовать гуморальный иммунный ответ на введение исследуемого лекарственного препарата (например, титр антител, количество животных, у которых зарегистрирована выработка антител, свойства индуцированных антител (нейтрализующая активность или отсутствие такой активности)). Следует установить корреляцию между выработкой антител и любыми изменениями фармакологических и (или) токсических свойств исследуемого препарата на момент обнаружения антител. В частности, при интерпретации результатов исследования необходимо учитывать влияние образования антител на фармакокинетические (фармакодинамические) параметры препарата, частоту развития и (или) тяжесть проявления нежелательных явлений, активацию комплемента, появление новых токсических эффектов. Необходимо также оценить возможность появления патологических изменений, обусловленных образованием и отложением иммунных комплексов в тканях.

Выявление антител не должно служить единственным основанием для досрочного прекращения доклинических исследований безопасности или изменения их продолжительности, за исключением случаев, когда развитие иммунного ответа является причиной нейтрализации фармакологического и (или) токсического эффектов, оказываемых биологическим лекарственным препаратом, у значительной части животных. В большинстве случаев иммунный ответ на биотехнологический лекарственный препарат у животных (как и у человека) бывает вариабельным. Если все эти вопросы не влияют на интерпретацию данных, полученных в ходе исследования безопасности, то можно не придавать серьезного значения развитию гуморальной реакции иммунитета у экспериментальных животных.

Индукция образования антител у животных не позволяет прогнозировать развитие иммунного ответа при клиническом применении препарата. У человека могут формироваться циркулирующие антитела к гуманизированным белкам, причем терапевтический эффект в присутствии таких антител часто сохраняется. У человека частота развития тяжелой анафилактической реакции в ответ на введение рекомбинантных белков невелика. В связи с этим результаты тестов на анафилактические реакции у морских свинок, которые, как правило, положительны для белковых препаратов, обычно не позволяют спрогнозировать реакцию у человека. В связи с этим, такие исследования считаются малоинформативными для стандартного изучения данного типа препаратов.

 

4. ЧАСТНЫЕ ТРЕБОВАНИЯ
 
4.1. Фармакологическая безопасность
 

Необходимо исследовать потенциальный риск развития нежелательных реакций, обусловленных нежелательной фармакологической активностью препарата, на соответствующих моделях животных. При необходимости следует включить контроль такой активности в программу исследований токсичности и (или) клинических исследований. В ходе исследований фармакологической безопасности обычно определяют функциональные индексы потенциальной токсичности препарата. Указанные функциональные индексы могут быть изучены в рамках отдельных исследований или включены в токсикологические исследования. Целью исследований фармакологической безопасности должно быть выявление влияния лекарственного препарата на жизненные функции основных физиологических систем организма (в том числе на сердечно-сосудистую, респираторную, выделительную, центральную нервную системы). Кроме того, вместо животных в ходе исследований могут быть использованы изолированные органы или другие тест-системы без привлечения интактных животных. Подобные исследования позволяют объяснить возникновение органоспецифической токсичности, однако следует с осторожностью подходить к интерпретации этих результатов, учитывая показания и особенности применения препарата у человека.

 

4.2. Оценка экспозиции
 

4.2.1. Фармакокинетика и токсикокинетика.

Единой схемы проведения фармакокинетических исследований биотехнологических лекарственных препаратов не имеется. Информативными являются фармакокинетические исследования при однократном и многократном введении лекарственного препарата, токсикокинетические исследования, исследования распределения в тканях на релевантных видах животных. В то же время стандартные исследования, направленные на оценку материального баланса введенного и элиминированного препарата, являются малоинформативными. Различия в фармакокинетических параметрах исследуемого препарата у разных видов животных могут иметь существенное значение для прогнозирования результатов при исследовании на животных и оценки кривой зависимости "доза - эффект" при исследовании токсичности. Изменения фармакокинетического профиля вследствие иммуноопосредованных механизмов элиминации могут повлиять на кинетические профили и интерпретацию результатов исследований токсичности. Для некоторых лекарственных препаратов (например, для цитокинов) может быть характерна значительная задержка в проявлении фармакодинамических эффектов относительно фармакокинетических характеристик. Кроме того, возможно пролонгирование фармакодинамических эффектов по сравнению с содержанием действующего вещества в плазме.

Фармакокинетические исследования следует по мере возможности проводить с использованием лекарственных препаратов, являющихся репрезентативными по отношению к препаратам, предназначенным для токсикологических исследований и клинического применения. Способ и частота их дозирования должны быть максимально приближены к тем, которые соответствуют планируемым клиническим исследованиям. Профиль абсорбции может зависеть от состава, концентрации, области введения и (или) объема вводимого препарата. По возможности во время проведения исследований токсичности необходимо осуществлять мониторинг системной экспозиции.

При использовании белков с радиоактивной меткой важно доказать, что материал с радиометкой, используемый для исследования, сохраняет активность и биологические свойства, эквивалентные таковым у немеченного вещества. Величину радиоактивности в тканях и (или) данные ауторадиографии при использовании белков с радиоактивной меткой бывает сложно интерпретировать ввиду быстрого метаболизма белка in vivo или нестабильности связи радиоактивной метки с белком. Результаты исследований, в которых радиоактивная метка вводится в специфичные аминокислоты, необходимо интерпретировать с осторожностью. Следует учитывать возможность высвобождения радиоактивной метки, встроенной в специфические аминокислоты, и ее включение в аминокислоты, которые участвуют в синтезе белков и пептидов, не имеющих отношения к исследуемому лекарственному препарату.

Необходимо располагать начальной информацией об особенностях абсорбции, распределения и клиренса исследуемого лекарственного препарата у релевантных видов животных до начала клинического исследования с целью прогнозирования широты терапевтического действия препарата (безопасного диапазона доз) с учетом экспозиции и дозы.

 

4.2.2. Аналитические методы.

Использование одного или нескольких методов количественного определения следует рассматривать в индивидуальном порядке, при этом необходимо представить научное обоснование. Как правило, достаточно одной валидированной методики. Например, достоверную информацию можно получить методом количественного определения радиоактивности в преципитате (белок с радиоактивной меткой, осажденный трихлоруксусной кислотой). В то же время более предпочтительным является специфичный метод количественного определения анализируемого вещества. Оптимально использовать одни и те же методы количественного определения как в исследованиях на животных, так и в исследованиях с участием человека. Необходимо определить потенциальное влияние связывающих белков плазмы и (или) антител в плазме (сыворотке) крови на результаты количественного определения исследуемого вещества.

 

4.2.3. Метаболизм.

Следствием метаболизма биотехнологических лекарственных препаратов является их деградация до небольших пептидов и отдельных аминокислот. Пути метаболизма таких препаратов в целом изучены. Следовательно, нет необходимости в проведении классических исследований биотрансформации, проводимых в отношении лекарственных препаратов, действующие вещества которых получены путем химического синтеза.

Для понимания природы фармакодинамического эффекта необходимы сведения о поведении биологических лекарственных препаратов в биологических жидкостях (например, в плазме, сыворотке, цереброспинальной жидкости), а также о возможном влиянии связывания с белками.

 

4.3. Исследования токсичности при однократном введении

 

По результатам исследований токсичности при однократном введении можно получить полезную информацию для описания зависимости системной и (или) местной токсичности от дозы. Эти данные могут быть использованы для выбора доз при исследовании токсичности при многократном введении. Информация о зависимости "доза - эффект" может быть получена при проведении исследований токсичности при однократном введении, которые являются частью программы исследований фармакологической активности или эффективности с использованием животных моделей. Следует рассмотреть возможность включения в данную программу фармакологических исследований оценку показателей безопасности лекарственного препарата.

 

4.4. Исследования токсичности при многократном введении

 

В подразделе 3.3 настоящей главы приведены принципы выбора видов животных для проведения исследований с многократным введением. Способ введения и режим дозирования (например, ежедневное введение или периодическое дозирование) должны быть максимально приближены к предлагаемому клиническому применению или воздействию. По возможности данные исследования должны включать изучение токсикокинетики.

Как правило, дизайн исследования должен предусматривать период последующего наблюдения после прекращения введения препарата. Это необходимо для того, чтобы выявить обратимость эффекта, потенциальное усиление фармакологических и (или) токсических эффектов или потенциально отсроченные токсические эффекты. Для биотехнологических лекарственных препаратов, которые оказывают длительные фармакологические и (или) токсические эффекты, группы животных в период восстановления должны находиться под наблюдением до тех пор, пока не будет продемонстрирована обратимость эффектов. Продолжительность исследований токсичности при многократном введении должна зависеть от предполагаемой длительности клинического применения и показаний к применению. Для большинства биотехнологических лекарственных препаратов длительность введения животным, как правило, составляет 1 - 3 месяца. Для препаратов, предназначенных для кратковременного применения (например, не более 7 дней), а также для лечения острых, угрожающих жизни заболеваний, достаточным считается проведение исследований токсичности при многократном введении в течение 2 недель. Как правило, этого времени достаточно для обоснования возможности проведения клинических исследований и регистрации лекарственного препарата. Для биотехнологических лекарственных препаратов, которые предназначены для лечения хронических заболеваний и применяются длительно, достаточными являются исследования продолжительностью 6 месяцев. Однако в некоторых случаях возможно проведение более коротких или более длительных исследований для включения их результатов в регистрационное досье. Продолжительность долгосрочных исследований токсичности биологических лекарственных препаратов, предназначенных для длительного применения, должна быть научно обоснована.

 

4.5. Исследования иммунотоксичности
 

Одним из аспектов оценки иммунотоксичности является оценка потенциальной иммуногенности (в соответствии с подразделом 3.6 настоящей главы). Многие биотехнологические лекарственные препараты предназначены для стимуляции или подавления иммунной системы. Следовательно, они могут оказывать влияние не только на гуморальный, но и на клеточный иммунитет. Воспалительные реакции в месте инъекции могут свидетельствовать о стимуляции иммунной системы организма в ответ на введение препарата. Однако необходимо учитывать, что обычная травма во время инъекции и (или) токсические эффекты, обусловленные веществами, входящими в состав лекарственного препарата, могут привести к токсическим изменениям в области инъекции. Кроме того, возможно изменение экспрессии антигенов на мембране клеток-мишеней, что может иметь значение для развития аутоиммунного ответа. Для уточнения подобных вопросов в схемы изучения иммунотоксических свойств препарата может быть включено проведение скрининговых исследований с последующей оценкой механизма действия лекарственного препарата. Однако применение стандартного пошагового подхода или проведение стандартного набора тестов в отношении биотехнологических лекарственных препаратов не рекомендовано.

 

4.6. Исследование репродуктивной и онтогенетической
токсичности
 

Необходимость проведения исследований репродуктивной и онтогенетической токсичности зависит от свойств лекарственного препарата, показаний к применению и целевой популяции пациентов (как это указано в пояснении 2 к настоящей главе). Дизайн исследования и режим дозирования могут быть изменены в зависимости от факторов, обусловленных видоспецифичностью, иммуногенностью, биологической активностью и (или) длительным периодом полувыведения конкретного лекарственного препарата. Например, подозрения на наличие потенциальной онтогенетической иммунотоксичности, которые могут иметь место в отношении определенных моноклональных антител с длительным иммунологическим эффектом, могут быть учтены путем изменения дизайна исследования, для того, чтобы оценить иммунологический статус новорожденного.

 

4.7. Исследования генотоксичности
 

Диапазон и виды исследований генотоксичности, стандартно проводимые в отношении лекарственных препаратов, действующие вещества которых получены путем химического синтеза, не применимы в отношении биотехнологических лекарственных препаратов, поэтому проведение таких исследований не требуется. Кроме того, введение большого количества веществ пептидной (белковой) природы может привести к получению результатов, не поддающихся интерпретации. Эти вещества, вероятно, не взаимодействуют напрямую с ДНК или другим хромосомным материалом (как это указано в пояснении 3 к настоящей главе).

Если имеются основания предполагать наличие таких взаимодействий (например, ввиду присутствия органической молекулы-линкера в препарате на основе конъюгированного белка), необходимо проведение исследований с использованием доступных и подходящих систем, а также с включением новых тест-систем. Использование стандартных исследований генотоксичности для оценки генотоксического потенциала производственных примесей неприемлемо. При проведении таких исследований с этой целью требуется соответствующее обоснование.

 
4.8. Исследования канцерогенности
 

Как правило, для биотехнологических лекарственных препаратов стандартные тесты на канцерогенность с использованием биологических систем неприемлемы. В то же время может быть необходима оценка канцерогенности с использованием методов, специфичных для определенного препарата. Это зависит от предполагаемой продолжительности клинического применения препарата, популяции пациентов и (или) его биологической активности (например, факторы роста, иммунодепрессанты и др.). В случае, если существуют опасения относительно канцерогенного потенциала препарата, могут быть использованы разные подходы для оценки такого риска.

Некоторые препараты могут обладать потенциальной способностью вызывать пролиферацию трансформированных клеток и клональную экспансию (экспансию клона), что может привести к развитию новообразований. В этом случае необходимо провести оценку препарата с учетом экспрессии рецепторов на различных злокачественных и нормальных клетках человека, которые потенциально значимы в отношении исследуемой популяции пациентов. Необходимо определить способность препарата стимулировать рост нормальных или злокачественных клеток, экспрессирующих соответствующие рецепторы. Если в результате исследований in vitro получены данные, свидетельствующие о возможном канцерогенном потенциале препарата, необходимо провести дальнейшие исследования на подходящих животных моделях. Ценная информация может быть получена при включении в долгосрочные исследования токсичности с многократным введением оценки чувствительных показателей пролиферации клеток у экспериментальных животных.

Если препарат биологически активен и не вызывает развитие иммунного ответа у грызунов, однако информации, полученной на основании результатов других исследований, недостаточно для оценки канцерогенного потенциала препарата, использование одного вида грызунов является оправданным. Особенно внимательно необходимо подойти к выбору дозы. Научно обоснованный подход к определению подходящих доз должен быть основан на комплексном анализе фармакокинетических и фармакодинамических конечных точек с учетом сравнительных характеристик рецепторов и предполагаемой экспозиции у человека. Выбранная дозировка должна быть обоснована.

 

4.9. Исследования местной переносимости
 

Необходимо провести оценку местной переносимости. При этом необходимо использовать лекарственный препарат, имеющий состав, который в дальнейшем будет представлен к регистрации. Однако при достаточном обосновании допускается использование препарата, имеющего репрезентативный состав. В отдельных случаях потенциальные нежелательные реакции лекарственного препарата могут быть оценены в рамках исследований токсичности при однократном или многократном введении. Таким образом, исключается необходимость проведения отдельных исследований по оценке местной переносимости.

 

ПОЯСНЕНИЯ

 

1. Использование животных моделей заболеваний может быть целесообразным при определении показателей токсичности, выборе клинических показаний и определении подходящей лекарственной формы, пути введения и режима дозирования. Следует учесть, что при использовании таких моделей заболевания часто имеется слишком мало ретроспективных данных для использования в качестве контроля при оценке результатов исследований. Следовательно, для оптимизации дизайна исследований критически важно параллельное получение контрольных и исходных данных.

2. Возможна ситуация, когда в опубликованных данных научной литературы имеется значительный объем информации, касающейся потенциального воздействия на репродуктивную функцию и (или) эмбриогенез определенных групп биотехнологических препаратов (например, интерферонов), которая была получена и может быть подтверждена только в исследованиях на единственном релевантном виде животных - нечеловекообразных приматах. В таких случаях исключается необходимость проведения формальных исследований репродуктивной (онтогенетической) токсичности, если установлено, что структура и физико-химическая характеристика действующего вещества сопоставимы, поскольку родственные молекулы будут вызывать сходные биологические эффекты. В каждом конкретном случае должно быть приведено научное обоснование оценки потенциального влияния препарата на репродуктивную функцию и развитие потомства.

3. В отношении некоторых биотехнологических лекарственных препаратов существуют опасения в отношении аккумуляции спонтанно мутировавших клеток (например, за счет избирательного усиления пролиферации), что может способствовать канцерогенному эффекту таких лекарственных препаратов. Стандартный набор исследований генотоксичности не подходит для выявления подобных ситуаций. Для изучения данного аспекта производителю следует разработать и проанализировать альтернативные модели in vitro или in vivo.

 

Глава 5.4
 
ДОКЛИНИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА БЕЗОПАСНОСТИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ
ПРЕПАРАТОВ, ПОЛУЧЕННЫХ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ
МЕТОДОВ (ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ ТРЕБОВАНИЯ)
 
1. ВВЕДЕНИЕ
 
1.1. Цели дополнительных требований
 

Цель настоящих требований дополнить и разъяснить отдельные положения главы 5.3 настоящих Правил:

выбор видов животных;

дизайн исследования;

иммуногенность;

изучение репродуктивной и онтогенентической токсичности;

оценку канцерогенного потенциала.

Настоящие Правила должны способствовать своевременному проведению клинических исследований, сокращению использования животных при доклинических исследованиях в соответствии с принципом "трех R" (сократить/оптимизировать/заменить "reduce/refine/replace") и сокращению использования других ресурсов при разработке лекарственных препаратов. Необходимо рассмотреть возможность использования соответствующих альтернативных методов оценки безопасности in vitro, хотя данный вопрос не затрагивается в настоящих Правилах. Эти методы следует применять всем уполномоченным органам государств-членов в сфере обращения лекарственных средств, что позволит заменить для данной группы лекарственных препаратов стандартные методы изучения.

Настоящая глава Правил позволяет обеспечить безопасную, этичную разработку и доступность новых биотехнологических лекарственных препаратов.

 
1.2. Справочная информация
 

Требования, представленные в настоящей главе, обеспечивают гармонизацию доклинических исследований безопасности биотехнологических лекарственных препаратов, проводимых на различных этапах их клинической разработки в разных государствах-членах.

 
1.3. Область применения
 

Настоящая глава не вносит изменений в область применения главы 5.3 настоящих Правил. Для лекарственных препаратов, полученных с использованием биотехнологических методов, которые предназначены для использования в онкологии, следует использовать указания, изложенные в соответствующих научных руководствах и актах, входящих в право Союза.

 

2. ВЫБОР ВИДОВ ЖИВОТНЫХ
 
2.1. Общие принципы
 

При оценке релевантности вида животных, выбранных для проведения исследований, следует приять во внимание несколько факторов. На первом этапе следует провести сравнение последовательностей молекул-мишеней с целью выявления гомологии между видами животных. На следующем этапе должна проводиться в тестах in vitro качественная и количественная межвидовая сравнительная оценка аффинности связывания действующего белкового вещества препарата с мишенью, распределения (занятости) рецепторов (лигандов) и кинетических характеристик такого связывания.

Также следует выполнить оценку функциональной активности. Функциональная активность может быть продемонстрирована в исследованиях с использованием видоспецифичных клеточных систем и (или) в рамках фармакологических и токсикологических исследований in vivo. Доказательством функциональной активности, которое можно использовать для обоснования выбора данного вида животных, может быть модуляция биологической реакции или показателей фармакодинамического маркера.

При изучении различий между видами по связыванию лекарственного препарата с мишенью и его функциональной активности в контексте предполагаемого режима дозирования необходимо представить обоснование, что выбранная модель способна выявлять потенциально нежелательные последствия, связанные с модуляцией антигена-мишени. В некоторых случаях у обычно используемых в доклинических исследованиях видов здоровых животных, уровень экспрессии антигенов-мишеней (например, провоспалительные цитокины или опухолевые антигены) чрезвычайно низкий и для обоснования выбора вида животных достаточно определить аффинность связывания и активность лекарственного препарата на клеточных системах.

При выборе вида животных оценка перекрестной тканевой реактивности на тканях животных имеет ограниченное значение (как это указано в пояснении 1). В отдельных случаях (если описанные выше подходы не могут быть использованы для поиска видов животных, релевантных по фармакологическим параметрам) при выборе видов животных для токсикологических исследований могут быть использованы результаты исследований перекрестной тканевой реактивности (ПТР или TCR). При этом необходимо провести сравнение профилей связывания с тканями у человека и животных, с которыми предполагается связывание мишени.

Как указано в главе 5.4 настоящих Правил, при отсутствии релевантных видов животных по той причине, что биологический лекарственный препарат не взаимодействует с мишенями-ортологами ни у одного из исследуемых видов животных, допускается возможность использования гомологичных молекул или трансгенных моделей.

Для моноклональных антител и других препаратов на основе антител, направленных против чужеродных мишеней (бактериальные, вирусные антигены и др.), может быть рассмотрена возможность проведения краткосрочного исследования безопасности (в соответствии с положениями главы 5.3 настоящих Правил) с использованием одного вида животных (выбор такого вида животных должен быть обоснован). При этом нет необходимости в проведении дополнительных исследований токсичности, в том числе репродуктивной токсичности. В качестве альтернативного варианта можно включить оценку безопасности, если используется животная модель заболевания для проверки и подтверждения механизма действия лекарственного препарата. В этом случае целью оценки безопасности будет получение информации об опосредованных мишенью потенциальных угрозах безопасности. Если это сделать невозможно, следует разработать подходящие стратегии для снижения риска при проведении клинических исследований.

Выбор вида животных при исследованиях конъюгатов антител с лекарственными препаратами или токсинами (ADC), в которых используется новый токсин (токсикант), проводится в соответствии с теми же основными принципами, которые применяются и для неконъюгированных антител (как это указано в пояснении 2).

 
2.2. Выбор 1 или 2 видов животных
 

Если 2 вида животных являются фармакологически релевантными (один из отряда грызунов и другой, не относящийся к грызунам), в краткосрочных исследованиях общей токсичности (продолжительностью до 1 месяца) следует использовать оба вида животных. Если результаты обоих токсикологических исследований сходны или могут быть объяснены известным механизмом действия препарата, долгосрочные исследования общей токсичности достаточно провести только на одном виде животных. При этом следует использовать грызунов, если только для альтернативного подхода нет научного обоснования. Исследования на двух видах, не относящихся к грызунам, считаются неприемлемыми.

Использование одного вида животных для всех исследований общей токсичности обосновано только в том случае, если исследуемый лекарственный препарат, который предполагается использовать в клинической практике, фармакологически активен только у этого вида. При этом исследования на другом виде животных с использованием гомологичного продукта не могут представить дополнительные данные по оценке риска и поэтому их не следует проводить.

 
2.3. Использование гомологичных белков
 

Использование гомологичных белков является одним из альтернативных подходов, описанных в подразделе 3.3 главы 5.3 настоящих Правил. Исследования, в которых используются гомологичные белки, проводятся для выявления опасностей и оценки потенциала развития нежелательных реакций, обусловленных усиленным фармакологическим действием препарата. В то же время такие исследования, как правило, не информативны для количественной оценки риска. Именно поэтому для выявления риска следует проводить исследования безопасности с одной контрольной группой и одной группой, получающей препарат. При этом необходимо представить научное обоснование дизайна исследования и выбранной дозы (например, максимальная фармакологическая доза).

 
3. ДИЗАЙН ИССЛЕДОВАНИЯ
 
3.1. Выбор дозы и применение принципов фармакокинетики
и фармакодинамики
 

Токсичность большинства биологических лекарственных препаратов связана с направленным механизмом их действия. В связи с этим относительно высокие дозы могут вызвать нежелательные реакции, которые являются следствием чрезмерного фармакологического действия препарата.

При выборе доз необходимо представить научное обоснование с учетом характеристик зависимости "доза - эффект". Выбору высоких доз способствует использование принципов, применяемых при анализе данных фармакокинетики и фармакодинамики (например, выявление простой зависимости "экспозиция - эффект" или более сложные подходы, основанные на моделировании и симуляции). При этом возможны следующие варианты выявления доз:

доза, которая обеспечивает максимальный ожидаемый фармакологический эффект у выбранного вида животных, используемых в доклинических исследованиях;

доза, которая в 10 раз превышает максимальную дозу, предполагаемую для исследования в клинических условиях.

Для группы с высокой дозой в доклинических токсикологических исследованиях необходимо выбрать наибольшую из этих 2 доз. В противном случае необходимо представить обоснование использования более низкой дозы (например, максимально допустимой дозы).

Если нет доступных in vivo (ex vivo) фармакодинамических конечных точек, выбор высокой дозы может быть основан на данных фармакокинетики, доступных данных по связыванию лекарственного препарата с рецептором в исследованиях in vitro и (или) фармакологических данных. При выборе верхней границы экспозиции в клинических условиях необходимо провести коррекцию с учетом степени связывания лекарственного препарата с мишенью и фармакологической активностью in vitro между человеком и видами животных, которые используются в доклинических исследованиях. В частности, значительное относительное различие в аффинности и (или) активности в условиях in vitro может свидетельствовать о целесообразности изучения высоких доз в рамках доклинических исследований. Если при использовании данного подхода не удается обнаружить токсичность выбранных доз, то маловероятно, что дополнительные токсикологические исследования более высоких доз, кратных дозам, применяемым у человека, приведут к получению необходимой значимой информации.

 

3.2. Продолжительность исследований
 

Для препаратов, которые предполагается использовать в течение длительного времени, считается достаточным проведение исследований токсичности при многократном введении на грызунах или негрызунах продолжительностью 6 месяцев. В таких исследованиях должны быть использованы высокие дозы, выбранные в соответствии с принципами, изложенными выше (в соответствии с требованиями подраздела 3.1 настоящей главы). Как правило, исследования с большей продолжительностью не позволдяют получить дополнительной информаций, которая повлияла бы на клиническую разработку.

Принципы определения продолжительности токсикологических исследований для биотехнологических лекарственных препаратов, разрабатываемых для длительного применения пациентами с распространенным раком, должны соответствовать актам, входящим в право Союза и научным реководствам в области онкологии.

 
3.3. Восстановление
 

Необходимо оценить восстановление животных после фармакологических и токсикологических эффектов, имеющих потенциальное значение для развития нежелательных реакций у человека и возникающих в клинически значимых дозах. Необходимая информация может быть получена при установлении обратимости (необратимости) конкретного наблюдаемого эффекта или путем включения периода без дозирования как минимум в одно исследование и как минимум в одной дозе, что должно быть обосновано спонсором. Цель периода без введения исследуемого препарата заключается в установлении обратимости обнаруженных эффектов, а не в оценке проявлений отсроченной (поздней) токсичности. Демонстрация полного восстановления не требуется. Включение периода восстановления только с целью оценки иммуногенного потенциала исследуемого препарата не требуется.

 
3.4. Поисковые клинические исследования
 

К доклиническим исследованиям безопасности биологических лекарственных препаратов в целях проведения клинических исследований и регистрации могут быть применимы гибкие подходы, описанные актах, входящих право Союза и научных руководствах. Разработчикам лекарственного препарата следует обсудить и согласовать эти подходы с уполномоченными органами государств-членов.

 
4. ИММУНОГЕННОСТЬ
 

Оценка иммуногенности проводится для того, чтобы обеспечить правильную интерпретацию результатов исследований и разработку дизайна дальнейших исследований. Такой анализ в ходе доклинических исследований на животных неинформативен в плане прогнозирования потенциальной иммуногенности человеческих или гуманизированных белков у человека.

Определение концентрации антител, вырабатываемых в ответ на биотехнологический лекарственный препарат (ADA) в рамках доклинических исследований, должно проводиться в следующих случаях:

при наличии доказательства изменения фармакодинамической активности;

при получении данных о неожиданном изменении экспозиции в отсутствие фармакодинамических маркеров;

при выявлении иммуноопосредованных реакций в ответ на введение препарата (болезнь иммунных комплексов, васкулиты, анафилактические реакции и т.д.).

Поскольку до завершения исследования трудно определить, будет ли необходимо проведение такого анализа, во многих случаях целесообразно получить соответствующие образцы в ходе исследования. В дальнейшем эти образцы могут быть проанализированы и в случае необходимости использованы для интерпретации результатов исследования. Если в ходе исследования обнаружены антитела к лекарственному препарату, потребуется оценка их влияния на интерпретацию результатов исследования (дополнительные требования к оценке влияния иммуногенности приведены в подразделе 3.6 главы 5.3 настоящих Правил).

При выявлении антител и одновременном отсутствии фармакодинамических маркеров, позволяющих продемонстрировать устойчивую активность таких антител в условиях токсикологических исследований in vivo, необходима оценка нейтрализующей активности антител. Нейтрализующую активность антител можно оценить косвенно с помощью биологических методов ex vivo, путем соответствующей комбинации различных видов анализа показателей фармакокинетики (фармакодинамики) или непосредственно путем использования специальных методов, определяющих нейтрализующую способность антител.

 
5. РЕПРОДУКТИВНАЯ И ОНТОГЕНЕТИЧЕСКАЯ ТОКСИЧНОСТЬ
 
5.1. Требования общего характера
 

Исследования репродуктивной токсичности препарата следует проводить в соответствии с актами, входящими в право Союза и научными руководствами. Исходя из знаний о видоспецифичности, природе исследуемого лекарственного препарата и механизме его действия, иммуногенности и (или) фармакокинетических свойствах, а также об экспозиции в период эмбриофетального развития, отдельный дизайн исследования и режим дозирования могут варьироваться.

В целом предпочтительной является оценка репродуктивной токсичности на релевантных видах животных с использованием лекарственного препарата, который предполагается применять в клинических исследованиях. Оценка репродуктивной токсичности должна проводиться на видах животных, которые подходят по фармакологическим параметрам. Если препарат, который предполагается использовать в клинике, проявляет свою фармакологическую активность у грызунов и кроликов, то оба вида этих животных должны использоваться в исследованиях эмбриофетальной токсичности (ЭФТ (EFD)). Исключением являются случаи, когда для одного вида животных установлена эмбриофетальная летальность или тератогенное действие.

Исследования онтогенетической токсичности на нечеловекообразных приматах (НЧП) допускается проводить только в случае, если они являются единственным релевантным видом животных.

Если исследуемый препарат является фармакологически активным только у НЧП, решение принимается в пользу проведения исследований препарата на данном виде животных. Однако вместо приматов изучение препарата-кандидата для клинических исследований может быть проведено с использованием альтернативных видов животных, если представлено соответствующее научное обоснование для выбора альтернативной модели.

Если релевантные виды животных, на которых могут быть проведены клинические исследования препарата-кандидата, отсутствуют, возможны следующие решения:

допускается использование трансгенных мышей, которые экспрессируют мишень человека, или использование гомологичных белков соответствующих видов животных, экспрессирующих ортолог человеческого белка-мишени. Для этого необходимо, чтобы относительно используемой модели было получено достаточно информации (например, данные предшествующих исследований) (как это указано в пояснении 1 к главе 5.3 настоящих Правил). Для лекарственных препаратов, которые направлены против чужеродных мишеней (например, бактериальных или вирусных), как правило, нет необходимости проводить исследования репродуктивной токсичности (в соответствии с требованиями подраздел 2.1 настоящей главы).

Если существуют весомые доказательства того, что препарат оказывает нежелательное влияние на фертильность или течение беременности (например, механизм действия, фенотипические данные, полученные на генетически модифицированных животных, сведения об эффектах препаратов, относящихся к данной группе), они могут представить достаточную информацию о существовании риска для репродуктивной системы. В этом случае при соответствующих условиях проведение дополнительных доклинических исследований безопасности может не потребоваться.

 
5.2. Фертильность
 

Оценка фертильности при исследовании препаратов, для которых мыши и крысы являются фармакологически релевантными видами, может проводиться на одном виде грызунов (в соответствии с требованиями актов, входящих в право Союза, и научными руководствами по проведению исследований репродуктивной токсичности). Дизайн исследований может быть адаптирован для других видов животных, если они являются фармакологически релевантными. Кроме того, дизайн исследования должен быть соответствующим образом дополнен для того, чтобы, например, в результате исследования была охарактеризована природа лекарственного препарата и проведена оценка его иммуногенного потенциала.

При работе с НЧП проведение исследований со спариванием является нецелесообразным. В то же время, если НЧП являются единственным релевантным видом животных, может быть проведена оценка потенциального влияния препарата на фертильность самцов и самок. Для этого необходимо оценить влияние препарата на репродуктивную систему животных (например, массу органов и гистопатологические изменения) в рамках исследований токсичности с многократным введением длительностью не менее 3 месяцев. Для исследований необходимо использовать половозрелых НЧП. Если на основании данных о фармакологической активности или результатов предыдущих исследований существуют опасения относительно токсичности лекарственного препарата, может быть проведена оценка специальных параметров в ходе исследований токсичности многократного введения препарата. К таким параметрам относятся периодичность менструального цикла, число сперматозоидов, морфология и (или) подвижность сперматозоидов, содержание половых гормонов у самцов и самок.

Если НЧП являются единственным релевантным видом животных и при этом существуют теоретические предпосылки относительно потенциального влияния препарата на оплодотворение (имплантацию), причиной которого является его фармакологическая активность, следует проверить такие теоретические предпосылки экспериментально. В случае наличия данных предпосылок единственной практической возможностью оценить потенциальные эффекты на оплодотворение и имплантацию является использование гомологичных белков или трансгенных моделей. В то же время не рекомендуется разрабатывать гомологичные белки или трансгенные модели с единственной целью проведения исследований репродуктивной функции у грызунов. При отсутствии доклинических данных минимизацию риска следует осуществлять путем выполнения соответствующих процедур в рамках клинических исследований, получения информированного согласия у субъектов клинического исследования и внесения соответствующих сведений в информацию о лекарственном препарате.

 

5.3. Эмбриофетальное развитие и пренатальное
(постнатальное) развитие потомства
 

При выборе дизайна и интерпретации результатов исследования по оценке эмбриофетальной токсичности и влияния отдаленных эффектов токсичности на развитие потомства необходимо учитывать потенциальные различия между биотехнологическими лекарственным препаратами в отношении их способности проникать через плацентарный барьер (как указано в пояснении 3 к настоящей главе).

В отношении изучения лекарственных препаратов, проявляющих свою фармакологическую активность только у НЧП, может быть использовано несколько дизайнов исследования с учетом предполагаемого клинического применения и ожидаемых фармакологических эффектов. Целесообразно проведение отдельных исследований на этапах, охватывающих эмбриофетальное и (или) пренатальное (постнатальное) развитие (ППНР (PPND)). Возможны и другие дизайны исследования при условии их обоснования, особенно при наличии некоторых опасений относительно того, что нежелательное влияние на эмбриофетальное развитие или смерть плода во время беременности могут быть вызваны самим механизмом действия исследуемого лекарственного препарата. В ряде случаев более целесообразно проведение одного тщательно спланированного исследования на НЧП, которое предусматривает введение лекарственного препарата самкам с 20-го дня беременности и до рождения потомства (усиленное ППНР (еPPND)), чем проведение отдельных исследований ЭФТ и (или) ППНР.

При проведении единственного исследования усиленного ППНР, которое предусматривает изучение влияния препарата на пренатальное (постнатальное) развитие плода и дизайн которого описан выше, включение группы животных, которым проводят кесарево сечение, является нецелесообразным, при этом необходимо проводить оценку исходов беременности, завершившихся естественными родами. В рамках указанного исследования необходимо оценить жизнеспособность потомства, внешние пороки развития, аномалии развития скелета (например, с помощью рентгенографии), а также морфологию внутренних органов и тканей при вскрытии животных. Проведение ультразвуковых исследований эффективно для контроля протекания беременности, однако такие исследования являются малоинформативными для обнаружения пороков развития потомства. Оценка возможных пороков развития осуществляется в период послеродового наблюдения. Введение исследуемого препарата матери в послеродовый период не рекомендуется, поскольку это может оказывать неблагоприятное влияние на материнскую заботу о потомстве. При необходимости, в исследование можно включить анализ других конечных точек (параметров, оцениваемых у потомства), если они имеют значение для оценки фармакологической активности препарата. Продолжительность постнатальной фазы исследований зависит от дополнительных конечных точек, которые выбирают в соответствии с механизмом действия исследуемого лекарственного препарата (как это указано в пояснении 4 к настоящей главе).

Исследования онтогенетической токсичности на НЧП позволяют выполнить только идентификацию рисков. Число животных в группе должно быть достаточным для достоверной интерпретации полученных данных (как это указано в пояснении 5 к настоящей главе).

При использовании других видов НЧП необходимо представить обоснование дизайна такого исследования. Перечисленные выше исследования онтогенетической токсичности, которые проводятся на НЧП, направлены только на выявление возможной угрозы, поэтому проведение таких исследований возможно с включением одной исследуемой группы (получающей одну дозу препарата) и одной контрольной группы. При этом необходимо представить научное обоснование выбора дозы. В качестве примера научного обоснования может быть рассмотрен опыт исследования моноклональных антител, способных связываться с растворимым антигеном-мишенью. При этом используются предлагаемые для клинического применения дозы препарата моноклональных антител, обеспечивающие насыщение его связывания с мишенью. Если такое насыщение связывания с мишенью может быть продемонстрировано на выбранном для исследования виде животных и применяемая доза обеспечивает экспозицию, которая не более чем в 10 раз превышает экспозицию достигаемую при клиническом применении, результаты исследования единственной дозы при наличии контрольной группы животных обеспечивают достаточную оценку угрозы исследуемого препарата на эмбриофетальное развитие.

 
5.4. Сроки проведения исследования
 

Если в клинические исследования включаются женщины с детородным потенциалом, до получения информации о возможном влиянии препарата на эмбриофетальное развитие, должны быть приняты соответствующие меры по ограничению клинического риска, например, даны рекомендации по использованию высокоэффективных методов контрацепции (в соответствии с актами, входящими в право Союза и регламентирующими выполнение доклинических исследований безопасности в целях дальнейшего проведения клинических исследований и регистрации лекарственных препаратов).

Для биотехнологических лекарственных препаратов, которые проявляют фармакологическую активность только у НЧП, доклинические исследования ЭФТ и усиленного ППНР могут проводиться параллельно с клиническими исследованиями фазы III, при условии применения мер предосторожности, достаточных для предотвращения наступления беременности у субъектов клинического исследования. В этом случае отчет о результатах проведенных исследований необходимо представить при подаче заявления о регистрации лекарственного препарата. Если спонсор не может обеспечить достаточные меры для предотвращения беременности у женщин, включенных в клинические исследования, необходимо до начала фазы III представить полный отчет об исследовании токсичности при ППНР, либо промежуточный отчет об исследовании токсичности в усиленном ППНР (как это указано в пояснении 6 к настоящей главе). Если препарат является фармакологически активным только у НЧП, и механизм его действия позволяет сделать теоретическое заключение относительно его влияния на эмбриофетальное развитие, представляемая субъектам клинического исследования информация о лекарственном препарате должна включать указание о возможном существовании таких последствий. При этом проведение исследования онтогенетической токсичности на НЧП не требуется. В инструкции по применению необходимо указать, что женщинам с детородным потенциалом следует избегать применения такого лекарственного препарата.

Если релевантными видами животных являются грызуны или кролики, информация о сроках проведения исследований репродуктивной токсичности должна соответствовать требованиям актов, входящих в право Союза, и регламентирующих выполнение доклинических исследований безопасности в целях дальнейшего проведения клинических исследований и регистрации лекарственных препаратов. Указанных требований следует придерживаться также в вопросах о сроках проведения исследований при оценке влияния на фертильность тех препаратов, для которых грызуны являются релевантными видами животных.

Для препаратов, соответствующих требованиям актов, входящих в право Союза по доклинической оценке безопасности противоопухолевых лекарственных препаратов и препаратов, предназначенных для лечения онкологических заболеваний, вопросы, связанные со сроками проведения исследований, должны также соответствовать положениям настоящей главы.

 
6. КАНЦЕРОГЕННОСТЬ
 

Необходимость проведения специфичных для конкретного биологического лекарственного препарата исследований канцерогенного потенциала следует определять исходя из популяции, у которой планируется клиническое применение препарата, а также длительностью его применения (как это указано в актах, входящих в право Союза и регламентирующих выполнение соответствующих доклинических исследований безопасности). Если такая оценка необходима, заявитель должен разработать программу исследований, которая позволила бы выявить потенциальную угрозу препарата.

Программа исследования должна основываться на анализе совокупности существующих данных, в том числе на обзоре соответствующих сведений, полученных из разного рода источников. Среди источников информации могут быть научные медицинские публикации (например, информация, полученная в результате исследования моделей заболевания у животных, трансгенных животных и животных с нокаутом генов, генетических заболеваний человека). Также это могут быть данные, применимые ко всей группе таких лекарственных препаратов (в том числе, подробная информация о биологических функциях молекулы-мишени и механизме действия, результаты исследований in vitro, исследований хронической токсичности или клинических исследований). В некоторых случаях имеющейся информации может быть достаточно для выяснения канцерогенного потенциала и установления риска для клинического применения без проведения дополнительных доклинических исследований.

Механизм действия некоторых биологических лекарственных препаратов может свидетельствовать о том, что они могут обладать канцерогенным потенциалом (например, иммунодепрессанты и факторы роста). Если совокупность различных данных (которые приведены выше) свидетельствует о существовании риска проявления канцерогенного потенциала, проведение биологических испытаний на грызунах не требуется. В такой ситуации наиболее приемлемым является указание о наличии риска в общей характеристике (инструкции по медицинскому применению (листке-вкладыше) данного лекарственного препарата, а также проведение мероприятий, направленных на минимизацию данного риска. В то же время если совокупность разных данных не позволяет сделать однозначный вывод, заявитель должен рассмотреть вопрос о проведении дополнительных исследований, которые могли бы оценить наличие риска, предполагаемого на основании знания механизма действия препарата (в соответствии с требованиями подраздела 4.8 главы 5.3 настоящих Правил).

Для ряда лекарственных препаратов сведений о свойствах и механизме их действия недостаточно для того, чтобы выдвинуть предположения о канцерогенном потенциале этих лекарственных препаратов. В таких случаях оправданной считается более тщательная оценка (например, оценка взаимосвязи между биологическими функциями молекулы-мишени и канцерогенным потенциалом или включение дополнительных конечных точек в токсикологические исследования препарата).

Если совокупность сведений, полученная в результате таких более обширных исследований, не указывает на наличие канцерогенного потенциала, проведение дополнительных доклинических исследований не рекомендуется. Напротив, если собранная информация свидетельствует о возможности проявления канцерогенного потенциала, заявитель может провести дополнительные доклинические исследования, которые позволили бы подтвердить отсутствие канцерогенного потенциала, в противном случае необходимо указать соответствующие предостережения в общей характеристике (инструкции по медицинскому применению (листке-вкладыше) данного лекарственного препарата.

Оценка канцерогенного потенциала, специфичная для данного препарата, используется для:

сообщения о наличии риска и составления плана по управлению рисками;

внесения соответствующих предостережений в общую характеристику (инструкцию по медицинскому применению (листок-вкладыш) данного лекарственного препарата;

обеспечения клинического мониторинга и пострегистрационного наблюдения.

Также могут использоваться сочетания вышеперечисленных подходов к обсепечению безопасности применения лекарственного препарата.

Информативность количественных исследований биологической активности на грызунах (или краткосрочных исследований канцерогенности) с использованием гомологичных белков при оценке канцерогенного потенциала препарата, который предполагается использовать в клинической практике, обычно ограничена.

Разработчику лекарственного препарата следует применять альтернативные решения по мере разработки новых подходов (методов) исследований безопасности лекарственных препаратов.

 

ПРИМЕЧАНИЯ

 

1. Исследования перекрестной тканевой реактивности (ПТР (TCR)) представляют собой изучение связывания исследуемого препарата с тканями в тестах in vitro с использованием иммуногистохимических методик (ИГХ). Данные тесты позволяют охарактеризовать связывание препаратов моноклональных антител и препаратов модифицированных антител с антигенными детерминантами в тканях. Вместо иммуногистохимических методов могут быть использованы другие аналитические технологии, которые позволяют изучить распределение мишеней (участков связывания) в тканях.

Исследование ПТР с использованием панели тканей человека является рекомендуемым компонентом программы оценки безопасности, которая обосновывает применение начальной клинической дозы биотехнологического лекарственного препарата. Однако в отдельных случаях лекарственный препарат (кандидат для клинических исследований) не является хорошим реагентом, пригодным для использования в иммуногистохимических анализах, в связи с этим исследование ПТР может быть технически неосуществимо.

В исследованиях ПТР могут быть получены полезные дополнительные сведения о распределении мишени, а также может быть получена информация о возможном непредвиденном связывании. Само по себе связывание препарата с тканями не является показателем возможного проявления его биологической активности in vivo. Кроме того, связывание исследуемого препарата с участками, которые обычно являются недоступными для него в условиях in vivo (то есть с цитоплазмой), как правило, не имеет клинического значения. Именно поэтому результаты исследований следует интерпретировать, учитывая всю полученную информацию, включая фармакологические данные и данные по оценке безопасности препарата.

В случае непредвиденного связывания с тканями человека оценка ПТР выбранных тканей животных может обеспечить дополнительную информацию о потенциальных корреляциях либо их отсутствии в рамках доклинического исследования токсичности препарата. Исследования ПТР с использованием полного набора тканей животных не рекомендованы.

Поскольку лекарственные препараты на основе антител с двойной специфичностью (биспецифичные гибридные антитела) подлежат исследованию ПТР с использованием панели тканей человека, отпадает необходимость в изучении ПТР отдельных компонентов препарата.

Оценка связывания гомологичных белков с тканями является малоинформативной, если исследования ПТР препарата, предназначенного для клинических исследований, были проведены с использованием набора тканей человека, поэтому такая оценка не рекомендована.

Исследования ПТР не предназначены для выявления незначительных изменений критических показателей качества лекарственного препарата. Поэтому исследования ПТР не рекомендованы для оценки сопоставимости исследуемого препарата после внесения изменений в процесс его производства в ходе программы разработки препарата.

2. Если для оценки безопасности конъюгатов антител с лекарственными препаратами или токсинами (ADC) использовались 2 вида животных, необходимо провести дополнительное краткосрочное исследование (или часть краткосрочного исследования) с использованием неконъюгированного токсина по крайней мере на одном виде животных. В этих случаях предпочтительно использовать грызунов, за исключением случаев, когда токсин неактивен при введении грызунам. Если доступен только один фармакологически релевантный вид животных, исследования ADC следует проводить на данном виде животных. Выбор видов животных при исследовании новых токсических веществ, должен проводиться аналогично подходу, используемому при изучении новых химических веществ и основываться на индивидуальном подходе. В случае изучения токсинов или токсических веществ, которые не являются новыми и для которых доступно достаточное количество научной информации, проводить отдельное исследование неконъюгированного токсина не требуется. Должны быть представлены данные о сравнении метаболической стабильности ADC в организме животных и человека.

3. При интерпретации результатов исследования необходимо учитывать профиль воздействия препарата на развитие эмбриона и плода во время беременности. Белки с высокой молекулярной массой (> 5000 Да) не проникают через плацентарный барьер за счет простой диффузии. В случае моноклональных антител с высокой молекулярной массой (достигающей 150 000 Да) существует специфический транспортный механизм переносящий антитела через плаценту с участием неонатального Fc рецептора (FcRn), который определяет экспозицию у плода и отличается у разных биологических видов.

У НЧП и человека трансплацентарная передача IgG в период органогенеза невысока, она начинает увеличиваться в начале 2 триместра беременности, достигая максимума в конце 3 триместра. Проведение стандартных исследований эмбриофетальной токсичности на НЧП, получающих препарат с ранних сроков беременности и до 50-го дня гестации, не имеет большого значения при оценке непосредственного влияния на развитие эмбриона и плода в период органогенеза. В то же время такие исследования могут позволить оценить непрямое влияние на эмбриофетальное развитие в результате экспозиции препарата в организме матери. Кроме того, введение исследуемого препарата самкам НЧП после родов обычно неактуально, так как IgG экскретируются в грудное молоко только в раннем периоде (то есть в молозиво), в более поздних фазах лактации и период кормления грудным молоком его выделение прекращается.

Грызуны отличаются от НЧП и человека тем, что у них IgG проникают через желточный мешок благодаря транспорту с участием FcRn, в связи с этим экспозиция может возникать на относительно ранних сроках беременности по сравнению с НЧП и человеком. Кроме того, рождение потомства у грызунов происходят на этапе развития, когда они еще не достигли той степени зрелости, как у новорожденных НЧП и человека. Следовательно, чтобы детеныши экспериментальных животных подвергались экспозиции лекарственного препарата через молоко, самкам крыс (мышей) следует вводить препарат в период лактации по крайней мере до 9-го дня грудного вскармливания, когда зрелость потомства достигает того же уровня развития, что у новорожденного ребенка.

4. С целью проведения ранних функциональных исследований (например, оценка роста и поведения) минимальная продолжительность постнатального периода наблюдения за новорожденными после прекращения экспозиции препарата должна составлять 1 месяц.

В целом если существуют доказательства нежелательного влияния на иммунную систему или ее функции, полученные в ходе исследования общей токсичности, обосновано проведение исследований функций иммунной системы у потомства в послеродовый период в рамках исследований усиленной ППНР. При необходимости в раннем постнатальном периоде (до 28-го дня после рождения) следует провести иммунофенотипирование. Продолжительность постнатального наблюдения, целью которого является оценка функционального состояния иммунной системы, должна составлять 3 - 6 месяцев в зависимости от используемых функциональных тестов.

Нейроповеденческая оценка может ограничиваться наблюдениями за поведением в клинических условиях. Поскольку при обучении пользоваться предметами формирование навыков требует определенного времени, это может привести к продлению периода постнатального наблюдения по крайней мере до 9 месяцев и поэтому такой способ проверки не рекомендован.

5. Подробное обсуждение подхода к определению размеров группы макаков-крабоедов в исследовании усиленной ППНР представлено научной медицинской литературе. При проведении исследований усиленной ППНР число молодых животных должно быть достаточным (6 - 8 особей в группе в возрасте до 7 дней) для оценки постнатального развития и обеспечения возможности проведения специальных исследований (например, оценки состояния иммунной системы).

При проведении исследований усиленной ППНР, беременных животных набирают в течение нескольких недель или месяцев. Необходимо рассмотреть возможность прекращения дальнейшего набора в исследование беременных животных и коррекции дизайна исследования (например, путем использования кесарева сечения) в случаях, когда потери в пренатальном периоде в группе, получающей исследуемый препарат, свидетельствуют о токсических эффектах, связанных с воздействием препарата.

Рекомендуется повторно использовать самок животных контрольной группы, получавших индифферентное вещество, например, растворитель.

Если существуют основания предполагать, что за счет механизма действия препарат может оказывать влияние на эмбриофетальное развитие или приводить к прерыванию беременности, для подтверждения предполагаемой угрозы следует проводить исследования на ограниченном количестве животных.

6. В промежуточный отчет о результатах исследований, проведенных в рамках усиленной ППНР на НЧП, включают следующие конечные точки:

данные о самках (выживаемость, клинические наблюдения, масса тела, данные о воздействии препарата в период беременности (при наличии), любые фармакодинамические конечные точки);

данные о беременности (количество беременных животных, включенных в исследование, состояние беременности на момент завершения органогенеза (50-й день беременности) и на 100-й день беременности, частота невынашивания беременности и срок прерывания беременности). Для подготовки промежуточного отчета нет необходимости в проведении ультразвукового исследования с целью определения размера плода в связи с наличием сведений о фактической массе тела потомства при рождении;

данные об исходе беременности (число живо- и мертворожденных, масса тела новорожденных, выживаемость новорожденных и их масса тела на 7-е сутки после рождения, качественная оценка внешних морфологических признаков (подтверждение, что внешний вид соответствует пределам нормы), данные об экспозиции у потомства (при наличии), фармакодинамические конечные точки у потомства (если применимо)).

 

Глава 6
 
СПЕЦИФИКАЦИИ. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЯ И КРИТЕРИИ
ПРИЕМЛЕМОСТИ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ (БИОЛОГИЧЕСКИХ) ПРЕПАРАТОВ
 
1. ВВЕДЕНИЕ
 
1.1. Цель
 

В настоящей главе представлены общие принципы формирования и обоснования единого свода спецификаций на биотехнологические и биологические препараты, представляемых в составе регистрационного досье для регистрации лекарственных препаратов.

 
1.2. Вводная часть
 

Под спецификацией понимается перечень испытаний, ссылок на аналитические методики и соответствующие критерии приемлемости, представляющие собой численные (количественные) пределы, диапазоны и прочие критерии для описанных испытаний. Спецификация задает набор критериев, которым должны соответствовать активная фармацевтическая субстанция, лекарственный препарат или материалы других этапов производства, чтобы считаться приемлемыми для использования по целевому назначению. Спецификации составляются на все исходные материалы, сырье, промежуточные продукты, вспомогательные вещества, активную фармацевтическую субстанцию, лекарственный препарат. Для лекарственного препарата спецификация является частью нормативного документа по качеству. Под "соответствием спецификациям" понимается, что при испытании согласно представленным в спецификации аналитическим методикам активная фармацевтическая субстанция и лекарственный препарат будут отвечать заданным в спецификациях критериям приемлемости. Спецификации являются критическими стандартами качества, которые составляются и обосновываются производителем, после чего утверждаются уполномоченными органами государств-членов в качестве условий регистрации.

Спецификации являются частью общей стратегии контроля, разработанной для обеспечения качества лекарственных препаратов и постоянства характеристик лекарственных препаратов. Другие элементы данной стратегии включают:

подробное установление в процессе разработки характеристик (описание свойств), на основании которых составляются спецификации;

соответствие правилам надлежащей производственной практики Союза, утверждаемых Комиссией;

валидацию процесса производства;

испытание сырья и внутрипроизводственные испытания;

изучение стабильности и т.д.

Спецификации предназначены в большей мере для подтверждения качества активной фармацевтической субстанции и лекарственного препарата, чем для составления их полной характеристики с фармацевтической точки зрения, и должны описывать молекулярные и биологические свойства, контроль которых может быть использован для подтверждения безопасности и эффективности лекарственного препарата.

 
1.3. Сфера применения
 

Требования, изложенные в настоящей главе, применимы к лекарственным препаратам, которые являются белками и полипептидами, их производными, а также к лекарственным препаратам, компонентами которых они являются (например, конъюгатам). Такие белки и полипептиды продуцируются экспрессирующими системами рекомбинантных и нерекомбинантных клеточных культур и могут быть в надлежащей степени очищены и охарактеризованы с использованием подходящего набора аналитических методик.

Требования настоящей главы, можно также применять к другим лекарственным препаратам, например, белкам и полипептидам, изолированным из тканей и жидкостей организма. Для определения применимости настоящей главы в отношении таких лекарственных препаратов производители должны проконсультироваться с уполномоченными органами государств-членов. Если в других главах настоящих Правил указана ссылка на настоящую главу, то на такие лекарственные препараты распространяются требования, приведенные в настоящей главе, либо эти требования следует учитывать.

Требования настоящей главы не распространяются на антибиотики, синтетические пептиды и полипептиды, гепарины, витамины, клеточные метаболиты, препараты ДНК, экстракты аллергенов, традиционные вакцины, клетки, цельную кровь и клеточные компоненты крови.

В настоящей главе не приводятся требования к отдельным аналитическим методикам и частным критериям приемлемости. Кроме того, требования настоящей главы не предназначены для применения к спецификациям продуктов, проходящих стадии доклинического и (или) клинического исследования, однако приведенные в ней указания следует принимать во внимание для этих продуктов.

 

2. ПРИНЦИПЫ СОСТАВЛЕНИЯ СПЕЦИФИКАЦИЙ
 
2.1. Установление характеристик (описание свойств)
 

Для составления надлежащих спецификаций необходимо с помощью надлежащих методов охарактеризовать свойства биологического или биотехнологического средства, включающие определение физико-химических свойств, биологической активности, иммунохимических свойств, чистоты и примесей. Критерии приемлемости следует устанавливать и обосновывать результатами анализа серий, использованных в доклинических и (или) клинических исследованиях, результатами анализа серий, использованных для подтверждения постоянства производства, результатами исследований стабильности и соответствующих данных по разработке.

Подробное установление характеристик выполняется на стадии разработки и, при необходимости, после внесения в процесс производства значительных изменений. На момент подачи документов на регистрацию препарат необходимо сравнить с соответствующим стандартным образцом (при наличии). По возможности (и если это применимо) препарат следует сравнить с его естественным аналогом. Кроме того, на момент подачи заявления о регистрации производитель должен располагать должным образом охарактеризованными собственными стандартными материалами, которые будут использоваться в ходе биологических и физико-химических испытаний промышленных серий. Разработчику лекарственного препарата следует учитывать, что постоянно разрабатываются новые аналитические технологии и модификации уже существующих технологий, которые необходимо применять при возникновении необходимости.

 

2.1.1. Физико-химические свойства.

Программа установления физико-химических свойств обычно включает определение состава, физических свойств и первичной структуры целевого (требуемого) продукта. В некоторых случаях с помощью соответствующих физико-химических методов можно получить данные о структурах более высокого порядка, правильность которых обычно подтверждается наличием биологической активности.

Поскольку продукция белков живыми организмами осуществляется с помощью процессов биосинтеза, таким белкам присуща определенная степень структурной гетерогенности, поэтому желаемый продукт может представлять собой смесь ожидаемых пострансляционно модифицированных форм (например, гликоформ). Такие формы могут обладать активностью и не оказывать негативного влияния на безопасность и эффективность препарата (как это указано в подразделе 2.1.4 настоящей главы). Производитель должен установить профиль гетерогенности желаемого продукта и подтвердить его постоянство, путем испытания серий, использованных в доклинических и клинических исследованиях. Если установлен постоянный профиль гетерогенности продукта, оценка активности, эффективности и безопасности (включая иммуногенность) отдельных форм может не потребоваться.

Гетерогенность может также быть обусловлена производственными причинами и (или) хранением фармацевтической субстанции или лекарственного препарата. Поскольку гетерогенность таких препаратов определяет их качество, для обеспечения постоянства серий необходимо охарактеризовать степень и профиль такой гетерогенности. Если такие варианты целевого продукта обладают свойствами, сопоставимыми со свойствами самого целевого продукта по активности, эффективности и безопасности, эти варианты целевого продукта рассматривают в качестве родственных соединений. Если изменение процесса производства или продукты деградации приводят к появлению у продукта профилей гетерогенности, отличающихся от профиля гетерогенности для материала, использованного в доклинической и клинической разработке, необходимо изучить значимость таких изменений.

Аналитические методы, направленные на изучение физико-химических свойств, перечислены в подразделе 6.1 настоящей главы. Разработчику лекарственного препарата следует учитывать, что постоянно разрабатываются новые аналитические технологии и модификации уже существующих технологий, которые следует использовать, если это обосновано.

В целях выпускающего контроля качества серий (как это указано в разделе 4 настоящей главы) необходимо отобрать надлежащий перечень этих методов аналитического исследования и обосновать его.

 

2.1.2. Биологическая активность.

Оценка биологических свойств является не менее важным компонентом установления полного профиля свойств лекарственного препарата. Важным свойством лекарственного препарата является биологическая активность, которая определяет особую способность или свойство препарата оказывать определенный биологический эффект.

Производитель должен представить валидную биологическую методику количественного определения, позволяющую измерить биологическую активность. Примеры методик, используемых для определения биологической активности:

биологические методики количественного определения с использованием животных, которые определяют биологический ответ организма на препарат;

биологические методики количественного определения с использованием культур клеток, которые определяют биохимический или физиологический ответ на клеточном уровне;

биохимические методики количественного определения, которые определяют такие биологические активности, как скорость ферментативных реакций или биологические эффекты, обусловленные иммунологическими взаимодействиями.

Могут быть приемлемы и другие методики, такие как исследования лиганд-рецепторных взаимодействий.

Под активностью (potency) (выражаемой в единицах) понимается количественная мера биологической активности, основанная на показателе качества препарата, связанном с его значимыми биологическими свойствами, тогда как под количественным содержанием (quantity) (выражаемым в единицах массы) понимается физико-химическая мера содержания белка.

Не во всех случаях требуется воспроизводить биологическую активность в клинической ситуации. В ходе фармакодинамических и клинических исследований необходимо установить корреляцию между ожидаемым клиническим эффектом и активностью, рассчитанной с помощью биологической методики количественного определения.

Результаты количественного определения биологических методик следует выражать в единицах активности, откалиброванных по международному или национальному стандартному образцу (при их наличии и пригодности для использованной методики). Если такой стандартный образец отсутствует, необходимо приготовить собственный стандартный материал, а результаты испытания промышленных серий - выражать в разработанных единицах.

Физико-химические данные о сложных молекулах достаточно многообразы, тем не менее зачастую они не позволяют подтвердить структуру более высокого порядка, однако о ней можно косвенно судить по биологической активности. В таких случаях приемлема комбинация биологической методики с расширенными доверительными пределами и специальной количественной мерой. Следует отметить, что замена биологической методики количественного определения, измеряющей биологическую активность препарата, на физико-химические испытания допускается лишь при соблюдении 2 следующих условий:

с помощью таких физико-химических методов можно получить достаточно подробные физико-химические данные о продукте, включая сведения о структуре высокого порядка, при этом подтверждена соответствующая корреляция с биологической активностью;

у производителя лекарственного препарата имеется хорошо документированная история производства.

Если для расчета биологической активности, основанного на надлежащей корреляции, используются исключительно физико-химические испытания, их результаты следует выражать в единицах массы.

В целях выпускающего контроля качества серий (как это указано в подразделе 4 настоящей главы) производитель должен обосновать выбор соответствующей методики количественного определения (биологической и (или) физико-химической).

 

2.1.3. Иммунохимические свойства.

Если целевым продуктом является антитело, необходимо всесторонне описать его иммунологические свойства. Для определения аффинности, авидности и иммунореактивности (включая перекрестную реактивность) следует (по возможности) использовать методики связывания антитела с очищенными антигенами и определенными участками антигенов. Кроме того, необходимо описать биохимические свойства молекулы-мишени, несущей соответствующий эпитоп, а также сам эпитоп (по возможности).

В некоторых случаях молекулу белка некоторых активных фармацевтических субстанций и лекарственных препаратов необходимо изучить с помощью иммунохимических методик (например, ИФА, вестерн-блот), в которых используются антитела, распознающие различные эпитопы белковой молекулы. Иммунохимические свойства белка могут использоваться для установления его подлинности, постоянства свойств и чистоты или для количественного определения показателей качества.

Если оценка иммунохимических свойств используется в целях выпускающего контроля качества серий, необходимо представить все значимые сведения об антителе.

 

2.1.4. Чистота, примеси и контаминанты.

 

2.1.4.1. Чистота.

Установление абсолютной, равно как и относительной чистоты сопряжено со значительными аналитическими затруднениями, а результаты установления чистоты в значительной степени зависят от использованного метода. Традиционно относительную чистоту биологического препарата выражают с помощью специфической активности (в единицах биологической активности на миллиграмм препарата), которая также сильно зависит от использованного метода. Вследствие этого чистоту активной фармацевтической субстанции и лекарственного препарата изучают с помощью комбинации аналитических методик.

Ввиду уникальности биосинтетического процесса производства и молекулярных свойств биотехнологических и биологических препаратов активная фармацевтическая субстанция может состоять из нескольких молекулярных сущностей или вариантов. Если такие молекулярные сущности образуются в результате ожидаемых посттрансляционных модификаций, они являются частью целевого продукта. Если варианты целевого продукта образуются в ходе процесса производства и (или) хранения и обладают свойствами, сопоставимыми с целевым продуктом, их рассматривают в качестве родственных соединений, а не примесей (в соответствии с требованиями подраздела 2.1.1 настоящей главы).

Следует установить отдельные критерии приемлемости для отдельных родственных соединений или критерии приемлемости для их суммы.

В целях выпускающего контроля качества серий (в соответствии с требованиями подраздела 4 настоящей главы) для определения чистоты необходимо отобрать и обосновать подходящий перечень методов.

 

2.1.4.2. Примеси.

Помимо изучения чистоты активной фармацевтической субстанции и лекарственного препарата, которые могут состоять из целевого продукта и множества родственных соединений, производитель также должен изучить примеси, которые могут в них содержаться. Примеси делятся на производственные и родственные. Они могут иметь изученную структуру, могут быть описанными частично или неидентифицированными. Если удается получить достаточное количество примесей, их необходимо как можно подробнее охарактеризовать и по возможности изучить их биологическую активность.

Производственные примеси образуются в ходе процесса производства, например, из клеточных субстратов (например, белки клетки-хозяина, ДНК клетки-хозяина), клеточной культуры (например, индукторы, антибиотики или компоненты питательной среды) или вследствие последующей переработки (в соответствии с требованиями подраздела 6.2.1 настоящей главы). Родственные примеси (например, прекурсоры, определенные продукты деградации) - это молекулярные варианты, образующиеся при производстве и хранении целевого продукта, которые не обладают активностью, эффективностью и безопасностью сопоставимыми с целевым продуктом.

Кроме того, критерии приемлемости по содержанию примесей в целевом продукте должны основываться на результатах анализа серий, использованных в доклинических и клинических исследованиях, и серий, испытанных для подтверждения постоянства производства.

Следует установить отдельные критерии приемлемости для отдельных родственных примесей или критерии приемлемости для их суммы. В определенных случаях для некоторых примесей критерии приемлемости устанавливать не требуется (в соответствии с требованиями подраздела 2.3 настоящей главы).

Примерный перечень аналитических методик, которые целесообразно использовать в испытаниях на примеси, приведен в подразделе 6.2 настоящей главы. Разработчику лекарственного препарата следует учитывать, что непрерывно разарабатываются новые аналитические технологии и модификации ныне существующих аналитических технологий. При наличии достаточного обосновании их также следует использовать для контроля качества целевого продукта.

В целях выпускающего контроля качества серий (в соответствии с требованиями подраздела 4 настоящей главы) необходимо отобрать надлежащий перечень методов контроля качества и обосновать его.

 

2.1.4.3. Контаминанты.

К контаминантам препарата относятся все посторонним образом привнесенные материалы, не используемые в процессе производства, например, химические и биохимические материалы (например, микробные протеазы) и (или) микроорганизмы. Необходимо избегать наличия контаминантов и (или) надлежащим образом контролировать их содержание с помощью надлежащих внутрипроизводственных критериев приемлемости или пределов действия в спецификациях на фармацевтическую субстанцию или лекарственный препарат (в соответствии с требованиями подраздела 2.3 настоящей главы). При особых случаях контаминации посторонними вирусами или микоплазмой концепция пределов действия неприменима, поэтому необходимо следовать стратегиям, указанным в главах 1 и 2 настоящих Правил.

 

2.1.5. Количественное содержание.

Количественная характеристика препарата, определяемая содержанием белка, имеет большое значение для биотехнологических и биологических препаратов и определяется с помощью соответствующих методов анализа (обычно физико-химических). В частных случаях допускается подтвердить, что установленные такими методами показатели качества могут быть непосредственно связаны с показателями, определенными в ходе биологического анализа. При наличии такой корреляции целесообразнее измерять количество, а не биологическую активность в ходе таких производственных процессов, как наполнение.

 
2.2. Аналитические вопросы
 

2.2.1. Стандартные образцы и стандартные материалы

При регистрации новых молекулярных соединений международные или национальные стандарты, как правило, будут отсутствовать. На момент подачи заявления о регистрации лекарственного препарата производитель должен разработать надлежащим образом охарактеризованный собственный основный стандартный материал, приготовленный из серий, отражающих свойства промышленного и клинического материалов. Собственные рабочие стандартные материалы, используемые для испытания промышленных серий, следует калибровать по основному стандартному материалу. При наличии международного или национального стандарта и его пригодности собственные стандартные материалы следует калибровать по нему. Хотя как в биологических методиках, так и физико-химических испытаниях рекомендуется использовать одинаковый стандартный материал, в некоторых случаях необходимо использовать различные стандартные материалы. Кроме того, могут потребоваться отдельные стандартные материалы для родственных соединений, родственные и производственные примеси. В соответствующих случаях в регистрационное досье необходимо включить описание производства и (или) очистки стандартных материалов. Необходимо также представить документацию по характеристикам, условиям хранения и составу стандартных материалов, обосновывающую стабильность стандартных материалов.

 

2.2.2. Валидация аналитических методик

При подаче заявления о регистрации лекарственного препарата в уполномоченные органы государств-членов заявители должны валидировать аналитические методики, использованные в спецификациях, в соответствии с требованиями актов, входящих в право Союза, за исключением отдельных методик, присущих исключительно испытаниям, используемым для анализа биотехнологических и биологических лекарственных препаратов.

 
2.3. Контроль производства
 

2.3.1. Особенности технологического процесса.

Правильное планирование процесса производства и теоретический анализ его возможностей являются частью стратегии разработки контролируемого и воспроизводимого процесса производства, позволяющего получить активную фармацевтическую субстанцию и лекарственный препарат, отвечающие требованиям спецификации. В этом отношении пределы отклонений показателей качества обосновывают критическими данными, полученными на протяжении всего процесса производства (начиная с раннего этапа разработки и заканчивая промышленным производством).

Испытания активной фармацевтической субстанции или лекарственного препарата на определенные примеси могут не потребоваться (их допускается не включать в спецификации), если с помощью подходящих исследований подтверждены эффективный контроль их содержания или приемлемая степень очистки. Такие испытания могут включать верификацию промышленных серий в соответствии с требованиями, содержащимися в актах, входящих в право Союза. На момент регистрации в распоряжении заявителя могут находиться лишь ограниченные данные по верификации промышленныъх серий, поэтому данную концепцию в частных случаях допускается внедрять на пострегистрационном этапе в соответствии с требованиями, содержащимися в актах, входящих в право Союза.

 

2.3.2. Внутрипроизводственные критерии приемлемости и уровень действия.

Внутрипроизводственные испытания проводятся на этапах принятия критических решений, а также на других этапах, если полученные результаты испытаний указывают на необходимость удостовериться в постоянстве процесса производства активной фармацевтической субстанции или лекарственного препарата. Результаты внутрипроизводственных испытаний регистрируют в виде пределов уровня действия или критериев приемлемости. Проведение таких испытаний позволяет исключить испытания фармацевтической субстанции или лекарственного препарата (в соответствии с требованиями подраздела 2.3.1 настоящей главы). Внутрипроизводственные испытания in vitro на посторонние агенты клеток предельного для производства клеточного возраста являются примером испытания, для которого необходимо установить критерии приемлемости.

Производитель также должен использовать собственные (внутренние) пределы уровня действия для оценки процесса на менее значимых этапах. Основой для разработки предварительных пределов уровня действия, устанавливаемых для процесса производства, должны служить данные, полученные в ходе разработки лекарственного препарата и проведения валидационных циклов. Такие пределы, ответственность за установление которых несет производитель, могут быть использованы для начала расследования возможных отклонений или дальнейших действий, направленных на их устранение. В дальнейшем эти пределы следует изучать и корректировать по мере приобретения дополнительного производственного опыта и данных после регистрации лекарственного препарата.

 

2.3.3. Спецификации на исходные материалы, сырье и вспомогательные вещества.

Качество исходных материалов и сырья, использовавшегося в производстве фармацевтической субстанции или лекарственного препарата, должно удовлетворять стандартам, соответствующим их целевому назначению. Исходные материалы и сырье (включая реактивы) биологического происхождения требуют тщательного изучения на предмет наличия или отсутствия опасных эндогенных и посторонних агентов. Методики, позволяющие использовать аффинную хроматографию (например, применение моноклональных антител), должны включать соответствующие меры, обеспечивающие отсутствие негативного влияния таких производственных примесей и потенциальных контаминантов, образующихся в ходе производства, на качество и безопасность фармацевтической субстанции и лекарственного препарата. Необходимо представить соответствующие сведения об использующихся антителах.

По возможности качество вспомогательных веществ, использующихся в производстве лекарственного препарата (и в некоторых случаях, фармацевтической субстанции), а также система "контейнер - укупорка" должны удовлетворять фармакопейным стандартам. Иначе, для нефармакопейных вспомогательных веществ, необходимо установить удовлетворительные критерии приемлемости.

 
2.4. Фармакопейные спецификации
 

Фармакопеи государств-членов и основные фармакопеи, в соответствии с Концепцией гармонизации фармакопей государств - членов Евразийского экономического союза, утвержденой Решением Коллегии Комиссии от 22 сентября 2015 г. N 119 (далее - фармакопеи) содержат в фармакопейных статьях (монографиях) важные требования в отношении определенных аналитических методик и критериев приемлемости, которые, если они применимы, являются частью процесса оценки фармацевтической субстанции либо лекарственного препарата. Такие фармакопейные статьи (монографии), применимые к биотехнологическим и биологическим препаратам, включают в том числе испытания на стерильность, эндотоксины, микробиологическую чистоту, объем продукта в контейнере, однородность дозирования и механические включения. С точки зрения использования фармакопейных методов и критериев приемлемости требования настоящей главы связаны с обеспечением определенной степени гармонизации аналитических методик между фармакопеями. Фармакопеи предназначены для разработки идентичных или методологически эквивалентных аналитических методик и критериев приемлемости.

 

2.5. Допустимые пределы на выпуск и допустимые
пределы на срок годности
 

При обосновании показателей качества допускается использовать концепцию допустимых пределов на выпуск вместо допустимых пределов на срок годности. Эта концепция заключается в установлении допустимых пределов показателей качества активной фармацевтической субстанции или лекарственного препарата, которые на момент их выпуска более строгие, чем на срок годности. Примерами применения концепции могут служить активность (potency) и продукты деградации. В частных случаях концепцию пределов на выпуск допускается применять исключительно в отношении собственных допустимых пределов, но не установленных в регистрационном досье допустимых пределов на срок годности.

 
2.6. Статистические концепции
 

При необходимости представления количественных данных следует проводить надлежащий статистический анализ. Необходимо всесторонне описать методы анализа, включая их обоснование и научные предпосылки выбора. Это описание должно быть достаточно полным (ясным), чтобы выполнить независимую обработку представленных результатов.

 

3. ОБОСНОВАНИЕ СПЕЦИФИКАЦИИ
 

Составление спецификаций на фармацевтическую субстанцию и лекарственный препарат является частью общей стратегии контроля качества, включающей контроль качества исходных материалов, сырья и вспомогательных веществ, внутрипроизводственные испытания, оценку или валидацию процесса производства, соблюдение правил надлежащей производственной практики Союза, утверждаемых Комиссией, изучение стабильности и испытание постоянства свойств серий. В совокупности указанные элементы обеспечивают надлежащее качество лекарственного препарата. Поскольку спецификации предназначены в большей мере для подтверждения качества, а не для характеристики свойств лекарственного препарата и (или) активной фармацевтической субстанции, производитель должен представить предпосылки выбора и обоснование включения в спецификацию и (или) исключения из нее испытаний определенных показателей качества. При разработке научно обоснованных спецификаций необходимо учитывать ряд аспектов, указания по которым представлены ниже.

Спецификации должны быть связаны с процессом производства. Спецификации должны основываться на результатах анализа серий, использованных для подтверждения постоянства производства. Необходимо увязать спецификации и процесс производства, особенно по родственным соединениям, родственным и производственным примесям. Изменения процесса производства и продукты деградации, образующиеся при хранении, могут приводить к гетерогенным профилям, отличающимся от профилей у материала, использованного в доклинической и клинической разработке. Необходимо изучить значимость таких изменений.

Спецификации должны позволять провести оценку стабильности активной фармацевтической субстанции и лекарственного препарата. При разработке спецификаций необходимо учитывать деградацию (старение) активной фармацевтической субстанции и лекарственного препарата, которая происходит при хранении. Ввиду присущей этим продуктам сложной структуры невозможно подобрать одну методику или один параметр, описывающие профиль стабильности. Вследствие этого производитель должен предложить в регистрационном досье профиль показателей стабильности. Результаты испытания такого профиля показателей стабильности должны в дальнейшем позволять обнаружить изменения качества лекарственного препарата и (или) активной фармацевтической субстанции. Перечень включаемых в спецификацию испытаний зависит от свойств лекарственного препарата. Производителю следует выполнять требования главы 8 настоящих Правил.

Спецификации должны быть связаны с доклиническими и клиническими исследованиями. Спецификации необходимо составлять, основываясь на результатах анализа серий, использованных в доклинических и клинических исследованиях. Качество материала, производимого в промышленном масштабе, должно соответствовать качеству серий, использованных в доклинических и клинических исследованиях.

Спецификации должны быть связаны с аналитическими методиками. Критические показатели качества включают, например, биологическую активность (potency), свойства и количество родственных соединений, родственных и производственных примесей. Указанные показатели изучают с помощью большого числа аналитических методик, каждая из которых характеризует различные свойства препарата. При разработке препарата нередко вместе с совершениствованием технологии производства препарата происходит совершенствование аналитической технологии. В связи с этим необходимо подтвердить, что данные, полученные в ходе разработки, коррелируют с данными, полученными на момент подачи заявления о регистрации лекарственного препарата.

 
4. СПЕЦИФИКАЦИИ
 

Выбор испытаний, включаемых в спецификации, зависит от лекарственного препарата. Необходимо описать научные предпосылки, на основании которых был установлен допустимый диапазон критериев приемлемости. Критерии приемлемости следует устанавливать и обосновывать, руководствуясь результатами анализа серий, использованных в доклинических и (или) клинических исследованиях, результатами анализа серий, использованных для подтверждения постоянства производства, результатов исследований стабильности и релевантных данных по разработке лекарственного препарата.

В некоторых случаях допускается проводить испытания на промежуточных продуктах, а не фармацевтической субстанции или лекарственном препарате. В таких случаях результаты испытаний следует рассматривать в качестве внутрипроизводственных критериев приемлемости и включать их в спецификацию на фармацевтическую субстанцию или лекарственный препарат, если это предусмотрено требованиями уполномоченных органов государств-членов.

 
4.1. Спецификация на активную фармацевтическую субстанцию
 

Приведенные в настоящем подразделе главы испытания и критерии приемлемости, в целом, применимы ко всем активным фармацевтическим субстанциям (соответствующие аналитические методики указаны в подразделе 2.2.2 настоящей главы). В применимых случаях с активной фармацевтической субстанцией необходимо проводить фармакопейные испытания (например, определение эндотоксинов). В частных случаях могут потребоваться также дополнительные критерии приемлемости, специфичные для активной фармацевтической субстанции.

 

4.1.1. Внешний вид и описание.

Необходимо дать качественное описание физического состояния (например, твердое, жидкое) и цвета активной фармацевтической субстанции.

 

4.1.2. Подлинность.

Испытания на подлинность должны быть высоко специфичными в отношении фармацевтической субстанции и основываться на уникальных свойствах ее молекулярной структуры и (или) иных особенностях. Для установления подлинности может потребоваться проведение более одного испытания (физико-химического, биологического и (или) иммунохимического). Испытания могут носить качественный характер. В целях установления подлинности допускается использовать и (или) соответствующим образом модифицировать методы, традиционно используемые для установления свойств препарата и описанные в подразделах 2.1 и 6.1 настоящей главы.

 

4.1.3. Чистота и примеси.

Абсолютную чистоту биотехнологических и биологических препаратов сложно установить, а результаты ее определения зависят от использованного метода (в соответствии с указаниями подраздела 2.1.4 настоящей главы). Вследствие этого чистоту фармацевтической субстанции, как правило, оценивают с помощью комбинации методов. При выборе и оптимизации аналитических методик следует стремиться к отделению целевого продукта от родственных соединений и примесей.

Примеси таких препаратов делятся на производственные и родственные:

к производственным примесям (в соответствии с требованиями подраздела 2.1.4 настоящей главы) активной фармацевтической субстанции относятся питательные среды, белки и ДНК клетки-хозяина, моноклональные антитела, хроматографические среды, использованные при очистке, растворители и компоненты буферных растворов. Минимизировать содержание таких примесей необходимо путем выполнения надлежащего контроля производственных процессов;

родственные примеси (в соответствии с требованиями подраздела 2.1.4 настоящей главы) активной фармацевтической субстанции - это молекулярные варианты, образующиеся при производстве и (или) хранении и отличающиеся от целевого продукта по своим свойствам.

При выборе и оптимизации аналитических методик испытания на примеси следует стремиться к отделению целевого продукта и родственных соединений от примесей. Необходимо разработать критерии приемлемости на отдельные примеси и (или) на сумму примесей. В частных случаях критерии приемлемости на некоторые примеси могут не потребоваться (в соответствии с требованиями подраздела 2.3 настоящей главы).

 

4.1.4. Активность (potency).

В спецификации необходимо включить подходящую валидированную методику испытания на активность (в соответствии с требованиями подраздела 2.1.2 настоящей главы) биотехнологических или биологических активных фармацевтической субстанции и (или) лекарственного препарата. Если для испытания на подлинность лекарственного препарата (в соответствии с требованиями подраздела 4.2.4 настоящей главы) используется надлежащая методика, то для количественного определения активной фармацевтической субстанции может быть достаточным альтернативный метод (физико-химический и (или) биологический). В некоторых случаях дополнительную ценность могут представлять результаты определения специфической активности.

 

4.1.5. Количественное содержание (quantity).

Необходимо определить количественное содержание фармацевтической субстанции, основанное, как правило, на содержании (массе) белка, используя надлежащую методику. Определение количественного содержания может осуществляться без стандартного образца или материала. Если производство лекарственного препарата основывается на биологической активности, дополнительное определение количественного содержания в частных случаях не требуется.

 
4.2. Спецификация на лекарственный препарат
 

Следующие испытания и критерии приемлемости в целом применимы ко всем лекарственным препаратам. Каждый подраздел 4.2.1 - 4.2.5 настоящей главы по лекарственному препарату содержит перекрестные ссылки на подразделы 4.1.1 - 4.1.5 настоящей главы по активной фармацевтической субстанции. К соответствующим лекарственным формам применяются фармакопейные требования Союза и государств-членов. К стандартным испытаниям, указанным в фармакопеях, относятся в том числе стерильность, эндотоксины, микробиологическая чистота, извлекаемый объем, механические включения, однородность единиц дозирования, содержание воды (влаги) в лиофилизате. Если применимо, испытание на однородность единиц дозирования допускается проводить в качестве внутрипроизводственного контроля, устанавливая при этом соответствующие критерии приемлемости.

 

4.2.1. Внешний вид и описание.

Необходимо привести качественное описание физического состояния (например, твердое, жидкое), цвета и прозрачности лекарственного препарата.

 

4.2.2. Подлинность.

Испытания на подлинность должны быть высоко специфичными в отношении лекарственного препарата и основываться на уникальных свойствах его молекулярной структуры и (или) иных особенностях. По своей природе испытания на подлинность могут быть качественными. Несмотря на то что в большинстве случаев достаточно одного испытания, для установления подлинности некоторых препаратов необходимо провести несколько испытаний (физико-химических, биологических и (или) иммунохимических). В целях установления подлинности лекарственного препарата допускается использовать и (или) соответствующим образом модифицировать методы, традиционно используемые для описания свойств активной фармацевтической субстанции и указанные в подразделах 2.1 и 6.1 настоящей главы.

 

4.2.3. Чистота и примеси.

При производстве и (или) хранении лекарственного препарата могут образовываться примеси или может увеличиваться их содержание. Примеси могут совпадать с примесями активной фармацевтической субстанции, то есть быть производственными, либо быть продуктами деградации, образующимися исключительно в лекарственном препарате при его приготовлении (формуляции) или хранении. Если качественное и количественное содержание примесей (то есть их относительные количества и (или) концентрации) совпадает с таковым у активной фармацевтической субстанции, включение в спецификацию дополнительных испытаний не требуются. Если известно, что примеси привносятся или образуются при производстве и (или) хранении лекарственного препарата, необходимо определить их содержание и установить критерии их приемлемости.

В целях определения изменений активной фармацевтической субстанции при производстве и (или) хранении лекарственного препарата критерии приемлемости и аналитические методики необходимо разрабатывать и обосновывать с учетом предыдущего опыта изучения лекарственного препарата.

При выборе и оптимизации аналитических методик определения примесей следует стремиться к отделению целевого продукта и родственных соединений от примесей, включая продукты деградации, и вспомогательных веществ.

 

4.2.4. Активность (potency).

В спецификации необходимо включить подходящую валидированную методику испытания на активность (как это указано в подразделе 2.1.2 настоящей главы) биотехнологических или биологических активной фармацевтической субстанции и (или) лекарственного препарата. Если для испытания на подлинность активной фармацевтической субстанции используется надлежащая методика, то для количественного определения лекарственного препарата может быть достаточным альтернативный метод (физико-химический и (или) биологический). Однако необходимо представить обоснование такого выбора.

 

4.2.5. Количественное содержание (quantity).

Необходимо определить количественное содержание активной фармацевтической субстанции в лекарственном препарате, основанное, как правило, на содержании (массе) белка, используя надлежащую методику. Если производство лекарственного препарата основывается на биологической активности, дополнительное определение количественного содержания в частных случаях может не потребоваться.

 

4.2.6. Общие испытания.

Зачастую для оценки функциональных свойств лекарственного препарата необходимо охарактеризовать его физические свойства и определить иные показатели качества лекарственного препарата. Примерами таких испытаний служат pH и осмолярность.

 

4.2.7. Дополнительное испытание уникальных лекарственных форм.

Выпуск лекарственного препарата в определенных лекарственных формах может потребовать проведения дополнительных, связанных с видом такой лекарственной формы испытаний, неупомянутых выше.

 
5. ОПРЕДЕЛЕНИЯ
 

Для целей настоящей главы используются понятия (термины), которые означают следующее:

"активная фармацевтическая субстанция (нерасфасованный материал)" - материал, который впоследствии смешивается со вспомогательными веществами для получения лекарственного препарата. Он может состоять из целевого продукта, родственных соединений и родственных и производственных примесей. Он также может содержать вспомогательные вещества, включая иные компоненты, например, буферные растворы;

"активность" - мера биологической активности, определяемая с помощью подходящей биологической методики количественного определения (также называемой методикой количественного определения активности (potency assay) или биометодикой (bioassay)), основанная на показателе качества продукта, который связан с релевантными биологическими свойствами;

"биологическая активность" - особая способность или свойство препарата оказывать определенный биологический эффект. Количественной мерой биологической активности является активность (potency);

"вспомогательное вещество" - компонент, преднамеренно добавляемый к активной фармацевтической субстанции, который в прибавляемых количествах не должен обладать фармакологическими свойствами;

"контаминанты" - любые привнесенные посторонние материалы (например, химические, биохимические или микробные), не предусмотренные процессом производства активной фармацевтической субстанции или лекарственного препарата;

"критерии приемлемости" - численные пределы, диапазоны и другие подходящие меры приемлемости результатов аналитических методик, которым должны удовлетворять активная фармацевтическая субстанция, лекарственный препарат или материалы других этапов производства;

"лекарственный препарат (лекарственная форма, готовый препарат)" - разновидность фармацевтического продукта, который содержит активную фармацевтическую субстанцию, как правило, в комбинации со вспомогательными веществами;

"предел действий (предел, требующий принятия мер)" - собственное значение, используемое для оценки постоянства процесса производства на менее критических этапах;

"примесь" - любой компонент, содержащийся в активный фармацевтической субстанции или лекарственном препарате, не являющийся целевым продуктом, родственным соединением или вспомогательным веществом, включая буферные компоненты. Различают производственные и родственные примеси;

"продукты деградации" - молекулярные варианты, образующиеся вследствие изменений целевого продукта или родственных соединений со временем и (или) под воздействием, например, света, температуры, pH, влаги, или вследствие взаимодействия со вспомогательным веществом и (или) первичной системой "контейнер - укупорка". Такие изменения могут возникать при производстве и (или) хранении (например, дезаминирование, окисление, агрегация, протеолиз). Продукты деградации могут представлять собой родственные соединения либо родственные примеси;

"производственные примеси" - примеси, образующиеся в процессе производства. Они могут проистекать из клеточных субстратов (например, белки клетки-хозяина, ДНК клетки-хозяина), клеточной культуры (например, индукторы, антибиотики или компоненты питательной среды) или последующей обработки (например, реактивы для обработки или экстрагируемые (вымываемые) из колонки вещества);

"родственные примеси" - молекулярные варианты целевого продукта (например, прекурсоры, некоторые продукты деградации, образующиеся при производстве и (или) хранении), которые не обладают сопоставимыми с целевым продуктом активностью, эффективностью и безопасностью;

"родственные соединения" - молекулярные варианты целевого продукта, образующиеся при производстве и (или) хранении, обладающие активностью и не имеющие негативного влияния на безопасность и эффективность лекарственного препарата. Эти варианты обладают свойствами, сопоставимыми с целевым продуктом, и не рассматриваются в качестве примесей;

"собственный основной стандартный материал" - надлежащим образом охарактеризованный материал, приготовленный производителем из репрезентативных серий в целях проведения биологических методик или физико-химических испытаний последующих серий, по которому также калибруют собственный рабочий стандартный материал;

"собственный рабочий стандартный материал" - материал, приготовленный аналогично основному стандартному материалу и предназначенный исключительно для анализа и контроля отдельных показателей качества последующих серий. Во всех случаях его калибруют по собственному основному стандартному материалу;

"спецификация" - перечень испытаний, ссылок на аналитические методики и соответствующие критерии приемлемости, представляющие собой численные (количественные) пределы, диапазоны и прочие критерии для описанных испытаний. Она задает набор критериев, которым должны соответствовать фармацевтическая субстанция, лекарственный препарат или материалы других этапов производства, чтобы считаться приемлемыми для использования по целевому назначению. "Соответствие спецификациям" - способность фармацевтической субстанции и лекарственного препарата, подвергшихся испытаниям согласно описанным в спецификациях аналитическим методикам, удовлетворять перечисленным в них критериям приемлемости. Спецификации являются ключевыми стандартами качества, которые предлагаются и обосновываются производителем и утверждаются уполномоченным органом в качестве условий регистрации;

"целевой продукт" - 1) белок, обладающий ожидаемой структурой; 2) белок, ожидаемый на основании последовательности ДНК и предполагаемой посттрансляционной модификации (включая гликоформы) и на основании предлагаемой последующей обработки (после культивирования), направленной на получение активной (действующей) биологической молекулы.

 
6. ДОПОЛНЕНИЕ
 
6.1. Характеристика физико-химических свойств
 

Настоящее дополнение содержит указания по техническим подходам, которые позволяют охарактеризовать и подтвердить структуру целевого продукта, активной фармацевтической субстанции и (или) лекарственного препарата и проанализировать их физико-химические свойства. Используемые подходы будут отличаться от препарата к препарату, во многих случаях потребуется придерживаться подходов, не включенных в настоящее дополнение. Непрерывно возникают новые аналитические технологии и модификации ныне существующих. При достаточном обосновании их также следует использовать.

 

6.1.1. Характеристика и подтверждение структуры.

Аминокислотная последовательность. Необходимо, насколько это возможно, установить аминокислотную последовательность целевого продукта, используя подходы, подобно описанным в абзацах втором - пятом настоящего подраздела, и затем сравнить их с аминокислотной последовательностью, которая соответствует нуклеотидной последовательности гена целевого продукта.

Аминокислотный состав. Общий аминокислотный состав определяют, используя различные гидролитические и аналитические методики, и сравнивают с аминокислотной последовательностью, которая соответствует нуклеотидной последовательности гена целевого продукта. Во многих случаях анализ аминокислотного состава позволяет получить определенные ценные сведения о структуре пептидов и небольших белков, однако для больших белков эти данные менее точны. Во многих случаях результаты количественного аминокислотного анализа позволяют установить содержание белка.

Терминальные последовательности аминокислот. Анализ концевых аминокислот проводят для установления природы и однородности амино- и карбси-концевых аминокислот. Если целевой продукт является гетерогенным по концевым аминокислотам, с помощью соответствующей аналитической методики необходимо определить относительное содержание вариантных форм. Последовательность таких концевых аминокислот необходимо сравнить с последовательностью концевых аминокислот, соответствующей нуклеотидной последовательности гена целевого продукта.

Пептидная карта. Избирательная фрагментация препарата на отдельные пептиды осуществляется при помощи подходящих ферментов или химических соединений, а образующиеся пептидные фрагменты подвергаются анализу с помощью ВЭЖХ или иной подходящей аналитической методики. Используя такие методы, как анализ аминокислотного состава, N-концевое секвенирование или масс-спектрометрию, необходимо, насколько это возможно, идентифицировать пептидные фрагменты. Пептидное картирование активной фармацевтической субстанции или лекарственного препарата с помощью должным образом валидированной методики - это метод, часто использующийся для подтверждения структуры целевого продукта в целях выпускающего контроля качества серий.

Сульфгидрильные группы и дисульфидные мостики. Если согласно данным нуклеотидной последовательности гена целевого продукта предполагается наличие остатков цистеина, необходимо по возможности определить количество и положения всех свободных сульфгидрильных групп и (или) дисульфидных мостиков. С этой целью используют пептидное картирование (в восстанавливающих и невосстанавливающих условиях), масс-спектрометрию или иные подходящие технологии.

Углеводная структура. Необходимо определить содержание углеводов в гликопротеинах (нейтральные сахара, аминосахара и сиаловые кислоты). Кроме того, необходимо по возможности проанализировать структуру углеводных цепей, олигосахаридный профиль (профиль ветвления) и участки гликозилирования полипептидной цепи.

 

6.1.2. Физико-химические свойства.

Молекулярная масса или размер. Молекулярную массу или размер определяют с помощью эксклюзионной хроматографии, электрофореза в полиакриламидном геле с натрия додецилсульфатом (в восстанавливающих и (или) невосстанавливающих условиях), масс-спектрометрии и прочих подходящих технологий.

Профиль изоформ. Определяют с помощью изоэлектрического фокусирования или иных подходящих технологий.

Коэффициент экстинкции или молярный коэффициент поглощения. Во многих случаях целесообразно определять коэффициент экстинкции или молярного поглощения целевого продукта при определенной длине волны в ультрафиолетовом (УФ) или видимом спектре (например, 280 нм). Коэффициент экстинкции определяют с помощью УФ-спектрофотометрии (спектрофотометрии) в видимом диапазоне раствора препарата, содержащего известное количество белка, рассчитанного с помощью таких методов, как анализ аминокислотного состава или определение содержания азота и т.д. Если для измерения содержания белка используется УФ-абсорбция, следует использовать коэффициент экстинкции этого препарата.

Электрофоретические профили. Электрофоретические профили, данные о подлинности, однородности и чистоте получают с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, изоэлектрического фокусирования, электрофореза в полиакриламидном геле с натрия додецилсульатом, вестерн-блота, капиллярного электрофореза и прочих подходящих методов.

Профили жидкостной хроматографии. Профили жидкостной хроматографии, данные о подлинности, однородности и чистоте получают с помощью эксклюзионной хроматографии, обращенно-фазной жидкостной хроматографии, ионо-обменной жидкостной хроматографии, аффинной хроматографии и прочих подходящих методов.

Спектроскопические профили. Определяют спектры абсорбции в ультрафиолетовом и видимом диапазонах. Структуры высокого порядка изучают с помощью таких методов, как круговой дихроизм, ядерный магнитный резонанс (ЯМР) или другие подходящие технологии.

 
6.2. Дополнение по примесям
 

В настоящем подразделе указаны потенциальные примеси, их источники и примеры применимых аналитических подходов их обнаружения. Подобно характеристике физико-химических свойств, профиль примесей и использующиеся технические подходы отличаются от препарата к препарату; во многих случаях необходимо придерживаться подходов, не включенных в настоящее приложение. Разработчику лекарственного препарата следует учитывать, что непрерывно возникают новые аналитические технологии и модификации ныне существующих. При достаточном обосновании их также следует использовать.

 

6.2.1. Производственные примеси и контаминанты.

Образуются в ходе процесса производства (пункт 2.1.4 настоящей главы) и делятся на 3 основные категории: проистекающие из клеточного субстрата, клеточной культуры и вследствие последующей обработки.

К проистекающим из клеточного субстрата примесям относятся белки организма-хозяина, нуклеиновая кислота (геномная, векторная или вся ДНК клетки-хозяина), но ими не ограничиваются. Чувствительными к белкам клетки-хозяина методиками являются, например, иммунологические методы, способные обнаруживать широкий диапазон белковых примесей. Поликлональные антитела, используемые в иммунологическом методе, получают путем иммунизации животных препаратом клеток-продуцентов, не содержащих ген, кодирующий целевой продукт, препаратом партнеров гибридизации (фузии) и препаратом иных подходящих клеточных линий. Содержание ДНК клеток хозяина можно определить с помощью прямого анализа препарата (например, с помощью технологий гибридизации). Во избежание установления критериев приемлемости для этих примесей в некоторых случаях подтверждают удаление примесей, проистекающих из клеточного субстрата (например, нуклеиновых кислот и белков клетки-хозяина), для этого прибегают к исследованиям клиренса, которые могут включать в себя лабораторные эксперименты с добавлением таких примесей.

К проистекающим из клеточной культуры примесям относятся индукторы, антибиотики, сыворотка и прочие компоненты питательных сред, но ими не ограничиваются.

К примесям, образующимся при последующей обработке, относятся ферменты, химические и биологические реактивы для обработки (например, бромциан, гуанидин, окисляющие и восстанавливающие вещества), неорганические соли (например, тяжелые металлы, мышьяк, неметаллические ионы), растворители, носители, лиганды (например, моноклональные антитела) и прочие экстрагируемые вещества, но ими не ограничиваются.

Необходимо в соответствии с главой 2 настоящих Правил подтвердить способность процесса производства элиминировать и (или) инактивировать намеренно привнесенные, эндогенные и посторонние вирусы.

 

6.2.2. Родственные примеси, включая продукты деградации.

Ниже представлены наиболее часто встречающиеся варианты целевого продукта и перечень соответствующих технологий их анализа. Указанные варианты могут потребовать значительных усилий для их выделения и характеристики их свойств с целью установления вида модификаций. Используя должным образом установленные критерии приемлемости, необходимо провести испытания и контролировать содержание продуктов деградации, в значительных количествах образующихся при производстве и (или) хранении:

усеченные формы. Гидролитические ферменты и химические вещества могут катализировать разрыв пептидных связей, что можно обнаружить с помощью ВЭЖХ или электрофореза в ПААГ с ДСН. В зависимости от свойств вариантов целевого продукта возможно использование пептидного картирования;

прочие модифицированные формы. Можно выявить дезаминированные, изомеризованные, с нарушенной дисульфидной связью, окисленные или измененные формы конъюгатов (гликозилирование, фосфорилирование) и охарактеризовать их с помощью хроматографических, электрофоретических и (или) других подходящих аналитических методов (например, высокоэффективной жидкостной хроматографии, капиллярного электрофореза, масс-спектроскопии, кругового дихроизма);

агрегаты. К агрегатам относятся димеры и полимеры целевого продукта. Их, как правило, не причисляют к целевому продукту и родственным соединениям и определяют их содержание с помощью подходящих аналитических методик (например, эксклюзионной хроматографии, капиллярного электрофореза).

 
Глава 7
 
ПРИМЕСИ ДНК И БЕЛКОВ КЛЕТКИ-ХОЗЯИНА, СТАНДАРТНЫЕ
ИСПЫТАНИЯ В СРАВНЕНИИ С ВАЛИДАЦИОННЫМИ ИССЛЕДОВАНИЯМИ
 
1. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
 

Биотехнологические препараты, преимущественно рекомбинантные белки, получают с помощью сложной системы экспрессии (производства) с использованием генетически модифицированных клеток (клеток бактерий, дрожжей или млекопитающих). Среди примесей, подлежащих удалению в процессе очистки на конечном этапе производства, 2 компонентами, представляющими наибольший интерес с точки зрения безопасности и переносимости, являются остаточная ДНК клетки-продуцента и остаточные белки клетки-хозяина. С момента регистрации первых рекомбинантных белков применяются разные подходы, основанные преимущественно на разновидностях систем производства, для работы с данными примесями. В качестве стандартного испытания на белки клетки-хозяина независимо от типа получаемого препарата и используемой клеточной системы необходимо определять остаточные белки клетки-хозяина, в то время как исследования остаточной ДНК в качестве стандартного испытания проводят только для препаратов, полученных из перевиваемых клеточных линий млекопитающих.

Необходимо гарантировать, что содержание таких примесей в лекарственном препарате, предназначенном для пациента, снижено до допустимого уровня. Для достижения этой цели следует рассмотреть два подхода:

валидационный подход: выполнить валидацию процесса производства для демонстрации того, что на заданных этапах процесса очистки эти примеси последовательно и воспроизводимо удаляются до тех пор, пока их уровень не станет приемлемым. Основываясь на коэффициентах снижения содержания примесей, можно предсказать и гарантировать остаточный уровень примеси в готовом препарате;

стандартный подход: разработать аналитические методики, позволяющие максимально точно контролировать уровень этих примесей на разных этапах процесса, и установить фиксированное предельное содержание примесей, что позволит надлежащим образом контролировать содержание таких примесей в готовом препарате.

Можно комбинировать эти два подхода, т.е. проводить стандартное испытание на раннем этапе процесса очистки, а валидационное испытание, демонстрирующее уменьшение содержания примесей, проводить на готовом препарате для выявления максимального содержания примесей.

Учитывая возможность применения рекомбинантных белков в международном масштабе, необходимо гармонизировать критерии оценки на международном уровне, чтобы производители могли разрабатывать свои препараты на одних и тех же производственных линиях, независимо от предполагаемых регионов регистрации и вывода препарата на рынок.

 
2. ОСТАТОЧНАЯ ДНК КЛЕТКИ-ПРОДУЦЕНТА
 

В отношении препаратов, полученных с помощью бактерий и дрожжей нет необходимости проводить стандартные испытания при условии, что в готовом препарате не превышены допустимые уровни остаточной ДНК, а в досье представлены достаточные данные по валидации. ДНК из стабильной клеточной линии млекопитающих ранее считалась фактором риска из-за опасений, что остаточная ДНК клетки-хозяина может обладать туморогенным потенциалом. Однако полученная в дальнейшем информация показала, что ДНК из стабильной клеточной линии представляет риск в гораздо меньшей степени, чем предполагалось раньше, и, следовательно, должна относиться к категории общих примесей.

Валидационные испытания (например, эксперименты по внесению заданных количеств примеси с соответствующим распределением фрагментов ДНК по размерам) должны проводиться с целью выявления основных этапов, на которых возможно снижение содержания ДНК, а также для занесения в документацию данных о способности данных этапов снижать содержание остаточной клеточной ДНК в готовом препарате до приемлемого и заданного уровней. В настоящее время методика количественного анализа ДНК подробно описана и обладает воспроизводимостью.

В дополнение к данным валидационных испытаний необходимо представить результаты количественного анализа ДНК для минимального количества производственных серий (например, 5 последовательных серий) с целью демонстрации воспроизводимости процесса производства в отношении снижения содержания остаточной ДНК до уровня, который предполагается получить в ходе валидационных испытаний. Учитывая удовлетворительные данные по валидации и достоверные результаты по ограниченному числу производственных серий, проведение стандартных испытаний для определения содержания ДНК в стабильной клеточной линии на этапе очистки нерасфасованного препарата (на других соответствующих этапах) представляется нецелесообразным.

В некоторых случаях (например, ранее не утвержденные перевиваемые клеточные линии, трансформация последовательностей ДНК вирусными векторами и т.д.) может возникнуть необходимость в применении стандартного контроля удаления ДНК.

Допустимо прекращение проведения стандартных испытаний ДНК для препаратов, выделенных из стабильных клеточных линий и для которых уже получено регистрационное удостоверение. Однако в таком случае необходимо внести официальные изменения в регистрационное досье. Документация с изменениями должна содержать удовлетворительные результаты валидационного испытания наряду с ретроспективными данными, полученными заявителем с момента начала производственного процесса, что подтвердит стабильный уровень содержания остаточной ДНК в ходе процесса.

 

3. ОСТАТОЧНЫЕ БЕЛКИ КЛЕТКИ-ХОЗЯИНА
 

Вопрос об остаточных белках клетки-хозяина затрагивает все системы экспрессии (производства), а не только экспрессионную систему с использованием клеток млекопитающих. Наличие в любых рекомбинантных белках таких примесей требует изучения потенциальной иммуногенности препарата. По этой причине в настоящее время необходимо контролировать содержание остаточных белков клетки-хозяина на этапе очистки нерасфасованного препарата с помощью подходящих методов анализа. Результаты испытаний от серии к серии должны соответствовать друг другу и находиться в установленных спецификацией пределах.

При определении допустимых пределов необходимо помнить, что невозможно установить общее предельное содержание остаточных белков клетки-хозяина для всех биотехнологических препаратов. Действительно, белки клетки-хозяина - примеси, качественная и количественная характеристика которых изменяется от одного препарата к другому и даже от одной системы производства (очистки) к другой. Стандартизация аналитических методов затруднена, поскольку выбор реагентов, используемых в ходе испытаний, зависит от получаемого препарата и системы экспрессии. В отношении остаточных белков клетки-хозяина трудно подобрать материал, обладающий схожими с примесями характеристиками, для использования на определенных этапах процесса или при использовании валидационного подхода (искусственно контаминированный материал).

В большинстве случаев при удалении белков используют хроматографические колонки, для которых избирательность (селективность) и выход методик зависят не только от качества материала, но также и от способа первичного и повторного использования колонок, условий хранения, санитарной обработки и периода их эксплуатации. Валидационный подход не может охватить все эти критические параметры.

В отношении остаточных белков клетки-хозяина валидационный подход применяют только для каждого препарата индивидуально с учетом:

качества аналитической методики, используемой для определения и количественного анализа примесей остаточных белков клетки хозяина;

дизайна и качества валидационных испытаний;

предполагаемого использования препарата (доза, показания, длительность лечения и т.д.).

 
4. ВЫВОД
 

В большинстве случаев валидационный подход считается допустимым способом определения остаточного содержания ДНК клетки-хозяина.

Этот подход не так широко используется в отношении таких примесей, как белки клетки-хозяина, при анализе которых предпочтительно использовать индивидуальный подход для каждого препарата.

Необходимо отметить, что в любом случае нужно периодически проводить оценку процессов и методик анализа для подтверждения того, что при их использовании возможно достичь запланированных результатов.

 

Глава 8
 
ИССЛЕДОВАНИЕ СТАБИЛЬНОСТИ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ
(БИОЛОГИЧЕСКИХ) ПРЕПАРАТОВ
 
1. ВВЕДЕНИЕ
 

Указания, содержащиеся в актах, входящих в право Союза, регламентирующие изучение стабильности лекарственных средств, применяются в целом к биотехнологическим (биологическим) лекарственным препаратам. Тем не менее, биотехнологические (биологические) лекарственные препараты различаются по ряду характеристик, которые необходимо учитывать при составлении программы испытаний, направленной на подтверждение стабильности в течение планируемого срока годности. Для лекарственных препаратов, активными фармацевтическими субстанциями которых обычно являются белки и или полипептиды, поддержание молекулярной конформации, а следовательно, и биологической активности, обусловлено как нековалентными, так и ковалентными связями в молекулах. Эти препараты особенно чувствительны к окружающим факторам, например, к температурным изменениям, окислению, действию света, ионному составу среды и механическим воздействиям. Для сохранения их биологической активности и предотвращения их деградации необходимо соблюдение строгих условий хранения.

Для оценки стабильности могут потребоваться сложные аналитические методики. Испытания на биологическую активность (если их проведение возможно) должны быть частью основных исследований стабильности. Программа оценки стабильности также должна включать в себя соответствующие физико-химические, биохимические и иммунохимические методы анализа молекулярной сущности, а также методы количественного определения продуктов деградации, если чистота и молекулярные характеристики изучаемого препарата позволяют использовать эти методики.

Учитывая все указанное, заявитель должен получить надлежащие данные по стабильности биотехнологического (биологического) лекарственного препарата, учитывающие разнообразные условия окружающей среды, способные повлиять на активность, чистоту и качество. Основные данные, подтверждающие заявляемый срок годности как активной фармацевтической субстанции, так и лекарственного препарата, должны быть основаны на долгосрочных исследованиях стабильности (исследованиях естественного хранения) в реальном времени и реальных условиях. Таким образом, разработка надлежащей программы естественного хранения является критически важным этапом успешной разработки лекарственного препарата. Задача настоящей главы - представить заявителям рекомендации по видам исследований стабильности, результаты которых следует включить в регистрационное досье биологических лекарственных препаратов. В процессе экспертизы полученных сведений первичные данные по стабильности могут обновляться.

 
2. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
 

Изложенные в настоящей главе положения распространяются на хорошо охарактеризованные белки и полипептиды, их производные и препараты, в состав которых они входят. Такие белки и полипептиды должны быть выделены из тканей, жидких сред организма, культур клеток или произведены с использованием технологии рекомбинантной ДНК. Таким образом, в настоящей главе описывается получение данных и представление результатов иозучения стабильности таких биотехнологических (биологических) препаратов, как цитокины (интерфероны, интерлейкины, колониестимулирующие факторы, факторы некроза опухоли), эритропоэтины, активаторы плазминогена, плазменные факторы свертывания крови, гормоны роста и факторы роста, инсулины, моноклональные антитела и вакцины, состоящие из хорошо охарактеризованных белков или полипептидов. Кроме того, представленные ниже требования могут распространяться на другие типы лекарственных препаратов, например, традиционные вакцины, если это указано в специальных главах настоящих Правил или актах, входящих в право Союза. Рекомендации настоящей главы не распространяются на антибиотики, экстракты аллергенов, гепарины, витамины, цельную кровь или клеточные компоненты крови.

 
3. ТЕРМИНОЛОГИЯ
 

Для целей настоящей главы используются понятия (термины), в значениях, установленных актами, входящими в право Союза и регламентирующими изучение стабильности лекарственных препаратов. Поскольку производители биотехнологических (биологических) препаратов используют также традиционную терминологию, в скобках приведены соответствующие традиционные термины.

 
4. ВЫБОР СЕРИЙ
 
4.1. Активная фармацевтическая субстанция
(нерасфасованный материал)
 

При необходимости хранения нерасфасованного материала после его наработки до изготовления лекарственных форм и заключительных этапов производства требуется представить данные о стабильности по меньшей мере 3 серий, условия производства и хранения которых отражают условия промышленного масштаба. При необходимости хранения более 6 месяцев следует в первичное регистрационное досье включить результаты испытаний стабильности продолжительностью не менее 6 месяцев. Для активных фармацевтических субстанций с периодами хранения менее 6 месяцев минимальный объем данных по стабильности на момент первоначальной подачи регистрационного досье определяется в индивидуальном порядке. При подаче регистрационного досье допускается представление данных по опытно-промышленным сериям активной фармацевтической субстанции, произведенным с уменьшенным масштабом ферментации и очистки, при этом заявитель должен взять на себя обязательство о включении в программу долгосрочной оценки стабильности первых трех серий промышленного масштаба после получения регистрационного удостоверения.

Качество серий активной фармацевтической субстанции, предназначенных для программы изучения стабильности, должно отражать качество материала, изученного в доклинических и клинических исследованиях, а также качество материала, который будет производиться в промышленном масштабе. Кроме того, активная фармацевтическая субстанция (нерасфасованный материал), полученная в рамках опытно-промышленного производства, должна быть произведена с использованием процесса и условий хранения, отражающих условия промышленного масштаба. Активная фармацевтическая субстанция, включенная в программу изучения стабильности, должна храниться в контейнерах (упаковке), соответствующих по свойствам контейнерам (упаковке), которые будут использоваться для хранения при промышленном производстве. При изучении стабильности активной фармацевтической субстанции допускается использование контейнеров меньшего объема, если они произведены из аналогичного материала и с помощью той же системы "контейнер - укупорка", которые будут использоваться в промышленном производстве.

 

4.2. Промежуточные продукты
 

В процессе производства биотехнологических (биологических) препаратов качество и контроль качества определенных промежуточных продуктов могут быть критически важны для получения лекарственного препарата. В целом производитель должен идентифицировать промежуточные продукты и разработать собственные критерии и производственные ограничения, обеспечивающие их стабильность в рамках разработанного процесса. Несмотря на допустимость использования данных, полученных в опытно-промышленном масштабе, производитель должен подтвердить возможность экстраполяции полученных результатов на промышленный масштаб.

 

4.3. Лекарственный препарат (готовая лекарственная
форма в первичной упаковке)
 

Данные по стабильности следует представить, по меньшей мере, для 3 серий лекарственного препарата в первичной упаковке, соответствующего по свойствам тому препарату, который будет производиться в промышленном масштабе. По возможности серии лекарственного препарата в первичной упаковке, отобранные для изучения стабильности, необходимо произвести из разных серий активной фармацевтической субстанции. Если при регистрации заявленный срок годности превышает 6 месяцев, в регистрационное досье необходимо включить результаты изучения стабильности в течение не менее 6 месяцев. Для лекарственных препаратов со сроком годности менее 6 месяцев минимальный объем данных по стабильности при первичной подаче регистрационного досье определяется в индивидуальном порядке. Дата истечения срока годности лекарственного препарата будет установлена на основании фактических сведений, содержащихся в регистрационном досье. Поскольку срок годности препарата устанавливают на основании исследований, проведенных в реальном времени и при реальной температуре, в процессе экспертизы следует обновлять первоначальные данные по стабильности. Качество препарата в первичной упаковке, включенного в исследования стабильности, должно соответствовать качеству материала, изученного в доклинических и клинических исследованиях. На момент подачи регистрационного досье могут быть представлены данные по сериям лекарственного препарата, полученным в опытно-промышленных масштабах, при этом заявитель должен взять на себя обязательство по выполнению программы изучения долгосрочной стабильности 3 первых серий промышленного масштаба после получения регистрационного удостоверения. Если для установления срока годности препарата были представлены результаты испытания опытно-промышленных серий и препарат, произведенный в промышленном масштабе, не выдерживает спецификации на долгосрочную стабильность, составленную по результатам хранения опытно-промышленных серий, или не отражает свойства материала, изученного в доклинических и клинических исследованиях, заявитель в целях определения дальнейшей тактики должен уведомить об этом уполномоченные органы.

 
4.4. Отбор проб
 

Если один препарат реализуется в сериях, различающихся по номинальному объему (например, 1 мл, 2 мл или 10 мл), дозировке (например, 10, 20 и 50 ЕД) или массе (например, 1 мг, 2 мг или 5 мг), пробы для включения в программу оценки стабильности могут быть выбраны на основе матричного метода и (или) в исследовании крайних вариантов (брекетинг).

Матричный метод - статистический план изучения стабильности, при котором в определенный момент времени исследуется лишь подгруппа из общего числа проб всех комбинаций факторов, подлежащих испытанию. Его допускается использовать лишь в том случае, если представлено должное обоснование, подтверждающее, что стабильность испытуемых проб отражает стабильность всех проб. К различиям проб одного и того же препарата относится, например, охват различных серий, дозировок, размеров одной и той же системы "контейнер - укупорка" и, возможно, материалов системы "контейнер - укупорка". Если отсутствует обоснование, подтверждающее, что серии в одинаковых условиях ведут себя сходным образом, не допускается применять матричный метод к пробам, различия между которыми могут повлиять на стабильность, например, к различным дозировкам и контейнерам.

Если для трех номинальных объемов или более используется одинаковая дозировка и та же система "контейнер - укупорка", производитель вправе включить в программу лишь наименьший и наибольший размеры контейнера, то есть провести исследование крайних вариантов. План исследования крайних вариантов предполагает, что стабильность крайних вариантов отражает стабильность промежуточных вариантов. В некоторых случаях необходимо представить данные, подтверждающие, что полученные данные отражают свойства всех проб.

 
5. ПРОФИЛЬ, СВИДЕТЕЛЬСТВУЮЩИЙ О СТАБИЛЬНОСТИ
 

Универсальной методики или универсального перечня показателей, отражающего стабильность биотехнологического (биологического) средства, не существует. В связи с этим производитель должен разработать перечень показателей стабильности, обеспечивающий обнаружение изменений подлинности, чистоты и активности препарата.

На момент подачи регистрационного досье заявители должны располагать валидированными методами, составляющими профиль, свидетельствующий о стабильности, и данными для целей экспертизы. Перечень испытаний зависит от свойств препарата. Описанный ниже перечень не является исчерпывающим, но он отражает характеристики препарата, которые, как правило, необходимо документировать в целях надлежащего подтверждения его стабильности.

 
5.1. Протокол
 

В состав досье на регистрацию необходимо включить подробный протокол изучения стабильности как активной фармацевтической субстанции, так и лекарственного препарата. На основе этого протокола будут установлены условия хранения и срок годности. Протокол должен включать в себя всю необходимую информацию, подтверждающую стабильность биотехнологического (биологического) препарата в течение всего предлагаемого срока годности, включая, например, должным образом составленные спецификации и интервалы испытаний. Статистические методы, которые следует применять при подготовке документации, должны соответствовать требованиям актов, входящих в право Союза и регламентирующих изучение стабильности лекарственных средств.

 
5.2. Активность
 

Если предусмотренное применение лекарственного препарата связано с охарактеризованной и определяемой биологической активностью, испытание на активность должно стать частью исследований стабильности. В целях испытания стабильности продуктов, указанных в настоящей главе, под активностью понимаются определенная способность или свойство препарата оказывать планируемый эффект. Испытание основано на измерении некоторого показателя качества препарата и определяется подходящим количественным методом. Активность биотехнологических (биологических) препаратов, в целом испытанная различными лабораториями, может быть сопоставлена, если она нормирована по надлежащему стандартному материалу. С этой целью в методику необходимо включить стандартный материал, напрямую или косвенно калиброванный по соответствующему национальному или международному стандартному материалу.

Испытания на активность необходимо проводить через определенные интервалы, указанные в протоколе исследования стабильности, а результаты представлять в единицах биологической активности, калиброванных по возможности по национальному или международному стандарту. Если национальные и международные стандартные образцы отсутствуют, результаты исследования допускается выражать в самостоятельно разработанных единицах с использованием хорошо охарактеризованного стандартного материала.

Активность некоторых биотехнологических (биологических) препаратов зависит от конъюгации активных фармацевтических субстанций с другим соединением или связывания с адъювантом. Диссоциацию активных фармацевтических субстанций от носителя, используемого в качестве конъюгата или адъюванта, необходимо изучить в исследованиях реального времени при реальной температуре (включая условия транспортировки). Оценить стабильность таких препаратов бывает затруднительно, поскольку в некоторых случаях испытания in vitro на биологическую активность и для установления физико-химических свойств непрактичны или дают неточные результаты. В целях преодоления недостатков испытаний in vitro необходимо разработать надлежащие стратегии (например, испытание продукта до конъюгации (связывания), исследование высвобождения активной фармацевтической субстанции из связи с другим соединением, методики in vivo) или использовать подходящее суррогатное испытание.

 
5.3. Характеристики чистоты и молекулярных свойств
 

В целях испытания стабильности препаратов, описанных в настоящей главе, чистота - понятие относительное. Ввиду влияния гликозилирования, дезаминирования и других гетерогенностей определить абсолютную чистоту биотехнологического (биологического) препарата крайне сложно. В связи с этим чистоту биотехнологического (биологического) препарата необходимо, как правило, определять с помощью не менее двух методов. Получаемые значения чистоты зависят от выбранного метода. В целях испытания стабильности при испытании на чистоту необходимо основывать подтверждение качества на методах обнаружения продуктов деградации.

По возможности необходимо документировать и представить отчеты о степени чистоты, а также о содержании в биотехнологическом (биологическом) препарате, включенном в исследование стабильности, отдельных продуктов деградации и их суммы. Допустимые предельные содержания продуктов деградации необходимо выработать на основании аналитического профиля серий активной фармацевтической субстанции и лекарственного препарата, использованных в доклинических и клинических исследованиях.

Используя соответствующую физико-химическую, биохимическую и иммунохимическую аналитическую методологию, необходимо всесторонне охарактеризовать свойства активной фармацевтической субстанции и (или) лекарственного препарата (например, молекулярную массу, заряд, гидрофобность), а также точно установить изменения, обусловленные деградацией, вследствие дезаминирования, окисления, сульфоксилирования, агрегации или фрагментации при хранении. Примерами таких методов являются электрофорез (электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН-ПААГ), иммуноэлектрофорез, вестерн-блот, изоэлектрическое фокусирование), хроматография с высокой разрешающей способностью (например, обращенно-фазная хроматография, гель-фильтрация, ионный обмен, аффинная хроматография) и пептидное картирование.

Если по результатам естественного, ускоренного хранения и (или) стресс-исследований стабильности обнаруживаются значимые качественные или количественные изменения, свидетельствующие об образовании продукта деградации, следует проанализировать его потенциальную опасность и оценить необходимость установления характеристик продуктов деградации и их количественного определения в рамках программы естественного хранения. Необходимо представить и обосновать допустимые пределы, учитывая содержание продуктов деградации в материале, использованном в доклинических и клинических исследованиях.

В отношении веществ, свойства которых охарактеризовать надлежащим образом невозможно, и лекарственных препаратов, чистоту которых невозможно определить с помощью стандартных аналитических методов, заявитель обязан предложить альтернативные аналитические методики и обосновать их.

 
5.4. Прочие характеристики препаратов
 

Необходимо отслеживать и представлять результаты испытаний следующих характеристик (которые не являются присущими исключительно биотехнологическим (биологическим) препаратам) лекарственного препарата, заключенного в окончательную первичную упаковку: внешний вид (цвет и мутность раствора (суспензии); цвет, консистенция и время растворения порошков), видимые включения в растворах или после восстановления порошков и лиофилизатов, pH и влажность порошков и лиофилизатов.

Необходимо по меньшей мере в начале и конце предлагаемого срока годности провести испытания на стерильность или альтернативные испытания (например, испытание целостности системы "контейнер - укупорка").

В течение срока годности лекарственного препарата добавки (например, стабилизаторы, консерванты) и другие вспомогательные вещества могут подвергаться деградации. Если по результатам предварительных исследований стабильности обнаруживаются признаки реакции или деградации материалов, негативно влияющих на качество лекарственного препарата, может возникнуть необходимость контроля указанных показателей в рамках программы изучения стабильности.

Система "контейнер - укупорка" может негативно сказаться на качестве продукта и требует тщательного оценки (как это указано ниже).

 
6. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ
 
6.1. Температура
 

Поскольку большинство готовых биотехнологических (биологических) лекарственных препаратов подлежит хранению при строго заданной температуре, условия хранения в исследованиях стабильности в реальном времени при реальной температуре могут быть ограничены такой температурой хранения.

 
6.2. Влажность
 

Биотехнологические (биологические) препараты, как правило, выпускаются в контейнерах, защищающих их от влаги. В связи с этим, если подтверждено, что предлагаемый контейнер (и условия хранения) обеспечивает достаточную защиту от высокой и низкой влажности, изучение стабильности при различной относительной влажности, как правило, не требуется. Если влагоустойчивые контейнеры не используются, необходимо представить соответствующие данные по стабильности.

 
6.3. Ускоренные и стресс-условия
 

Срок годности необходимо определять на основании исследований в реальном времени при реальной температуре. В то же время настоятельно рекомендуется проведение исследований активной фармацевтической субстанции и лекарственного препарата в ускоренных и стресс-условиях. При определении срока годности результаты ускоренного хранения могут послужить источником ценных вспомогательных данных для установления даты истечения срока годности, служить источником данных по стабильности для целей дальнейшей разработки (например, предварительной оценки предлагаемых изменений процесса производства, таких как изменение состава (формуляции), укрупнение), содействия в валидации аналитических методик для использования в программе изучения стабильности и наработки данных, позволяющих установить профиль деградации активной фармацевтической субстанции или лекарственного препарата. Исследования в стресс-условиях позволяют определить, насколько пагубно влияет на лекарственный препарат случайное воздействие условий, отличных от предлагаемых для хранения (например, при транспортировке), а также выявить определенные испытуемые показатели качества, наилучшим образом отражающие стабильность препарата. Испытания активной фармацевтической субстанции и лекарственного препарата, помещенных в экстремальные условия, могут способствовать выявлению механизмов деградации; если таковая обнаруживается, то необходимо осуществлять контроль возможных изменений при хранении в предлагаемых условиях. Несмотря на то что в актах, входящих в право Союза, и регламентирующих изучение стабильности лекарственных средств, описаны требования к исследованию в ускоренных и стресс-условиях, заявителю необходимо учитывать, что они могут не подходить для биотехнологических (биологических) лекарственных препаратов. В связи с этим условия необходимо тщательно подбирать в индивидуальном порядке.

 
6.4. Свет
 

За получением рекомендаций по проведению испытаний заявителям необходимо обращаться в соответствующие уполномоченные органы в индивидуальном порядке.

 
6.5. Система "контейнер - укупорка"
 

Ввиду взаимодействия биотехнологического (биологического) лекарственного препарата с его системой "контейнер - укупорка" возможно изменение его качества. Поскольку для жидких лекарственных препаратов такое взаимодействие не исключается (за исключением запаянных ампул), в целях определения влияния укупорки на качество лекарственного препарата в исследование стабильности необходимо включить пробы, которые следует расположить в перевернутом или горизонтальном положении (то есть в контакте с укупоркой), а также в вертикальном положении. Необходимо представить данные для всех возможных комбинаций систем "контейнер - укупорка", которые предполагается выпускать на рынок Союза.

В дополнение к стандартным данным, необходимым для обычного флакона для однократного использования, заявитель должен подтвердить, что укупорка, используемая во флаконе, содержащем несколько доз, способна выдержать условия многократных введений и извлечений, обеспечивая сохранение полной активности, чистоты и качества лекарственного препарата на максимальный срок, указанный в инструкциях по применению на контейнерах, упаковках и (или) в листках-вкладышах. Такая информация о лекарственном препарате должна соответствовать требованиям к инструкции по медицинскому применению лекарственных средств и общей характеристике лекарственного препарата для медицинского применения Союза, утверждаемым Комиссией.

 

6.6. Стабильность восстановленного лиофилизированного
лекарственного препарата
 

Необходимо подтвердить стабильность лиофилизированных лекарственных препаратов после их восстановления в условиях и при максимальном периоде хранения, указанных в инструкциях по использованию на контейнерах, упаковках и (или) в листках-вкладышах. Такая информация о лекарственном препарате должна соответствовать Требованиям к инструкции по медицинскому применению лекарственных средств и общей характеристике лекарственного препарата для медицинского применения Союза.

 
7. ЧАСТОТА ИСПЫТАНИЙ
 

Срок годности биотехнологических (биологических) лекарственных препаратов составляет от нескольких дней до нескольких лет. В связи с этим сложно составить универсальные рекомендации по продолжительности исследования стабильности и частоте испытаний, которые были бы справедливы для всех видов биотехнологических (биологических) лекарственных препаратов. Тем не менее за редким исключением сроки годности одобренных и потенциальных будущих лекарственных препаратов попадают в диапазон от полугода до 5 лет. Поэтому указанные ниже принципы ориентированы на срок годности, укладывающийся в этот диапазон. Данный подход учитывает тот факт, что деградация биотехнологических (биологических) лекарственных препаратов может протекать под влиянием одних и тех же факторов в течение различных интервалов долгосрочного хранения.

Если предлагаемый срок годности менее 1 года, исследования стабильности в реальных условиях в первые 3 месяца необходимо проводить ежемесячно, далее - каждые 3 месяца.

Если предлагаемый срок годности более 1 года, то исследования необходимо проводить каждые 3 месяца в течение первого года, каждые 6 месяцев - в течение второго года, далее - ежегодно.

Несмотря на то что указанные выше интервалы испытаний подходят для предрегистрационного этапа, при наличии данных, подтверждающих требуемую стабильность, после получения регистрационного удостоверения допускается сократить частоту испытаний. Если данные подтверждают, что стабильность лекарственного препарата не снижается, заявителю рекомендуется представить протокол, обосновывающий исключение определенных интервалов испытаний (например, на сроке 9 месяцев) в рамках пострегистрационных долгосрочных исследований.

 
8. СПЕЦИФИКАЦИИ
 

Несмотря на то что биотехнологические (биологические) лекарственные препараты могут претерпевать значительное снижение активности, физико-химические изменения или деградацию при хранении, в международных и национальных правилах содержится недостаточно рекомендаций по составлению различающихся спецификаций на выпуск и конец срока годности (обращение). Рекомендации по максимально допустимому снижению активности, предельным физико-химическим изменениям и деградации в рамках предлагаемого срока годности для отдельных видов и групп биотехнологических (биологических) лекарственных препаратов не составлялись, поэтому их рассматривают в индивидуальном порядке. Каждый продукт должен соответствовать своим спецификациям в пределах, установленных для безопасности, чистоты и активности на протяжении всего предлагаемого срока годности. Указанные спецификации и пределы необходимо устанавливать на основании всей доступной информации, используя необходимые статистические методы. Использование различающихся спецификаций на выпуск и конец срока годности (обращение) необходимо обосновать достаточным объемом данных, подтверждающих, что клинические свойства не ухудшаются, как указано в требованиях актов, входящих в право Союза и регламентирующих изучение стабильности лекарственных средств.

 
9. ИНФОРМАЦИЯ О ПРЕПАРАТЕ
 

Большинство биотехнологических (биологических) активных фармацевтических субстанций и лекарственных препаратов рекомендуется хранить при строго заданных температурах. Необходимо предусмотреть специальные указания, особенно для активных фармацевтических субстанций и лекарственных препаратов, не выдерживающих замораживание. Такие условия и, в соответствующих случаях, рекомендации по защите от света и (или) влажности, необходимо указывать на контейнерах, упаковках и (или) в инструкциях по медицинскому применению (листках-вкладышах). Такая информация о препарате должна соответствовать требованиям к инструкции по медицинскому применению лекарственных средств и общей характеристике лекарственного препарата для медицинского применения, утверждаемым Комиссией.

 
10. ОПРЕДЕЛЕНИЯ
 

Для целей настоящей главы используются понятия (термины), которые означают следующее:

"конъюгат" - состоит из активной фармацевтической субстанции (например, пептида или углевода), ковалентно или нековалентно связанного с носителем (например, белком, пептидом или неорганическим минералом) в целях улучшения эффективности или стабильности лекарственного препарата;

"опытно-промышленное производство" - производство активной фармацевтической субстанции или лекарственного препарата с помощью процедуры, полностью отражающей и повторяющей таковую при промышленном производстве. Методы культивирования клеток, сбора и очистки должны совпадать, за исключением масштаба производства;

"примесь" - любой компонент активной фармацевтической субстанции или лекарственного препарата, который не является активной фармацевтической субстанцией, вспомогательным веществом или иной добавкой лекарственного препарата;

"продукт деградации" - молекула, образующаяся вследствие изменения со временем активной фармацевтической субстанции. В целях испытания стабильности препаратов, указанных в настоящей главе, такие изменения могут возникать вследствие обработки или хранения (например, при дезаминировании, окислении, агрегации или протеолиза). Некоторые продукты деградации биотехнологических (биологических) препаратов могут обладать активностью;

"промежуточный продукт" - в отношении биотехологического (биологического) препарата - материал, получаемый в ходе процесса производства, который не является активной фармацевтической субстанцией или лекарственным препаратом, но производство которого необходимо для успешного получения активной фармацевтической субстанции или лекарственного препарата. Промежуточный продукт в целом поддается количественному определению и для него разрабатывается спецификация, позволяющая до продолжения производственного процесса определить успешность предыдущего этапа производства. К ним относятся материалы, которые могут подвергаться дальнейшей молекулярной модификации или храниться в течение определенного времени до дальнейшей обработки;

"промышленное производство - производство в масштабе, как правило, на оборудовании, предназначенном для производства лекарственного препарата, выпускаемого на рынок Союза.

 

Глава 9.1
 
СОПОСТАВИМОСТЬ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА
БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ (БИОЛОГИЧЕСКИХ) ПРЕПАРАТОВ ПРИ ВНЕСЕНИИ
ИЗМЕНЕНИЙ В ПРОИЗВОДСТВЕННЫЙ ПРОЦЕСС
 
1. ВВЕДЕНИЕ
 
1.1. Цели
 

В настоящей главе представлены основные принципы оценки сопоставимости биотехнологических (биологических) продуктов (под которыми подразумевается промежуточный продукт, фармацевтическая субстанция и лекарственный препарат), полученных до и после внесения изменений в производственный процесс (под которым подразумеваются производственный процесс, производственные мощности (помещения) и оборудование, которые могут повлиять на критические параметры обработки и, таким образом, на качество) получения действующего вещества или готовой формы лекарственного препарата. Настоящая глава содержит указания по сбору информации, необходимой для подтверждения того, что изменения производственного процесса не окажут негативного влияния на показатели качества, безопасности и эффективности биотехнологического (биологического) продукта. Глава не предписывает конкретные аналитические, доклинические и клинические стратегии, основное внимание уделено вопросам качества.

 
1.2. Общие указания
 

Производители (в том числе третья сторона, имеющая соглашение (договор) на производство промежуточных продуктов, активной фармацевтической субстанции или лекарственного препарата от имени держателя регистрационного удостоверения (разработчика - если лекарственный препарат не зарегистрирован)) биотехнологических (биологических) продуктов как правило в процессе разработки и после регистрации лекарственного препарата вносят изменения в производственный процесс биотехнологического (биологического) продукта. Изменения в производственный процесс вносятся с целью совершенствования технологического процесса, масштабирования производства, повышения стабильности продукта и при изменении регуляторных требований к производственному процессу. При внесении изменений в производственный процесс производитель, как правило, должен оценить соответствующие показатели качества и подтвердить, что вносимые изменения не оказывают негативного влияния на показатели безопасности и эффективности продукта. Если результаты исследований сопоставимости свидетельствуют о том, что улучшенные качества приводит к значимому повышению эффективности и (или) безопасности, препарат до и после изменений может оказаться несопоставимым, однако такие результаты могут рассматриваться как приемлемые. Производителям рекомендуется обратиться, в данном случае, за консультацией в уполномоченный орган (организацию). На основании данных исследований делается заключение о необходимости проведения подтверждающих доклинических и клинических исследований.

 
1.3. Сфера применения
 

Настоящая глава, взаимосвязана с другими главами настоящих Правил и содержит описание дополнительных подходов, посвященных:

сравнению продукта до и после внесения изменения в производственный процесс,

оценке влияния изучаемых различий по показателям качества, обусловленных изменением технологического процесса продукта, на показатели безопасности и эффективности продукта.

Представленные в настоящей главе требования распространяются на все нижеуказанные продукты и процессы:

белки и полипептиды, их производные, а также продукты, в которых они являются компонентами, например, конъюгаты. Белки и полипептиды могут быть получены с помощью рекомбинантных и нерекомбинантных экспрессирующих систем, хорошо поддаются очистке и установлению характеристик с использованием соответствующего набора аналитических методик;

производственный процесс, изменения в котором сделаны одним производителем (включая контрактных производителей), который может прямо провести сравнение результатов испытаний продукта, полученных до и после внесения изменения в производственный процесс;

продукты, которые находятся в процессе разработки, и зарегистрированные лекарственные препараты.

Указанные в настоящей главе требования применимы к другим типам биологических лекарственных препаратов, например, белкам или полипептидам, выделенным из тканей и жидкостей организма. При этом производителю рекомендуется проконсультироваться с уполномоченным органом государства-члена.

 
1.4. Основные принципы
 

Целью исследований сопоставимости является обеспечение качества, безопасности и эффективности продукта, полученного с измененным процессом производства, за счет сбора и анализа соответствующих данных, направленных на выявление любого неблагоприятного влияния на продукт, обусловленного внесенными изменениями.

Подтверждение сопоставимости необязательно должно выражаться в идентичности показателей качества продукта до и после внесения изменений, однако они должны быть высоко сопоставимы, а текущие знания должны позволять провести достаточное прогнозирование возможности обеспечения отсутствия нежелательного влияния на безопасность и эффективность лекарственного препарата.

Определение сопоставимости основывается на результатах аналитических и биологических испытаний и в некоторых случаях на данных доклинических и клинических исследований. Если производителем представлены убедительные доказательства сопоставимости на основании аналитических исследований, проведение доклинических и клинических исследований с продуктом, полученным после внесения изменений, не требуется. Однако если зависимость безопасности и эффективности от отдельных показателей качества не установлена и выявлены различия в показателях качества продукта до и после внесения изменений, в программу подтверждения сопоставимости необходимо включить совокупность сравнительных испытаний качества, доклинических и (или) клинических исследований.

Для оценки влияния изменений производственного процесса необходимо провести анализ всех потенциальных последствий для продукта. С учетом данной оценки необходимо установить критерии определения высокой сопоставимости измененного продукта. Проводится сбор и анализ всех данных, касающихся продуктов, полученных до и после внесения изменений, в том числе таких как результаты рутинного контроля качества серий, внутрипроизводственного контроля, валидации (оценки) процесса производства, установления характеристик и оценки стабильности (если применимо). Сравнение полученных результатов с заранее определенными критериями должно позволить получить объективную оценку сопоставимости продуктов, полученных до и после внесения изменений в производственный процесс.

Результаты сравнительной оценки показателей качества позволяют сделать один из следующих выводов:

продукты, полученные до и после изменения высоко сопоставимы по показателям качества, то есть отрицательного влияния на профили безопасности и эффективности не предвидится;

продукты, полученные до и после внесения изменений в производственный процесс, высоко сопоставимы, но используемых для сравнения аналитических методик недостаточно, чтобы выявить различия, которые могут повлиять на безопасность и эффективность продукта. Для получения окончательного вывода производитель должен рассмотреть вопрос о проведении дополнительных исследований (например, дополнительная оценка по показателям качества) или доклинических и клинических исследований;

продукты, полученные до и после внесения изменений, высоко сопоставимы между собой, однако выявляются некоторые различия между ними по показателям качества. При этом представлено обоснование (на основании накопленного опыта, соответствующей информации и данных) того, что данные различия не оказывают отрицательного влияния на безопасность и эффективность продукта. В данной ситуации продукты, полученные до и после внесения изменений, сопоставимы;

продукты, полученные до и после внесения изменений, сопоставимы между собой, но выявлены некоторые различия между ними по показателям качества и имеется опасение о неблагоприятном влиянии изменений на профили безопасности и эффективности. В данной ситуации дополнительный сбор информации по показателям качества не позволяет получить положительное заключение о сопоставимости. Необходимо рассмотреть вопрос о проведении доклинических и клинических исследований;

показатели качества исследуемых продуктов различаются значительно, это не позволяет признать продукты до и после внесения изменений высоко сопоставимыми. Требования, изложенные в настоящей главе, на такие случаи не распространяются.

 
2. ОСНОВНЫЕ ТРЕБОВАНИЯ
 
2.1. Принципы исследования сопоставимости
 

Основной целью исследований сопоставимости является подтверждение высокой сопоставимости продуктов, полученных до и после внесения изменений, по показателям качества, безопасности и эффективности. Для достижения данной цели продукт должен быть изучен на той стадии процесса, которая является наиболее подходящей для обнаружения изменения показателей качества. Поэтому может потребоваться проведение исследований на разных стадиях производства. Например, если изменение затронуло процесс производства активной фармацевтической субстанции и могло повлиять на качество лекарственного препарата, для оценки сопоставимости целесообразно собрать данные как об активной фармацевтической субстанции, так и о лекарственном препарате. Сопоставимость может быть установлена на основании испытаний показателей качества (ограниченных или полных), но иногда могут потребоваться дополнительные связующие исследования сопоставимости. Объем исследований сопоставимости зависит от следующих факторов:

стадия производства, на которой внесены изменения;

потенциальное влияние внесенных изменений на чистоту, физико-химические и биологические свойства с учетом сложности и степени изученности продукта (например, примеси, родственные соединения);

доступность аналитических методик, позволяющих обнаружить потенциальные изменения характеристик, и результаты этих исследований;

зависимость между показателями качества, безопасностью и эффективностью, исходя из доклинического и клинического опыта.

Для оценки сопоставимости необходимо провести анализ следующих данных (перечень не является исчерпывающим):

физико-химические и биологические свойства, полученные при установлении характеристик по показателям качества продукта;

результаты анализа проб, взятых на разных стадиях производства (промежуточный продукт, активная фармацевтическая субстанция, лекарственный препарат);

необходимость данных по стабильности, в том числе данных полученных по результатам ускоренного хранения или стресс-стабильности, чтобы охарактеризовать потенциальные различия между путями деградации продукта и, как следствие, потенциальные различия между родственными соединениями и родственными примесями;

серии, использованные для подтверждения постоянства производственного процесса;

ранее полученные данные, позволяющие охарактеризовать потенциальный дрейф (устойчивое во времени непрерывное изменение показателя, подтвержденное результатами статистического или графического анализа временного ряда) показателей качества с точки зрения безопасности и эффективности после единичного изменения либо серии изменений процесса производства. То есть производитель обязан изучить влияние ряда изменений во времени, чтобы подтвердить, что неприемлемого влияния на профили безопасности и эффективности не произошло.

При оценке полученных данных необходимо также учитывать следующее:

критические контрольные точки производственного процесса, неблагоприятно влияющие на характеристики продукта, например, влияние изменения процесса производства на качество внутрипроизводственных материалов, а также возможность использования материала, полученного после изменения процесса культивирования клеток, на последующих этапах;

адекватность внутрипроизводственного контроля, включая критические контрольные точки и внутрипроизводственные испытания: в целях поддержания качества продукта необходимо подтвердить, модифицировать или создать внутрипроизводственные контрольные точки измененного процесса производства;

доклинические и клинические характеристики лекарственного препарата, а также его показания к применению (в соответствии с требованиями подраздела 2.5 настоящей главы).

 
2.2. Вопросы качества
 

2.2.1. Аналитические подходы.

Аналитические методы при исследовании сопоставимости необходимо тщательно подобрать и оптимизировать по отношению к продукту для того, чтобы обеспечить максимальную возможность выявления значимых различий в показателях качества, являющихся следствием вносимых изменений в процесс производства. Для того чтобы достаточно полно оценить физико-химические, иммунохимические свойства и биологическую активность продукта, может потребоваться несколько аналитических методик для исследования одного и того же показателя (например, молекулярной массы, примесей, вторичной и (или) третичной структуры белка). В таких случаях методы должны быть основаны на разных физико-химических или биологических принципах, чтобы обеспечить максимальную возможность для выявления различий между продуктами, обусловленных изменением процесса производства.

В некоторых случаях в силу ограничений таких методик (например, прецизионности, специфичности и предела обнаружения) и сложности некоторых продуктов, обусловленной их молекулярной гетерогенностью, достаточно затруднительно обеспечить обнаружение модификации продукта с помощью набора аналитических методик, выбранного для такого продукта до внесения изменения.

Производитель должен установить:

пригодны ли существующие испытания для их целевого назначения или их необходимо модифицировать. Например, если изменение процесса производства приводит к образованию другого профиля белков клеток хозяина, производители обязаны подтвердить, что испытание, использованное для количественного определения таких примесей, все еще пригодно для его целевого назначения. В данном случае целесообразно модифицировать существующее испытание;

необходимость добавления новых испытаний вследствие изменений показателей качества, которые имеющиеся методики не способны определить. Таким образом, если при внесении изменений в производственный процесс ожидаются определенные изменения показателей качества (например, после использования нового сырья или изменения стадии хроматографической очистки), в целях установления характеристик или рутинных выпускающих испытаний целесообразно разработать новые аналитические методики, то есть предусмотреть дополнительные аналитические подходы, помимо ранее использованных подходов.

Определение показателей качества в исследованиях по установлению характеристик необязательно влечет использование валидированных методик, но такие методики должны быть научно обоснованными и давать достоверные результаты. Методики, использованные для определения показателей качества при выпуске серий, требуют валидации в соответствии с главами 6 и 8 настоящих Правил и требованиями по валидации аналитических методик актов, входящих в право Союза.

 

2.2.2. Установление характеристик.

В соответствии с главой 6 настоящих Правил установление характеристик биотехнологических (биологических) продуктов включает в себя определение физико-химических свойств, биологической активности, иммунохимических свойств (если применимо), чистоты, примесей, контаминантов и количественного содержания (quantity).

Если внесено изменение в процесс производства, влияющее на показатели качества, в целях прямого сравнения продукта до и после изменения, как правило, требуется полное или ограниченное (при наличии обоснований) повторение установления характеристик, проведенного при регистрации лекарственного препарата. Тем не менее в некоторых случаях может потребоваться дополнительное установление характеристик. Например, если изменения процесса производства приводят к получению профиля характеристик продукта, отличного от профиля, полученного по результатам доклинических и клинических исследований, или иного репрезентативного профиля (например, стандартные материалы, серии, находящиеся в обороте), необходимо изучить значимость таких изменений. Результаты всестороннего установления характеристик материала, использованного в опорных клинических исследованиях, могут представлять собой необходимую опорную точку для последующих исследований сопоставимости.

Каждый из указанных ниже критериев следует рассматривать в качестве ключевого фактора при проведении исследований сопоставимости:

физико-химические свойства. При планировании и проведении исследований сопоставимости производитель должен придерживаться концепции целевого продукта (и его вариантов), описанной в главе 6 настоящих Правил. Необходимо также учесть сложность молекулярной структуры и степень ее молекулярной гетерогенности. Следует убедиться в сохранности вторичной, третичной и четвертичной структур белка, полученного после внесения изменений в производственный процесс. Если подобную информацию о структуре получить невозможно, результаты соответствующих методов количественного определения биологической активности (как это указано далее) могут свидетельствовать о правильной конформационной структуре;

биологическая активность. При подтверждении показателей качества лекарственного средства, которые представляют ценность при установлении свойств и анализе серий, результаты определения биологической активности могут служить нескольким целям, а в некоторых случаях могут свидетельствовать о клинических эффектах. Производители должны учитывать ограничения, присущие биологическим испытаниям (например, высокая вариабельность, ограничения, способные воспрепятствовать обнаружению различий), которые могут возникать вследствие изменения процесса производства.

Если определение биологической активности дополняет результаты физико-химических исследований, например, исследование структуры белка более высокого порядка, использование соответствующего биологического испытания с достаточной прецизионностью и правильностью может служить косвенным подтверждением того, что при изменении производственного процесса не произошло изменений структур более высокого порядка. Если физико-химические или биологические испытания не позволяют убедиться в неизменности структуры более высокого порядка, целесообразно провести доклинические и (или) клинические исследования.

Если изменения вносятся в процесс производства продукта, проявляющего широкий спектр биологических активностей, следует определить набор функциональных испытаний для оценки всего спектра этих активностей. Например, определенные белки обладают несколькими функционально активными доменами, которые обусловливают проявление ферментативной и рецептор-опосредованной активности. В указанных случаях необходимо предусмотреть изучение всех значимых видов функциональной активности продукта.

Если один или более видов активности не полностью коррелируют с клинической безопасностью и эффективностью или механизм действия неясен, следует подтвердить, что доклинические и клинические эффекты продукта, полученные после изменения производственного процесса, не изменились;

иммунохимические свойства. Если иммунохимические свойства являются частью установления характеристик продукта (например, для антител или продуктов на их основе), следует подтвердить, что продукт, полученный после изменения процесса производства, сопоставим по указанным специфическим свойствам с неизмененным;

чистота, примеси и контаминанты. С помощью набора выбранных аналитических методик необходимо получить данные для оценки, того, произошло ли изменение профиля чистоты с точки зрения целевого продукта.

Если выявлены различия в профиле чистоты и примесей продуктов, должны быть проведены исследования по определению их влияния на безопасность и эффективность продукта, полученного после изменения процесса производства. Если изменение привело к появлению новых примесей, необходимо их идентифицировать и охарактеризовать (если это возможно). В зависимости от вида и количества примеси требуется проведение дополнительных доклинических и (или) клинических исследований с целью подтверждения отсутствия негативного влияния на профиль безопасности и эффективности лекарственного препарата. Отсутствие дополнительных исследований должно быть обосновано.

Используя удовлетворительные внутрипроизводственные критерии приемлемости или пределы действия для активной фармацевтической субстанции или лекарственного препарата, необходимо избегать наличия контаминантов и (или) надлежащим образом их контролировать. В целях определения влияния новых контаминантов на качество, безопасность и эффективность лекарственного средства необходимо их оценить.

 

2.2.3. Спецификации.

Методики, используемые для оценки показателей качества активной фармацевтической субстанции или лекарственного препарата, включенные в спецификацию, обычно недостаточны для оценки влияния изменений производственного процесса на качество продукта, так как они подобраны для рутинного подтверждения качества, а не для полной характеристики продукта. Следует подтвердить, что после изменения процесса производства спецификации продолжают обеспечивать контроль качества продукта. Результаты анализа, соответствующие требованиям спецификации, но выходящие за пределы предыдущих трендов производства, могут свидетельствовать о различиях между продуктами до и после изменений и требовать дополнительного исследования или анализа. Если данные указывают на то, что предыдущее испытание более не подходит для рутинного выпускающего контроля качества серий измененного продукта, может потребоваться модификация, исключение или добавление испытания в спецификацию. Например, исключение из среды для культивирования клеток бычьей сыворотки позволяет исключить и проведение соответствующих испытаний. Однако при отсутствии обоснований расширение критериев приемлемости, как правило, недопустимо. В отдельных случаях, если в результате изменения процесса производства меняется профиль примесей, могут потребоваться дополнительные испытания и новые критерии приемлемости. При оценке как аналитических методик, так и критериев приемлемости измененного продукта необходимо руководствоваться общими принципами составления спецификаций, указанными в главе 6 настоящих Правил, то есть влиянием изменений на валидированный процесс производства, результатами исследований по установлению характеристик, данными анализа серий, данными по стабильности и доклиническим и клиническим опытом.

 

2.2.4. Стабильность.

Даже незначительное изменение производственного процесса, может повлиять на стабильность продукта. Любые изменения, которые могут привести к изменениям структуры белка, показателей чистоты и профиля примесей, должны быть оценены в отношении их влияния на стабильность, поскольку белки часто чувствительны к таким изменениям, как состав буферного раствора, условия обработки и перерыва в производстве (holding), использование органических растворителей и т.д. С помощью исследований стабильности возможно обнаружение незначительных различий, которые невозможно обнаружить в исследованиях по установлению характеристик. Например, наличие следовых количеств протеазы может быть определено только по продуктам деградации, которые образуются через продолжительный период хранения продукта. В некоторых случаях двухвалентные ионы, вымываемые из укупорочной системы, могут изменить профиль стабильности вследствие активации следовых протеаз, не обнаруженных в исследованиях стабильности неизмененного лекарственного средства. Таким образом, в соответствующих случаях в отношении измененного лекарственного средства необходимо начать исследования стабильности в реальном времени и при реальной температуре.

Ускоренные и стрессовые исследования стабильности также являются полезным инструментом для определения возможной деградации белкового продукта и обеспечивают возможность прямого сравнения свойств продуктов, полученных до и после изменения технологического процесса. Полученные таким образом результаты могут свидетельствовать о различиях между свойствами продукта, требующих дополнительного изучения, а также помогают определить отклонения, указывающие на необходимость введения дополнительных контрольных мероприятий в процесс производства и хранения для устранения таких неожиданных различий в продукте. Необходимо провести соответствующие исследования, подтверждающие, что условия хранения и контрольные испытания выбраны правильно.

В целях определения условий проведения исследований стабильности, которые позволят получить необходимые данные для осуществления сравнения лекарственного средства до и после изменений, следует выполнять требования главы 8 настоящих Правил и регламентирующих изучение стабильности лекарственных средств актов, входящих в право Союза,.

 

2.3. Производственный процесс

 

Хорошо охарактеризованный процесс производства и контроль такого процесса производства обеспечивают получение продукта приемлемого качества на постоянной основе. Подходы к оценке влияния любых изменений производственного процесса зависят от особенностей процесса, самого продукта, знаний о процессе и опыта производителя, а также от данных, полученных при разработке продукта. Следует подтвердить, что контроль измененного процесса обеспечит сходный или более эффективный контроль качества продукта по сравнению с первоначальным процессом.

Необходимо обязательно провести тщательный анализ потенциального влияния планируемых изменений на последующие стадии производства и зависящие от них показатели качества (например, критерии приемлемости, внутрипроизводственные спецификации, внутрипроизводственные испытания, время хранения продукта между производственными стадиями, пределы действия, валидация (оценка)). Такой анализ позволяет выявить испытания, которые необходимо провести в ходе исследований сопоставимости, какие внутрипроизводственные критерии приемлемости или критерии приемлемости на выпуск серии либо аналитические методики требуют пересмотра, а также стадии, на которые не должны повлиять предлагаемые изменения. Например, анализ промежуточных продуктов может выявить потенциальные различия в продукте, что требует оценки пригодности использующихся аналитических методик для выявления таких различий. Решение об исключении из анализа некоторых этапов производственного процесса необходимо научно обосновать.

Если технологический процесс и связанные с ним методы контроля предполагается изменить, необходимо подтвердить, что продукты, полученные до и после внесения изменений, сопоставимы. Для подтверждения сопоставимости следует показать, что специфические промежуточные продукты сопоставимы или измененный процесс может обеспечивать удаление производственных и родственных примесей, включая новые примеси, которые образовались в результате изменения процесса. Если изменения вносятся в процесс производства зарегистрированных лекарственных препаратов, как правило, требуется сравнение с данными о результатах испытаний серий промышленного масштаба.

При анализе процесса производства необходимо учитывать такие факторы, как критичность стадии производственного процесса и предлагаемого изменения, место изменения в производственном процессе и потенциальное влияние изменения на остальные стадии процесса производства, а также характер и степень изменения. Информацию, которая может в этом помочь, можно получить из разных источников: сведения, полученные в исследованиях по разработке, исследованиях по валидации или оценке (при невозможности валидации) маломасштабных серий; опыт ранее проведенных изменений, сведения об изменении схожих процессов производства аналогичных лекарственных препаратов, данные литературы. Несмотря на то что сведения из внешних источников могут представлять определенную ценность, анализ изменения необходимо осуществлять в контексте конкретного процесса производства и конкретного продукта.

При внесении изменений в производственный процесс производитель должен подтвердить, что соответствующие контрольные мероприятия, включая новые, обеспечат получение сопоставимого лекарственного препарата. Измененные стадии процесса производства необходимо повторно оценить и (или) валидировать. Внутрипроизводственный контроль, включая ключевые контрольные точки и внутрипроизводственные испытания, должен обеспечить надлежащий контроль измененного процесса и поддерживать качество продукта. При отсутствии каких-либо свидетельств, что изменение влияет на функционирование последующих после культивирования стадий производства или качество промежуточных продуктов, образующихся на последующих стадиях, повторную валидацию или оценку (при невозможности валидации) при простом изменении допускается, как правило, проводить в отношении измененного этапа. При внесении изменений в производственный процесс, которые затрагивают несколько стадий производственного процесса, может потребоваться более расширенный анализ и, как следствие, валидация.

Подтверждение наличия контроля над измененным процессом производства включает в себя в том числе:

изменение спецификаций на сырье, исходные материалы и реагенты;

надлежащие испытания на биологическую нагрузку и (или) вирусную безопасность измененного банка клеток и клеток с предельным для производства клеточным возрастом in vitro;

очистка от посторонних агентов;

удаление родственных и производственных примесей, например, остаточных ДНК и белков клетки-хозяина;

поддержание необходимого профиля чистоты.

Для зарегистрированных лекарственных препаратов должно быть проанализировано достаточное число серий, произведенных после внесения изменений в процесс производства, с целью подтверждения постоянства производства.

Для обоснования анализа изменений и стратегии контроля качества производитель должен подготовить описание изменения, в котором резюмируется процесс производства до и после изменения и четко обозначены изменения процесса и контроля в параллельном формате.

 

2.4. Подтверждение сопоставимости на этапе
разработки продукта
 

При разработке продукта возможно внесение большого числа изменений в производственный процесс, которые могут повлиять на качество лекарственного препарата, его безопасность и эффективность. В целях содействия дальнейшей разработке и регистрации такого продукта проводят сравнительные исследования, подтверждающие, что полученные доклинические и клинические данные о неизмененном лекарственном препарате распространяются на измененный продукт. Исследования сопоставимости продуктов на стадии разработки зависят от таких факторов, как стадия разработки, доступность валидированных аналитических методик, степень изученности продукта и процесса, которые в некоторых случаях ограничены лишь опытом самого производителя.

Если изменения осуществляются до начала доклинических исследований, вопрос о сопоставимости не возникает, поскольку производитель впоследствии проводит доклинические и клинические исследования, используя в процессе разработки измененный лекарственный препарат. На ранних фазах доклинических и клинических исследований изучение сопоставимости, как правило, не столь обширно, как для зарегистрированного лекарственного препарата. По мере накопления знаний и сведений и разработки аналитических инструментов в исследованиях сопоставимости следует использовать всю имеющуюся информацию. Если изменения осуществляются на поздних этапах разработки и дополнительные клинические исследования в обоснование регистрации проводить не планируется, исследования сопоставимости должны быть столь же всесторонними и глубокими, как в случае, если они проводятся в отношении зарегистрированного лекарственного препарата. Некоторые результаты исследований сопоставимости по качеству могут потребовать проведения дополнительных доклинических и клинических исследований (в соответствии с требованиями подразделов 2.1 - 2.3 настоящей главы, а также главы 9.2 настоящих Правил).

При проведении исследований сопоставимости в процессе разработки продукта необходимо использовать соответствующие методы оценки. Следует учитывать, что в процессе разработки аналитические методики могут быть не валидированы, но они должны быть всегда научно обоснованы и должны обеспечивать достоверные и воспроизводимые результаты. Ввиду ограниченности аналитических средств на ранней стадии клинической разработки для установления сопоставимости результатов физико-химических и биологических испытаний может оказаться недостаточно, в связи с чем могут потребоваться связующие доклинические и (или) клинические исследования.

 

2.5. Доклинические и клинические исследования
 

2.5.1. Факторы, которые необходимо учитывать при планировании доклинических и клинических исследований.

Если производитель сможет доказать сопоставимость с помощью аналитических исследований, описанных в настоящей главе, возможно подтверждение сопоставимости измененного и неизмененного продукта исключительно с помощью показателей качества (в соответствии с требованиями подраздела 2.2 настоящей главы). Если результатов изучения качества недостаточно, для установления сопоставимости необходимо дополнительно провести доклинические и (или) клинические исследования. Объем и разновидность доклинических и клинических исследований устанавливаются в индивидуальном порядке, принимая во внимание множество факторов, включая в том числе следующее:

результаты изучения качества:

лекарственный препарат - вид, характер и степень различия между продуктом, полученным после внесения изменений, и продуктом до внесения изменений с точки зрения показателей качества, включая родственные соединения, профиль примесей, стабильность и вспомогательные вещества (например, новые примеси могут потребовать проведения токсикологических исследований с целью их квалификации);

результаты оценки (валидации) нового процесса производства, включая результаты значимых внутрипроизводственных испытаний;

доступность, возможности и ограничения испытаний, используемых для оценки сопоставимости;

основные свойства и известные данные о продукте

сложность продукта, включая гетерогенность и структуры более высокого порядка - физико-химические и in vitro биологические испытания не всегда способны обнаруживать все структурные и (или) функциональные различия;

зависимость "структура - активность" и сила связи между показателями качества и безопасностью и эффективностью;

взаимосвязь между терапевтическим белком и эндогенными белками организма и их последствия для иммуногенности;

механизм действия продукта (известен или неизвестен, один или несколько активных центров);

имеющиеся доклинические и клинические данные, значимые для лекарственного препарата, особенности его применения и фармакотерапевтическая группа:

показания к применению и целевые группы пациентов - выявленные различия могут оказать разное влияние на разные популяции пациентов, например, риск нежелательной иммуногенности. При этом может потребоваться рассмотрение последствий внесенных изменений для каждого показания к применению;

способ применения, например, режим дозирования, путь введения - риск определенных последствий, например, иммуногенности, может быть выше при длительном введении, чем при краткосрочном; подкожное введение чаще предрасполагает к иммуногенности, чем внутривенное;

терапевтический диапазон (кривая "доза - эффект"): влияние определенных изменений на лекарственные препараты с широким терапевтическим диапазоном может отличаться от лекарственных препаратов с узким диапазоном. Даже незначительные изменения фармакокинетики или профиля связывания с рецептором могут оказывать влияние на безопасность и эффективность лекарственных препаратов с крутой или колоколобразной кривой "доза - эффект";

предыдущий опыт в отношении действия лекарственного препарата, например, в отношении его иммуногенности, безопасности. Следует учитывать опыт применения неизмененного лекарственного препарата или лекарственных препаратов того же класса, особенно в отношении редких нежелательных реакций, таких последствия его иммуногенного действия;

фармакокинетическо-фармакодинамическая зависимость, распределение и клиренс.

 

2.5.2. Тип исследования.

К доклиническим и клиническим исследованиям, указанным в настоящей главе, в зависимости от обстоятельств относятся: ФК-исследования, ФД-исследования, ФК/ФД-исследования, исследования клинической эффективности, исследования клинической безопасности, исследования иммуногенности, исследования в рамках фармаконадзора. Цель указанных исследований - сравнить измененный и неизмененный лекарственный препарат. По возможности такие исследования должны носить прямой сравнительный характер.

 
3. ОПРЕДЕЛЕНИЯ
 

Для целей настоящей главы используются понятия (термины), которые означают следующее:

"исследование сопоставимости" - деятельность, включающая в себя планирование исследований, их проведение и анализ данных, направленных на установление сопоставимости лекарственных препаратов;

"показатели качества" - молекулярная характеристика и другие свойства продукта, отобранные в силу их способности определять качество продукта. Показатели качества в совокупности определяют подлинность, чистоту, активность и стабильность продукта, а также безопасность с точки зрения посторонних агентов. Спецификации определяют определенный набор показателей качества;

"связующее исследование сопоставимости" - исследования, обеспечивающие возможность экстраполяции доклинических и клинических данных, полученных при изучении лекарственного продукта, произведенного с помощью неизмененного процесса производства, на лекарственный препарат, произведенный с помощью измененного процесса;

"сопоставимость" - заключение, что продукты обладают высокой степенью сходства по показателям качества продукта до и после изменений процесса производства и отсутствует нежелательное влияние на безопасность или эффективность, включая иммуногенность, лекарственного препарата. Такое заключение можно сделать по результатам анализа показателей качества продукта. В некоторых случаях для такого заключения необходимы доклинические или клинические данные.

 

Глава 9.2
 
ИССЛЕДОВАНИЕ СОПОСТАВИМОСТИ БИТЕХНОЛОГИЧСКИХ
ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ ПРИ ВНЕСЕНИИ ИЗМЕНЕНИЙ
В ПРОИЗВОДСТВЕННЫЙ ПРОЦЕСС: ДОКЛИНИЧЕСКИЕ
И КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
 
1. ВВЕДЕНИЕ
 

Производители биотехнологических (биологических) лекарственных препаратов часто вносят изменения в производственный процесс на этапах разработки и после регистрации.

Подтверждение сопоставимости препаратов, полученных до и после внесения изменений, является последовательным процессом, который начинается с изучения качества (в ограниченном или полном объеме) и, при необходимости, может включать в себя доклинические, клинические исследования и (или) исследования в рамках фармаконадзора.

В настоящей главе представлены требования по проведению доклинических и клинических исследований в рамках исследования сопоставимости при сравнении препаратов, которые были получены до и после изменений процесса производства, внесенных одним производителем, включая контрактных производителей. В настоящей главе представлены требования для проведения связующих доклинических и (или) клинических исследований после внесения изменений в производственный процесс для подтверждения отсутствия влияния таких изменений на эффективность и безопасность препарата.

Программа доклинических и клинических исследований должна основываться на свойствах препарата и быть составлена таким образом, чтобы с достаточной точностью предсказать и выявить возможные различия между сравниваемыми препаратами, которые получены до и после внесения изменения в производственный процесс.

Предполагается, что физико-химические свойства и биологическая активность в условиях in vitro и in vivo препарата могут быть хорошо охарактеризованы с использованием современных методов.

Для большинства изменений, вносимых в производственный процесс, результаты сравнительного изучения физико-химических свойств и биологической активности (как показателя качества) позволяют подтвердить отсутствие различий по показателям качества, которые могут негативно влиять на безопасность и эффективность. Таким образом, исследования сопоставимости ограничиваются только валидацией измененного процесса или расширяются дополнительными критериями качества за счет внутрипроизводственного контроля, физико-химических и биологических характеристик препарата и данных по стабильности (в соответствии с требованиями главы 9.1 настоящих Правил). Однако в некоторых случаях можно ожидать влияние выявленных различий между препаратом до и после изменений на его безопасность и (или) эффективность или наличие таких влияющих различий не может быть исключено, несмотря на современный уровень использованных физико-химических и биологических методов. В подобных ситуациях необходимо провести дополнительные доклинические и (или) клинические исследования.

Вид и объем доклинических и клинических исследований зависят от многих факторов, обусловленных активной фармацевтической субстанцией и лекарственным препаратом, таких как:

информация о молекуле и других молекулах из данной группы препаратов;

этап разработки еще не зарегистрированного препарата;

результаты сравнительных исследований физико-химических и биологических свойств по оценке сопоставимости;

предлагаемое клиническое применение.

 
2. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
 

Указанные в настоящей главе принципы распространяются на белки и полипептиды, их производные, а также препараты, в которых они являются компонентами, например, в конъюгатах. Такие белки и полипептиды могут быть получены с помощью рекомбинантных или нерекомбинантных экспрессирующих систем, они хорошо поддаются очистке и подробному установлению характеристик с использованием современных аналитических методов в следующих случаях:

изменения в производственный процесс вносятся одним производителем (в том числе контрактным), который может непосредственно сравнить процессы, результаты аналитических внутрипроизводственных испытаний, полученных до и после внесения изменений в производственный процесс;

изменения в производственный процесс вносятся в процессе разработки или после регистрации лекарственного препарата.

Принципы, указнные в настоящей главе, могут быть применимы к другим биологическим лекарственным препаратам, таким как белки и полипептиды, полученные из тканей и жидкостей организма. В подобных ситуациях производителю необходимо проконсультироваться с уполномоченным органом государства-члена для возможности применения указанных требований.

 
3. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ
 

Настоящую главу следует рассматривать в совокупности с другими главами настоящих Правил.

 

4. ОСНОВНОЙ ТЕКСТ ПРАВИЛ
 
4.1. Использование подхода, основанного на оценке
рисков для определения потребности в доклинических
и клинических исследованиях
 

Подтверждение сопоставимости препаратов, полученных до и после внесения изменений в производственный процесс, является последовательным процессом, который начинается с изучения качества (в ограниченном или полном объеме) и при необходимости может включать в себя доклинические, и (или) клинические исследования, и (или) исследования в рамках фармаконадзора. Если производитель может подтвердить сопоставимость с помощью физико-химических и биологических исследований, проведение доклинических и клинических исследований не требуется. В противном случае необходимо провести дополнительные доклинические и (или) клинические исследования.

Необходимость проведения, объем и характер доклинических и клинических исследований сопоставимости определяются в индивидуальном порядке с учетом различных факторов, которые связаны с риском, таких как:

сложность производственного процесса, характер изменения и его потенциальная возможность влияния на структуру молекулы действующего вещества и характеристики лекарственного препарата;

характер и степень различий, обнаруженных с помощью физико-химических и затрагивающих качество биологических испытаний, включая родственные соединения, профиль примесей, стабильность и вспомогательные вещества. Хорошо охарактеризованные различия являются основой для рационального и направленного подхода к определению необходимости для проведения доклинических и клинических исследований;

сложность препарата, включая гетерогенность и структуры более высокого порядка, а также наличие, возможности и ограничения аналитических испытаний. Если аналитические методики не позволяют выявить различия, которые могут повлиять на безопасность и эффективность препарата после внесения изменений в производственный процесс, могут потребоваться дополнительные доклинические и (или) подтверждающие клинические исследования;

структурно-функциональная зависимость и сила связи показателей качества с безопасностью и эффективностью;

взаимосвязь между белковым препаратом и эндогенными белками, и тяжесть потенциальных последствий иммуногенности, например, риск развития аутоиммунных нарушений;

механизмы действия: неизвестные и множественные механизмы действия усложняют оценку влияния изменений;

показания к применению и целевые группы пациентов: различия могут по-разному проявиться в различных группах пациентов при разных показаниях к применению;

способ применения, например, режим дозирования и путь введения (в частности, многократное подкожное введение препарата чаще ассоциировано с иммуногенностью, нежели однократное внутривенное введение);

терапевтический диапазон (кривая "доза - эффект");

предыдущий опыт, например, иммуногенность и безопасность. Актуальным будет анализ данных, полученных до внесения изменений в производственный процесс, или данных о других препаратах из этой группы. Однако биотехнологические белки следует рассматривать индивидуально.

Указанные особенности необходимо учитывать при изучении сопоставимости в процессе разработки препарата. Объем необходимых исследований сопоставимости будет больше при внесении изменений на более поздних этапах клинической разработки. Наиболее сложной проблемой является изучение сопоставимости при внесении изменений в производственный процесс после окончания подтверждающих клинических исследований эффективности и безопасности.

Выбор доклинических и клинических исследований определяется свойствами конкретного препарата, то есть необходимо выбрать такую стратегию проведения исследований сопоставимости, которая оптимальным образом позволит достаточно точно спрогнозировать и выявить все потенциальные клинически значимые различия.

 
4.2. Доклинические исследования
 

Если для оценки сопоставимости препаратов до и после изменения результатов одних физико-химических и затрагивающих качество биологических испытаний недостаточно вследствие выявления различий между препаратами или характера изменения процесса производства, не позволяющего по результатам изучения одного лишь качества исключить различия, результаты доклинических исследований могут обнаруживать полезные сигналы потенциальных различий в эффективности и безопасности.

В частных случаях целесообразно провести небольшое число доклинических исследований или не проводить их в принципе, однако в других случаях необходимо провести большой объем исследований. Необходимо отметить, что составление надлежащей программы доклинических исследований требует четкого понимания структуры и активности препарата. При этом необходимо учитывать соответствующие документы, в частности главы 5.3 - 5.4 настоящих Правил. Выявление изменений в профиле примесей необязательно требует проведения доклинических исследований. При этом держатели регистрационных удостоверений должны представить обоснование стратегии (плана) дальнейших действий.

Доклинические исследования сопоставимости носят сравнительный характер, основной целью которых является выявление возможных различий между ответами на препараты, полученные до и после внесения изменений, а не ответа per se. При этом сопоставление препаратов, полученных до и после внесения изменений, необходимо проводить в одном исследовании.

При обосновании подхода к планированию доклинических исследований сопоставимости в модулях 2 и 4 регистрационного досье необходимо представить достаточные сведения и ссылки на другие разделы регистрационного досье. Допускается придерживаться нижеследующего подхода, который следует адаптировать в индивидуальном порядке к рассматриваемому лекарственному препарату. Выбранный подход необходимо обосновать в доклиническом обзоре (включаемом в модуль 2.6. регистрационного досье).

 

Исследования in vitro

В целях выявления любых произошедших изменений в реактивности и обнаружения вероятных причин несопоставимости необходимо, используя параллельный сравнительный дизайн, изучить препараты до и после внесения изменений с помощью биологических испытаний (например, связывание с рецептором или испытания на клетках), многие из которых могут быть доступны при оценке качества.

 

Исследования in vivo

При сохранении неопределенности или опасений (обоснованного экспертного мнения или мнения разработчика препарата относительно отсутствия важных данных, сведений, поясняющих полученную информацию и сведения, содержащихся в регистрационном досье, либо наличия в досье взаимно противоречащих сведений и данных) относительно значений (характеристик) фармакокинетических параметров или фармакодинамических эффектов, значимых для клинического применения и (или) безопасности, следует рассмотреть возможность проведения исследований in vivo на одном или нескольких релевантных видах животных с использованием должным образом валидированных животных моделей. Большую достоверность представляют результаты исследований, проведенных на видах животных, в отношении которых на неизмененном препарате показано, что они являются релевантными для человека. При проведении указанных исследований предпочтительно использовать лекарственный препарат, полученный после внесения изменения, нежели активную фармацевтическую субстанцию. В целях упрощения интерпретации данных состав препарата, используемого при проведении доклинических исследований, должен совпадать с составом, который планируется использовать в клинических исследованиях. При проведении доклинических испытаний следует использовать современные методы исследований.

В целом и если позволяет модель, необходимо осуществлять наблюдение за несколькими конечными точками, такими как:

изменения показателей фармакодинамики, значимых для клинического применения (например, длительности действия);

изменения фармакокинетических параметров (например, клиренса);

специально подобранные токсикологические точки (прижизненные и посмертные). Дизайн исследования необходимо обосновать с учетом предполагаемой продолжительности клинического применения;

иммунный ответ, например, титры антител, нейтрализующая активность и перекрестная реактивность. Несмотря на то что прогностическая ценность изучения иммуногенности на животных моделях для человека низкая, в целях упрощения интерпретации результатов исследований токсичности при многократном введении в них необходимо включить (сравнительные) конечные точки иммуногенности и забор образцов крови.

Разработчику лекарственного препарата следует учитывать, что необходимо регулярно пересматривать методы исследования с учетом достижений в области аналитических и биологических методов исследований, например, определенную ценность могут представлять исследования in vitro связывания в режиме реального времени. При проведении исследований in vivo могут быть использованы геномные или протеомные микропанели, которые могут позволить обнаружить незначительные изменения биологического ответа на фармакологически активные вещества.

 
4.3 Клинические исследования
 

Программа сравнительных клинических исследований эффективности и безопасности должна быть составлена с учетом этапа разработки препарата, характера вносимых изменений и их влияния на показатели качества. Разработчики как правило вносят изменения в процесс производства препарата до его регистрации. Количество дополнительных данных меньше при внесении изменений до проведения подтверждающих клинических исследований, чем при внесении изменений после проведения подтверждающих клинических исследований или регистрации. При планировании клинических исследований, необходимо учитывать следующие варианты внесения изменений в процесс производства:

изменения процесса производства произошли до начала проведения подтверждающих исследований. В этом случае в целях подтверждения того, что имеющиеся доклинические и клинические данные, полученные до изменения, остаются валидными и возможна их экстраполяция на препарат после изменения, как правило, достаточно представить соответствующие результаты физико-химических и биологических (исследований in vitro и in vivo). В некоторых случаях, необходимы доклинические или клинические исследования сопоставимости, например, такие как фармакокинетические исследования с однократным введением;

изменения процесса производства произошли в ходе подтверждающих исследований. Внесение изменений в ходе подтверждающих исследований не рекомендуется, однако при необходимости внесения таких изменений заявителю следует обратиться за консультацией в уполномоченные органы государств-членов;

изменения процесса производства произошли по окончании подтверждающих исследований или после регистрации. Если изменение производства происходит по окончании подтверждающих исследований или после регистрации, как правило, необходимо провести более глубокие исследования сопоставимости, включая физико-химические и биологические исследования in vitro, если необходимо фармакокинетические и (или) фармакодинамические исследования сопоставимости. Если результаты таких исследований сопоставимости не исключают влияния на профиль эффективности и безопасности препарата, могут потребоваться дополнительные клинические исследования. Отступление от этой концепции необходимо обосновать;

имеются дополнительные критерии, влияющие на необходимость представления сравнительных клинических данных. При подготовке и обосновании программы клинических исследований необходимо учесть все значимые данные, включая все результаты ранее проведенных доклинических исследований и клинический опыт, полученный в отношении неизмененного препарата и других препаратов из той же категории, в том числе:

зависимость эффективности и безопасности от дозы (экспозиции);

наличие динамического маркера, который можно использовать в качестве суррогатного маркера клинической эффективности и безопасности;

зависимость этого суррогатного маркера от дозы (экспозиции);

взаимодействие препарата с рецепторами;

механизм действия, специфичный для заболевания;

органы-мишени для проявления активности и токсичности лекарственного препарата;

способ применения лекарственного препарата.

 

Фармакокинетические исследования

Фармакокинетические исследования являются важнейшей частью клинического исследования сопоставимости. Поскольку целью исследования сопоставимости является подтверждение сопоставимости препаратов, а не только характеристика клинической фармакологии препарата per se, полученного после внесения изменений в процесс производства, такие исследования должны быть сравнительными.

Наиболее приемлемым является перекрестное исследование при однократном введении препарата, поскольку оно имеет более низкую вариабельность результатов, чем сравнительные исследования с параллельным дизайном. Следует отметить, что при изучении фармакокинетики и фармакодинамики необходимо учитывать такие факторы, как иммуногенность и ее возможное влияние на фармакокинетические параметры и (или) фармакодинамические эффекты.

Путь введения должен совпадать с тем, который планируется использовать при клиническом применении. Если планируется использовать не 1 путь введения препарата (например, внутривенное и подкожное введение), может потребоваться изучение каждого пути введения. В целях выявления значимых различий выбранная доза должна находиться на крутой части кривой "доза - эффект". При выборе популяции для исследований (здоровые добровольцы или пациенты) в первую очередь следует учитывать механизм действия препарата. Поскольку фармакокинетические и фармакодинамические исследования рекомендуется комбинировать, выбор целевой группы должен основываться на том, какие фармакодинамические эффекты подлежат изучению, то есть оптимально ли обнаружение таких эффектов в выбранной целевой группе. При планировании такого перекрестного исследования необходимо учитывать возможность возникновения эффекта переноса.

Дизайн сравнительных ФК-исследований необязательно должен воспроизводить стандартный дизайн клинической сопоставимости (в соответствии с требованиями правила проведения исследований биоэквивалентности лекарственных препаратов в рамках Евразийского экономического союза, утверждаемых Комиссией), поскольку схожесть абсорбции и биодоступности не единственный интересующий параметр. Необходимо изучить различия между характеристиками элиминации препаратов, например, клиренсом и терминальным периодом полувыведения.

 

Фармакодинамические исследования

Фармакодинамику (ФД) предпочтительно следует оценивать в составе сравнительного фармакокинетического исследования, поскольку изменение ФД в некоторых случаях может быть обусловлено изменением фармакокинетических показателей. Исследования должны быть сравнительными и не должны быть направлены на выявление фармакодинамических свойств препарата per se.

Маркеры первичной и вторичной ФД. Выбранная конечная точка должна удовлетворять следующим требованиям:

чувствительность, достаточная для выявления даже незначительных различий;

прецизионность, достаточная для выявления даже незначительных различий;

клиническая значимость для исследуемой целевой популяции.

Для подтверждения аналитической чувствительности следует соблюдать осторожность при определении правильного диапазона доз. Целесообразно проводить исследования нескольких доз. Необходимо обосновать выбор маркеров, а также заранее определить и обосновать границу эквивалентности для него.

В связи с этим выбор популяции необходимо обосновать. Выявление определенных первичных или вторичных ФД-маркеров возможно только у пациентов, а не у здоровых добровольцев. Например, иммуномодуляторы, воздействующие на патологически измененные иммунные эффекторные клетки, не всегда будут вызывать аналогичный эффект у здоровых добровольцев.

ФД-маркеры как замена оценки эффективности. При проведении клинических исследований эффективность обычно оценивается по одной или нескольким клиническим конечным точкам. Иногда для этого используются ФД-маркеры. ФД-маркер может рассматриваться как подходящий маркер эффективности, если его изменение под влиянием препарата в значительной степени объясняет изменения клинического исхода.

ФД-маркеры обычно более чувствительны к изменениям активности препарата и поддаются более ранней оценке, чем клинические конечные точки, поэтому в некоторых случаях они могут служить наиболее подходящей конечной точкой. Однако поскольку цель сравнительного исследования заключается в подтверждении эквивалентности препаратов, как правило, необходимо представить данные о количественной зависимости между ФД-маркером и клинической конечной точкой, позволяющей определить и обосновать границу эквивалентности для эффективности. В некоторых ситуациях целесообразно использовать не один, а несколько ФД-маркеров.

Поскольку суррогатный маркер будет полезен для дальнейшей разработки препарата, изучение суррогатных конечных точек заявителям и держателям регистрационных удостоверений следует проводить.

 

Исследования эффективности

Дизайн исследования. Если подходящие маркеры отсутствуют или с помощью ФД-исследований не удалось однозначно подтвердить сопоставимость, необходимо, используя клинические конечные точки, провести сравнительное клиническое исследование эквивалентности. Исследования должны носить сравнительный характер с сопоставлением препаратов до и после изменений. Для исключения систематических ошибок клинические исследования должны, как правило, быть рандомизированными, двойными слепыми. Потенциальные различия в эффективности необходимо изучить в исследованиях, позволяющих с наибольшей вероятностью обнаружить такие различия.

Приемлемую границу эквивалентности необходимо выбрать заранее, принимая во внимание спецификации препарата на выпуск, клиническую значимость и статистические аспекты. При определении размера выборки необходимо руководствоваться не только соображениями клинической эффективности, но и исходить из необходимости обеспечить обнаружение различий в безопасности (как это указано далее).

Если исследование с дизайном эквивалентности невыполнимо, необходимо рассмотреть возможность использования других дизайнов и проконсультироваться с уполномоченными органами (экспертными организациями).

Выбор наиболее подходящей популяции пациентов и показаний к применению. Поскольку белковые лекарственные препараты могут применяться по нескольким показаниям и (или) у разных популяций пациентов, необходимо учитывать различия и особенности влияния препарата на показатели эффективности и (или) безопасности. Необходимо выбрать такую популяцию пациентов или такое показание к применению, которые наилучшим образом позволят выявить различия, то есть наиболее чувствительную модель оценки эффективности. Выбор популяции заявителем требует обоснования и зависит от ее восприимчивости и подверженности потенциальным рискам для безопасности. Заявитель должен всесторонне с достаточной достоверностью обосновать возможность экстраполяции результатов сравнительного изучения эффективности и безопасности по одному показанию или у одной популяции на другие популяции и показания к применению.

Выбор подходящих конечных точек. Необходимо выбрать такие конечные точки, которые позволяют с высокой степенью точности выявить возможные различия между препаратами. Требования к проведению клинических исследований сопоставимости могут отличаться от требований, которые предъявляются к проведению стандартных подтверждающих исследований. Клинические конечные точки зарегистрированных лекарственных препаратов необязательно должны совпадать с конечными точками, использованными в подтверждающих исследованиях, если их способность обнаруживать различия недостаточна. Более подходящими могут оказаться фармакодинамические или иные маркеры, например, визуализационные. Выбор клинических конечных точек необходимо обосновать.

Продолжительность исследования. Продолжительность исследования определяется главным образом выбором клинической конечной точки. Продолжительность должна быть достаточной, чтобы достаточно точно выявить даже минимальные различия. При обсуждении и обосновании продолжительности исследования необходимо также опираться на данные опубликованные в научной медицинской литературе. Поскольку сравнительная оценка безопасности является неотъемлемой частью исследования клинической сопоставимости, при определении продолжительности исследования следует также учесть необходимость надлежащего выявления значимых различий по показателям безопасности.

 

Требования к клинической безопасности и фармаконадзору

Если в процессе изучения эффективности доказана сопоставимость препаратов, полученных до и после внесения изменений, то такие препараты могут иметь различия по показателям безопасности (по характеру, серьезности или частоте возникновения нежелательных реакций). Данные по оценке безопасности препарата, не прошедшего регистрацию, необходимо получить в исследовании с участием достаточного числа пациентов, чтобы можно было провести сравнение профилей безопасности препаратов, полученных до и после внесения изменений в процесс производства. Необходимо с осторожностью сравнивать вид, тяжесть и частоту возникновения нежелательных реакций между препаратами до и после изменения.

После регистрации препарата могут потребоваться дополнительные исследования, например, фармакоэпидемиологические.

При оценке нежелательных реакций необходимо учитывать не только частоту возникновения нежелательных явлений, но и возможные различия в их клинических проявлениях (длительность, тяжесть и серьезность, обратимость, ответ на лечение и т.д.).

Заявитель должен включить в регистрационное досье рассматриваемого лекарственного препарата спецификацию по безопасности. Она должна содержать описание возможных проблем с безопасностью, обусловленных изменениями процесса производства.

Объем базы данных по оценке безопасности. Данные о безопасности могут быть получены в рамках клинического исследования, направленного на подтверждение эквивалентной эффективности. Продолжительность исследования и объем выборки определяют с учетом частоты возникновения, тяжести и серьезности ожидаемых нежелательных явлений, а также клинических условий применения лекарственного препарата (непродолжительное или длительное применение и др.). Цель такого исследования не заключается в выявлении нежелательных явлений per se, она состоит в оценке различий в их возникновении.

Конечные точки безопасности. При выборе конкретных конечных точек следует учитывать как типичные, характерные для препарата и (или) его класса аспекты безопасности, так и прочие потенциальные проблемы, которые можно вывести исходя из механизма действия. Поскольку можно получить неожиданные результаты изучения безопасности, заявителям не рекомендуется в протоколе исследования ограничиваться методами, направленными на обнаружение исключительно известных проблем для безопасности. Оценка сравнительной иммуногенности должна быть составной частью оценки безопасности (в соответствии с требованиями главы 11 настоящих Правил).

 

План управления рисками

При регистрации заявитель должен представить план управления рисками или после регистрации препарата представить обновленный план управления рисками в соответствии с международными договорами и актами, составляющими право Союза. При этом необходимо учесть риски, которые были выявлены в процессе изучения безопасности препарата, и потенциальные риски.

При разработке плана управления рисками следует учитывать уже существующую информацию по безопасности применения ранее выпускавшегося препарата (препарата, полученного по исходной технологии до внесения изменений в процесс производства), а также лекарственных препаратов данной группы.

В периодических отчетах по безопасности лекарственных препаратов (ПООБ), регулярно представляемых держателем регистрационного удостоверения согласно праву Союза, должна содержаться вся информация о рисках и переносимости препарата, зависящих от внесенных изменений в процесс производства. Периодичность представления ПООБ определяется в каждом конкретном случае индивидуально.

Сроки представления доклинических и (или) клинических данных. Доклинические и клинические исследования (если применимо) должны быть завершены до утверждения изменений производственного процесса в соответствии с установленными в Союзе требованиями, то есть до выпуска препарата. В зависимости от свойств препарата и показаний к применению вносимые изменения могут быть основаны на фармакодинамических данных. При этом дополнительные данные клинических исследований и данные по безопасности, включая сведения об иммуногенности, могут быть представлены после утверждения вносимых изменений.

 

Глава 10
 
РАЗРАБОТКА, ПРОИЗВОДСТВО, УСТАНОВЛЕНИЕ
ХАРАКТЕРИСТИК И СПЕЦИФИКАЦИИ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ
И ИХ ПРОИЗВОДНЫХ
 
1. ВВЕДЕНИЕ
 

В настоящей главе рассматриваются требования к качеству моноклональных антител.

Моноклональные антитела - это Ig, характеризующиеся определенной специфичностью, источником получения которых являются линии клеток одного клона. Их биологическая активность проявляется за счет специфичного связывания с соответствующим лигандом (обычно определяемым как антиген) и обусловливает такие эффекторные функции иммунной системы, как антителозависимая клеточная цитотоксичность (ADCC) и комплементзависимая цитотоксичность (CDC).

Моноклональные антитела могут быть получены по технологии рекомбинантной ДНК (рДНК), гибридомной технологии, иммортализацией B-лимфоцитов или с помощью других технологий (например, дисплей-технологии, генетически модифицированные животные).

В настоящей главе изложены принципы и общие требования к разработке, производству, установлению характеристик и спецификации препаратов моноклональных антител, которые применяются в качестве лекарственных препаратов для медицинского применения или использования в их производстве.

 
2. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
 

В настоящей главе рассматриваются вопросы качества при регистрации моноклональных антител, полученных из моноклональной линии клеток, предназначенных для терапевтического и профилактического (в том числе для применения ex vivo), а также для диагностического применения in vivo.

Принципы, изложенные в настоящей главе, применимы к моноклональным антителам, используемым в качестве реагентов, а также к лекарственным препаратам, разработанным на основе моноклональных антител, таким как фрагменты иммуноглобулинов, конъюгаты, гибридные белки и др. Однако использование указанных принципов определяется индивидуально для каждого конкретного препарата с учетом специфики их свойств и будет рассмотрено в отдельных документах.

Поликлональные антитела (фракционированные и рекомбинантные) в настоящей главе не рассматриваются, однако по возможности следует использовать описанные в них принципы.

Настоящая глава не распространяется на:

моноклональные антитела, предназначенные для использования in vitro;

моноклональные антитела, применяемые в клинических исследованиях.

Однако при производстве и контроле моноклональных антител для клинических исследований необходимо учитывать принципы, описанные в настоящей главе; их применимость будет определяться в индивидуальном порядке.

 
3. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ
 

Настоящая глава неразрывно связана с другими главами настоящих Правил, а также с требованиями Фармакопеи Союза ("Моноклональные антитела для клинического применения").

 
4. ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ
 
4.1. Разработка моноклональных антител
 

Структуру моноклонального антитела необходимо обосновать с учетом механизма действия, биологической активности и стабильности препарата. Обоснование характеристики структуры моноклональных антител должно содержать по крайней мере рассмотрение пригодности иммунохимических свойств иммуноглобулинов (таких как аффинность, перекрестная реактивность, изотип, аллотип), а также важности и сохранности эффекторной функции. Кроме того, необходимо тщательно рассмотреть риск индукции иммунного ответа у пациентов, особенно если препарат не обладает высокой голомологией с иммуноглобулином человека или при выявлении в структуре потенциально иммуногенных эпитопов, поскольку это может привести к клиническим нежелательным реакциям и (или) изменению терапевтического потенциала.

Клеточный субстрат, используемый для получения моноклональных антител, должен представлять собой стабильную, непрерывно культивируемую линию клеток одного клона, разработанную по технологии рекомбинантной ДНК и (или) другим соответствующим технологиям. Основанием для выбора клеточного субстрата является оценка возможности получения продукта желаемого качества по сравнению с возможностью использования других соответствующих подходов.

Если в качестве субстрата используются клетки, полученные по технологии рекомбинантной ДНК, и характеристика системы, используемой для производства антител, должна соответствовать принципам, указанным в главах 1, 2, 5.1 и 5.2 настоящих Правил.

Если до получения моноклональной клеточной линии в ходе разработки осуществляется одна или более специфичных процедур, например, гибридизация клеток, вирусная трансформация, генная библиотека скрининга в фаговом дисплее, использование технологий in silico, in vitro или in vivo, такие методики не требуют подробного описания. Однако необходимо представить достаточный объем сведений об этих процедурах, позволяющий оценить подлинность и чистоту моноклональной клеточной линии, значимых для безопасности и эффективности препарата (например, аминокислотные или пострансляционные модификации, направленные на модуляцию иммуногенности или эффекторных функций, и сведения о посторонних агентах и потенциальных контаминантах).

Для получения стабильной и непрерывно культивируемой линии клеток, которая будет использована для производства антител может потребоваться иммортализация B-лимфоцитов человека или клеток другого происхождения путем слияния или трансформации клеток. Необходимо тщательно проанализировать выбранный подход с позиций безопасности и эффективности и должным образом обосновать его.

Использование B-лимфоцитов человека в качестве родительских клеточных линий поднимает проблемы, связанные с возможной передачей инфекционных агентов, в том числе агентов вариантной болезни Крейтцфельдта-Якоба, а также других патогенных для человека микроорганизмов. Использование лимфоцитов человека, трансформированных вирусом Эпштейна-Барр (ЕВV), создает дополнительные трудности в связи с наличием вируса ЕВV, способного инфицировать человека.

Гибридома, полученная путем гибридизации B-лимфоцитов человека или клеток другого происхождения с миеломными клетками, может быть использована в качестве клеточного субстрата. Происхождение и установление характеристик родительских клеток необходимо подробно описать и документировать, включая информацию о здоровье доноров, использованных партнерах гибридизации и материалах человеческого или животного происхождения, которые соприкасались с клетками (например, питающие клетки и миеломные клетки).

 

4.2. Производство моноклональных антител
 

4.2.1. Общие положения.

Процесс производства необходимо должным образом описать и валидировать. Валидация должна по меньшей мере включать в себя:

подтверждение того, что процесс способен производить продукт постоянного качества в соответствии с надлежащим образом заданной стратегией контроля качества;

оценку производственных возможностей (например, элиминацию производственных примесей, вирусов);

подтверждение того, что каждая операционная единица функционирует должным образом (например, валидация очистки колонок, асептическая фасовка).

Внимание должно быть направлено на обеспечение внутрипроизводственного контроля (включая показатели качества промежуточных продуктов и параметры процесса), а также на составление спецификаций на активную фармацевтическую субстанцию и готовый лекарственный препарат. Подобный контроль должен позволять отслеживать значимые показатели качества, такие как родственные соединения и примеси (например, правильность или неправильность дисульфидных связей, дезаминирование, окисление, укорочение, агрегаты) или производственные примеси (например, белки, ДНК, белок A клетки-хозяина, бычья сыворотка, остатки питательных сред), а также релевантные параметры процесса (например, загрузка колонки, pH, температура).

Если белок А используется в процессе очистки, источник белка А (например, S. aureus или рекомбинантный белок) и способ его получения (например, очищенный с использованием IgG человека) должны быть надлежащим образом документированы. Если в производстве использовался IgG человека, необходимо подтвердить, что качество IgG пригодно для целевого назначения, особенно с позиций вирусной безопасности.

 

4.2.2. Платформенное производство

Разработка процессов, используемых для производства моноклональных антител, во многом зависит от знания производителем как продукта, так и процесса производства.

Некоторые производители приобрели значительный опыт в области производства моноклональных антител и разработали стратегию производства, основанную на схожих производственных процессах (то есть с использованием определенных клеток-хозяина, культуры клеток, процессов очистки целевого белка и т.д.). Такой подход часто называют платформенным производством.

Подобно любому другому лекарственному препарату, процесс производства биотехнологического лекарственного препарата, который был разработан с использованием платформенного производства, должен быть валидирован к моменту его регистрации. Исследования по валидации должны включать в себя данные, полученные от конечного процесса производства и производственных площадок, которые будут использоваться для производства лекарственного препарата для реализации. Однако при должном обосновании и документировании в целях обоснования или снижения подаваемого объема данных, полученных по результатам конечного коммерческого процесса, допускается представить в уполномоченные органы государств-членов результаты, полученные на основании иного релевантного опыта.

С учетом того, что показатели качества специфичны для каждого препарата и процесса его производства, необходимо в отношении регистрируемого препарата и процесса отдельно подтвердить пригодность аналитических методов и стратегии контроля качества в целом. Как следствие, необходимо тщательно пересмотреть пригодность стратегии контроля качества, являющейся пригодной для анализа других препаратов, полученных с помощью того же подхода платформенного производства, поскольку она может быть не адаптирована к регистрируемым препарату и процессу. Например, производственные примеси, такие как белки клетки-хозяина (БКХ), высоко зависимы от процесса, и методы контроля, использующиеся в отношении данного препарата и процесса, могут оказаться непригодными для других продуктов, использующих то же платформенное производство (например, различные клеточные субстраты, полученные из общей парентеральной клеточной линии, аналогичные культуры и условия очистки).

При изменении утвержденного процесса, основанного на платформенном производстве, необходимо отдельно проанализировать влияние такого изменения на рассматриваемые препарат и процесс. Тем не менее при должном обосновании и документировании в целях обоснования или снижения подаваемого объема данных, полученных в отношении измененных препарата и процесса, допускается представить результаты, полученные на основании иного релевантного опыта. Более того, если с помощью общего платформенного процесса производства получают несколько препаратов, а изменения (например, оптимизация или улучшение процесса) вводятся лишь в один или несколько из них, необходимо представить обоснование принятой стратегии гармонизации или отсутствия таковой.

 

4.2.3. Вирусная безопасность и трансмиссивная губчатая энцефалопатия.

Вопросы вирусной безопасности моноклональных антител, рассмативаемых в настоящей главе, должны соответствовать положениям главы 2 настоящих Правил. Требования, указанные в настоящей главе, касаются моноклональных антител, полученных из гибридомных клеточных линий или генетически модифицированных клеток, продуцирующих моноклональные антитела. Если производство моноклональных антител проводится с использованием животных (например, трансгенных животных или асцитической жидкости), необходимо учитывать требования главы 2 настоящих Правил, в частности приложения N 1 к указанной главе. Исходные клетки (например, клетки-хозяина) должны пройти скрининг на посторонние агенты, то есть на наличие посторонних или эндогенных агентов. Выбор вирусов, которые следует использовать в испытаниях, зависит от вида животных и ткани-источника клеток-продуцентов, а также свойств любого другого биологического сырья, используемого в производстве.

Необходимо в обязательном порядке провести надлежащие валидационные исследования по снижению вирусной нагрузки. В соответствии с главой 2 настоящих Правил, в отношении заявленного на регистрацию лекарственного препарата и его процесса производства необходимо валидировать способность производственных стадий снижать вирусную нагрузку. В целях учета потенциальных и неожиданных препаратспецифичных факторов, влияющих на снижение вирусной нагрузки, подобные валидационные исследования, как правило, проводят с использованием промежуточных продуктов, получаемых в отдельном процессе производства. Тем не менее при должном обосновании и документировании в целях установления и анализа стадий по снижению вирусной нагрузки ценными являются и иные исследования (например, проведенные на основании подхода платформенного производства), которые могут позволить снизить объем подаваемых результатов валидационных исследований. Такие данные можно рассматривать как вспомогательные (например, при изучении потенциального влияния изменяющихся параметров процесса на снижение вирусной нагрузки, свойств колонок после множества производственных циклов, исследований переноса вирусов или исследований по очистке колонок). Во всех случаях производитель должен обосновать значимость таких данных для отдельного продукта. Необходимо представить обоснования возможности использования предварительных собственных данных в отношении нового препарата (например, допустимы ли ссылки на данные по снижению вирусной нагрузки на определенных стадиях процесса, если промежуточный продукт, получаемый на предыдущем этапе, обладает сопоставимыми биохимическими свойствами и подвергается очистке идентичными методами). Производитель должен представить критический анализ производственной стадии, в отношении которой будут использоваться подобные собственные вспомогательные данные, и состава соответствующего промежуточного продукта. По результатам анализа необходимо прийти к однозначному заключению, что в обоих случаях введенная производственная стадия аналогична по способности инактивировать (элиминировать) потенциальные вирусные контаминанты. Если сопоставимость этапов неубедительна или база данных не позволяет исключить препаратспецифичное влияние на способность снижать вирусную нагрузку, необходимо провести подтверждающие циклы, используя препарат-специфичные промежуточные продукты.

Если в разработке или производстве использовались материалы крупного рогатого скота или иных видов животных, источников ТГЭ, необходимо следовать требованиям актов, входящих в право Союза, по минимизации риска передачи агентов губчатой энцефалопатии животных посредством лекарственных препаратов для медицинского применения.

 
4.3. Установление характеристик моноклональные антитела
 

Моноклональные антитела необходимо подробно охарактеризовать. В соответствии с главой 6 настоящих Правил, установление характеристик должно включать в себя определение физико-химических и иммунохимических свойств, биологической активности, чистоты, примесей и количественного содержания моноклональных антител. На момент регистрации лекарственного препарата заявитель должен располагать соответствующим образом охарактеризованными собственными стандартными материалами, которые будут использоваться в биологических и физико-химических испытаниях промышленных серий.

 

4.3.1. Физико-химические характеристики.

Программа установления физико-химических характеристик, как правило, включает в себя определение класса, подкласса, строение легких цепей (каппа и (или) лямбда цепи) и первичной структуры моноклонального антитела.

По результатам секвенирования ДНК необходимо вывести аминокислотную последовательность и с помощью надлежащих методов (например, пептидного картирования, секвенирования аминокислот, масс-спектрометрического анализа) подтвердить ее экспериментально. Необходимо проанализировать вариацию N- и C-концевых последовательностей аминокислот (например, C-концевых лизинов).

Необходимо определить свободные сульфгидрильные группы и дисульфидные мостики, сохранность или правильность дисульфидных связей.

Необходимо установить содержание углеводов (нейтральные сахара, аминосахара и сиаловые кислоты). Кроме того, необходимо проанализировать структуру углеводных цепей, олигосахаридный профиль (профиль ветвления), участки гликозилирования и их занятость.

Как правило, моноклональные антитела имеют один участок N-гликозилирования на каждой тяжелой цепи, расположенный в Fc-фрагменте. Легкая цепь, как правило, не гликозилируется. Однако тяжелые цепи могут содержать дополнительные участки гликозилирования, поэтому необходимо установить их наличие или отсутствие. Необходимо описать структуру гликанов, уделив особое внимание степени маннозилирования, галактозилирования, фукозилирования и сиалилирования. Необходимо определить распределение основных имеющихся гликановых структур (чаще всего G0, G1 и G2).

С помощью подходящей методологии необходимо описать структуру моноклонального антитела высшего порядка.

 

4.3.2. Иммунологические свойства.

Иммунологические свойства антител необходимо всесторонне охарактеризовать. В целях определения их аффинности, авидности и иммунореактивности (включая перекрестную реактивность с другими структурно гомологичными белками) необходимо провести анализ связывания антител с очищенными антигенами и определенными участками антигенов. Необходимо изучить непредусмотренную реактивность (цитотоксичность) для тканей человека, отличных от выбранных мишеней. Используя иммуногистохимические методики в соответствии с приложением к настоящей главе, необходимо установить перекрестную реактивность с тканями человека. В соответствующих случаях допускаются перекрестные ссылки на доклинический и (или) клинический разделы регистрационного досье.

При отсутствии должного обоснования необходимо идентифицировать области, определяющие комплементарность (гипервариабельные участки, CDR).

Необходимо определить эпитоп и молекулу, его несущую. Указанное должно включать в себя биохимическую идентификацию таких структур (например, белок, олигосахарид, гликопротеин, гликолипид) и все возможные исследования по установлению характеристик (аминокислотная последовательность, структура углеводов).

Необходимо изучить способность связываться с комплементом и активировать его и (или) иные эффекторные функции, даже если целевая биологическая активность не требует наличия таких функций.

 

4.3.3. Биологическая активность.

С помощью исследований in vitro и (или) in vivo необходимо определить биологическую активность (то есть специфическую способность препарата оказывать определенный биологический эффект). Необходимо проанализировать механизм действия и значение (последствия) эффекторных функций препарата для его безопасности и эффективности.

Если эффекторная функция антител может являться частью механизма действия и (или) влиять на безопасность и эффективность препарата, необходимо представить подробный анализ АЗКЦ, цитотоксических свойств (например, апоптоза), способности связываться с комплементом и активировать его, прочие эффекторные функции, включая активность связывания с гамма Fc-рецепторами и неонатальными Fc-рецепторами.

 

4.3.4. Чистота, примеси и контаминаты.

Как правило, выделяют несколько источников гетерогенности моноклональных антител (например, изменение C-концевого лизина, образование N-концевого пироглутамата, дезамидирование, окисление, изомеризация, фрагментация, образование нетипичных дисульфидных связей, N-связанный олигосахарид, гликирование), которые приводят к сложному профилю показателей чистоты (примесей), представляющему собой несколько молекулярных структур и вариантов. Такой профиль чистоты (примесей) необходимо оценить с помощью совокупности ортогональных методов и для соответствующих родственных вариантов предусмотреть индивидуальные или суммарные критерии приемлемости.

К таким методам, как правило, относятся определение физико-химических свойств, например, молекулярной массы или размера, профиля изоформ, коэффициента экстинкции, электрофоретических профилей, хроматографических данных и спектроскопических профилей. Кроме того, необходимо предложить подходящие методы для качественного и количественного анализа гетерогенности заряженных вариантов.

Используя комбинацию методов, необходимо должным образом охарактеризовать мультимеры и агрегаты. Образование в лекарственном препарате агрегатов, видимых и невидимых включений является важным и требует изучения и тщательного контроля при выпуске серий и в ходе исследований стабильности. В дополнение к фармакопейным испытаниям на механические включения в целях установления природы включений и их содержания могут потребоваться иные ортогональные аналитические методы.

Необходимо идентифицировать потенциальные производственные примеси (например, БКХ, ДНК клетки-хозяина, остаточное содержание питательных сред, остаточное содержание реактивов, использующихся на последующих этапах обработки) и в зависимости от обстоятельств проанализировать их качественно и (или) количественно.

Необходимо строго избегать и (или) должным образом контролировать содержание контаминантов, включающих в себя все привнесенные посторонние материалы, не являющиеся частью процесса производства (например, микроорганизмы, эндотоксины). При подозрении на наличие провоспалительных контаминантов неэндотоксиновой природы (например, пептидогликанов) необходимо провести дополнительные испытания (например, испытание на активацию моноцитов).

 

4.3.5. Количественное содержание.

С помощью соответствующих физико-химических и (или) иммунохимических методик необходимо определить количественное содержание.

Необходимо подтвердить, что результаты испытания на содержание непосредственно коррелируют с результатами, полученными при испытании на биологическую активность. При наличии такой зависимости в информации о препарате или производственных процессах (например, фасовке) вместо меры биологической активности допускается использовать меру количественного содержания.

 
4.4. Спецификации
 

Спецификации являются составной частью общей стратегии контроля качества продукта, которые составляются для обеспечения его качества и постоянства, при этом продукт должен соответствовать спецификации. Необходимо разработать такие спецификации, которые учитывали бы показатели качества, оказавшиеся значимыми по результатам исследований по установлению характеристик. Выбор включаемых в спецификацию испытаний носит препаратспецифичный характер. Необходимо описать основания установления допустимых диапазонов для критериев приемлемости. В соответствии с главой 6 настоящих Правил необходимо установить критерии приемлемости и обосновать их, учитывая данные, полученные по результатам испытаний серий, изученных в доклинических и (или) клинических исследованиях, серий, использованных при подтверждении воспроизводимости процесса производства, данных результатов исследований стабильности и значимых данных по разработке.

 

4.4.1. Подлинность.

Испытания на подлинность должны быть высоко специфичными и основываться на уникальности молекулярной структуры препарата и (или) иных специфичных свойствах (например, пептидное картирование, антиидиотипный иммуноанализ или иной подходящий метод). С учетом высокой аналогичности константных доменов различных антител в целях установления подлинности могут потребоваться несколько испытаний (физико-химических, биологических и (или) иммунохимических); такие испытания должны позволять различать прочие антитела, которые могут производиться на той же производственной площадке.

 

4.4.2. Чистота и примеси.

В соответствии с разделом 4.3 настоящей главы профиль чистоты (примесей) моноклональных антител может быть сложным и требует анализа с помощью совокупности отрогональных методов, для которых необходимо установить индивидуальные и (или) суммарные критерии приемлемости по родственным вариантам. Например, в целях качественного и количественного выявления заряженных вариантов необходимо использовать методы разделения, основанные на гетерогенности заряда.

Необходимо включить хроматографические и (или) электрофоретические методы, способные обнаружить укорочение, диссоциацию и полимеризацию продукта, а также предложить для указанных показателей количественные пределы.

Необходимо уделить особое внимание подтверждению пригодности использованных аналитических методик для контроля содержания мультимеров и агрегатов.

Принимая во внимание, что гликозилирование может оказывать влияние на фармакокинетику препарата и изменять его иммуногенные свойства, для гликозилирования необходимо установить надлежащие критерии приемлемости. Кроме того, такой контроль в дальнейшем позволит подтверждать постоянство серий препарата.

Как следствие, необходимо тщательно подобрать испытания и критерии приемлемости гликозилирования (например, относительные количества G0, G1 и (или) G2 Fc-фрагментов, степеней гликозилирования, фукозилирования и сиалилирования), принимая во внимание предусмотренное и потенциальное влияния этого показателя на биологическую активность в клинической практике (например, наличие функциональных эффекторных функций, ненужных для реализации целевого механизма действия, гликозилирование Fab-фрагмента).

В стратегию контроля необходимо включить контроль значимых производственных примесей. В некоторых случаях, при должном подтверждении, контроль их содержания допускается осуществлять на промежуточном продукте, на соответствующем этапе производственного процесса. Для некоторых примесей, для которых показано, что с помощью процесса производства удается значительно сократить их содержание, стандартные испытания не требуются. Контроль остаточного белка A, БКХ, остаточной ДНК и иных потенциальных остаточных содержаний сред или очистки, как правило, является частью спецификации. Кроме того, такой контроль служит ценным источником информации по постоянству и функционированию процесса производства.

 

4.4.3. Активность.

Активность (potency) - количественная мера биологической активности, основанная на показателе качества препарата, связанном с его значимыми биологическими свойствами. Соответствующая аналитическая методика определения активности должна являться частью спецификаций на активную фармацевтическую субстанцию и (или) лекарственный препарат и в идеальном случае должна отражать биологическую активность в клинической практике.

В отношении антител, клиническая активность которых зависит исключительно от связывающих (нейтрализирующих) свойств, при достаточном обосновании допускается использовать аналитическую методику определения активности, определяющую связывание с мишенью (то есть методика связывания). Если для клинической активности необходимы эффекторные функции, необходимо использовать биологический метод количественного определения на основе клеток или иную методику, позволяющую определить эффекторные функции. Если биологический метод количественного определения на основе клеток неуместен или комбинация двух методов дает более точные результаты, следует использовать комбинацию двух отдельных методов: первый - с целью определения специфичности, второй - для определения эффекторной функции (например, активация комплемента, связывание с C1q, связывание с Fc-гамма-рецептором).

Несмотря на то что два вида методик определения активности (связывания и на основе клеток) зачастую дают сопоставимые результаты, такие методики не следует считать взаимозаменяемыми, поскольку некоторые свойства препарата могут не влиять на связывание с мишенью (например, гликозилирование, фрагментация), но влиять на дальнейшее распространение сигнала или экспрессию рецептора.

В целях подтверждения постоянства процесса производства значительную ценность представляет специфическая активность (биологическая активность на массу).

 

4.4.4. Количественное содержание.

Используя подходящую методику, необходимо определить содержание фармацевтической субстанции, как правило, по содержанию (массе) белка.

 

4.4.5. Общие показатели.

При необходимости следует изучить внешний вид, растворимость, pH, осмоляльность, извлекаемый объем, стерильность, бактериальные эндотоксины, стабилизатор и воду.

Содержание видимых и невидимых механических включений в лекарственном препарате должно соответствовать требованиям, предъявляемым Фармакопеей Союза.

 
5. ПРЕПАРАТЫ НА ОСНОВЕ МОДИФИЦИРОВАННЫХ
МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ
 

Помимо интактных, немодифицированных моноклональных антител принципы, указанные в настоящих Правилах, могут быть применимы к иным производным от моноклональных антител препаратам (например, фрагменты антител (включая одноцепочечные вариабельные фрагменты (scFv)), гибридные белки, конъюгированные моноклональные антитела, биспецифичные антитела и радиоактивно меченые антитела). Однако их применимость будет определяться в индивидуальном порядке на основании свойств отдельного препарата.

 

Приложение
к главе 10 Правил
проведения исследований
биологических лекарственных
средств Евразийского
экономического союза
 
ПЕРЕЧЕНЬ
ТКАНЕЙ ЧЕЛОВЕКА, РЕКОМЕНДУЕМЫХ ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ
В ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИХ ИЛИ ЦИТОХИМИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ
ПЕРЕКРЕСТНОЙ РЕАКТИВНОСТИ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ

 

Настоящий перечень тканей человека позволяет отразить специфичность антител в иммуногистохимических или цитохимических исследованиях перекрестной реактивности и их клиническое практическое значение и включает в себя в том числе:

миндалину, тимус, лимфатический узел;

костный мозг, клетки крови;

легкие, печень, почки, мочевой пузырь, селезенку, желудок, включая подлежащие гладкие мышцы, кишечник;

поджелудочную железу, большую слюнную железу, щитовидную железу, паращитовидную железу, надпочечник, гипофиз;

головной мозг, периферический нерв;

сердце, поперечнополосатую мышцу;

яичник, яичко;

кожу;

кровеносные сосуды.

 

Глава 11
 
ОЦЕНКА ИММУНОГЕННОСТИ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ БЕЛКОВ, ПОЛУЧЕННЫХ
С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ
 

Количество лекарственных препаратов, являющихся биологическими белками (полученными биотехнологическим путем), неуклонно растет. Они могут вызывать у пациентов нежелательный иммунный ответ, на который влияют различные факторы, в том числе зависящие от пациента, опосредованные заболеванием или лекарственным препаратом. Настоящие Правила содержат указания о выявлении потенциальных причин возникновения и устранении последствий иммуногенности, а также общие указания по проведению систематической оценки иммуногенности при регистрации лекарственных препаратов.

Ввиду неизбежного возникновения у животных иммунного ответа к белкам человека прогностическая ценность доклинических исследований для оценки иммуногенности биологического лекарственного препарата у человека низкая. Несмотря на то что проведение доклинических исследований, направленных на прогнозирование иммуногенности у человека, как правило, не требуется, животные модели могут представлять ценность для оценки последствий иммунного ответа.

В целях измерения иммунного ответа на терапевтические белки необходимо выбрать надлежащую стратегию разработки подходящих методов скрининга и подтверждения наличия антител. Методы должны позволять отличать нейтрализующие антитела от антител, не обладающих такими свойствами, их использование как в основных (опорных) клинических исследованиях, так и в рамках пострегистрационного наблюдения должно быть валидировано.

При тщательном планировании оценки иммуногенности в клиническом центре необходимо систематически набирать данные от достаточного числа пациентов. Предпочтительно, чтобы отбор проб препарата был стандартизирован на протяжении всего исследования (например, отбор проб до начала, во время и по завершении исследования). Схему отбора проб каждого препарата необходимо определять в индивидуальном порядке, учитывая также риски, обусловленные нежелательным иммунным ответом у пациентов. В целях полного понимания клинических последствий иммунного ответа необходимо получить данные о его влиянии на эффективность и безопасность. В последующем вопросы предупреждения иммуногенности необходимо осветить в плане управления рисками.

Требования настоящей главы применимы для различных видов лекарственных препаратов, поэтому общие концепции изучения иммуногенности необходимо адаптировать к каждой отдельной программе разработки в индивидуальном порядке. За разъяснениями заявителям необходимо обращаться за консультацией в уполномоченный орган государства-члена.

 
1. ВВЕДЕНИЕ
 

Большинство биологических белков (полученных биотехнологическим путем) вызывают нежелательный иммунный ответ, который обусловлен рядом факторов. Иммунный ответ - сложное явление, которое помимо образования антител проявляется активацией T-клеток и врожденного иммунитета, влияющих на развитие нежелательных реакций.

Последствия иммунного ответа на терапевтические белки проявляются изменениями от преходящего появления антител без клинических проявлений и вплоть до тяжелых угрожающих жизни состояний. Потенциальными клиническими последствиями нежелательного иммунного ответа являются снижение эффективности терапевтических белков, тяжелые общие иммунные реакции, включая анафилаксию, и для терапевтических белков, применяемых в качестве заместительной терапии, - потенциальная перекрестная реактивность с эндогенным аналогом, если продукция этого аналога сохранилась.

На иммуногенность терапевтических белков влияет множество факторов. Их можно разделить на зависящие от пациента и опосредованные заболеванием или лекарственным препаратом. Зависящие от пациента факторы могут предрасполагать к развитию иммунного ответа у субъекта и включают в себя: основное заболевание, наследственную предрасположенность, иммунный статус, включая иммуномодулирующую терапию и режим дозирования. Опосредованные лекарственным препаратом факторы также могут влиять на вероятность развития иммунного ответа, например, процесс производства, лекарственная форма и состав лекарственного препарата, его стабильность.

Несмотря на то что данные о возможном нежелательном иммунном ответе на терапевтические белки необходимо представить до регистрации, проблемы с иммуногенностью препарата могут возникнуть и на пострегистрационном этапе. В регистрационном досье необходимо представить резюме об изучении иммуногенности в соответствующих обзорных разделах со ссылками на полные данные в соответствующих модулях. В зависимости от иммуногенного потенциала терапевтического белка и редкости заболевания предрегистрационные данные об иммуногенности могут быть ограничены. После регистрации может потребоваться дальнейшая систематическая оценка иммуногенности, которую можно предусмотреть в плане управления рисками.

 
2. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
 

В настоящей главе вводятся общие требования, которые преимущественно касаются установления факта развития нежелательного иммунного ответа на терапевтические белки у пациентов и способов систематической его оценки. Настоящая глава распространяется на белки и полипептиды, их производные, а также препараты, в которых указанные вещества являются компонентами, например, конъюгаты. Эти белки и полипептиды главным образом получают на рекомбинантных или нерекомб